[摘要]目的分析胃癌组织中白细胞介素-32（Interleukin-32,IL-32）与凋亡蛋白酶激活因子-1（Apoptotic Pro⁃tease Activating Factor-1,Apaf-1）的表达及意义。方法回顾性选取2019年1月—2022年12月南通市肿瘤医院收治的100例胃癌患者的临床资料，分别取其胃癌组织标本（胃癌组）和正常胃黏膜标本（癌旁组），通过免疫组化法（Streptavidin-perosidase,SP）检测胃癌标本与正常标本中IL-32、Apaf-1蛋白的阳性表达情况。结果胃癌组IL-32阳性表达率高于癌旁组，Apaf-1蛋白阳性表达率低于癌旁组，差异有统计学意义（P均<0.05）；胃癌患者高中分化程度与低分化程度之间，浸润深度<肌层与≥肌层之间，TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期与分期为Ⅲ、Ⅳ期之间以及有无淋巴结转移之间的IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率对比，差异有统计学意义（P均<0.05）。结论IL-32与Apaf-1蛋白的阳性表达可为胃癌患者的临床诊断和治疗提供重要的参考价值。

　　[关键词]胃癌组织,白细胞介素-32,凋亡蛋白酶激活因子-1,阳性表达

　　Expression and Significance of IL-32 and Apaf-1 Proteins in Gastric Can⁃cer Tissues

　　ZHU Xinghua,CHEN Yali,GUO Yan

　　Department of Pathology,Nantong Cancer Hospital,Nantong,Jiangsu Province,226361 China

　　[Abstract]Objective To analyze the expression and significance of interleukin-32(IL-32)and apoptotic protease ac⁃tivating factor-1(Apaf-1)in gastric cancer tissues.Methods The clinical data of 100 gastric cancer patients admitted to Nantong Cancer Hospital was retrospectively selected,and their gastric cancer tissue specimens(gastric cancer group)and normal gastric mucosa specimens(paracarcinoma group)were taken respectively.The positive expression of IL-32 and Apaf-1 proteins in gastric cancer specimens and normal specimens were detected by immunohistochem⁃istry streptavidin-perosidase(SP).Results The positive expression rate of IL-32 in the gastric cancer group was higher than that of paracarcinoma group,and the positive expression rate of Apaf-1 protein was lower compared with that of the paraneoplastic group,the differences were statistically significant(both P<0.05).There were statistically sig⁃nificant differences in IL-32 and Apaf-1 protein-positive expression rates between high and medium differentiation degree and low differentiation degree,between infiltration depth<muscular layer and≥muscular layer,between TNM stage I andⅡand stageⅢandⅣ,and between with and without lymph node metastasis in gastric cancer patients(all P<0.05).Conclusion The positive expression of IL-32 and Apaf-1 protein can provide important reference value for clinical diagnosis and treatment of gastric cancer patients.

　　[Key words]Gastric cancer tissues;Interleukin-32;Apoptotic protease activating factor-1 protein;Positive expression;Significance

　　胃癌是临床上发病率及病死率较高的消化道恶性肿瘤，其在我国发病率约为5.6%，在恶性肿瘤发病率中位居第2位；病死率约为7.7%，位居恶性肿瘤病死率第3位[1]。胃癌早期缺乏典型性症状，大部分患者早期均未能发现，而确诊时已发展为中晚期，预后差，远期生存率低，仅为7%~34%，早期胃癌5年生存率高达90%以上，因此早期诊断对提高胃癌患者远期生存率有重要的意义[2]。白细胞介素-32（Interleukin-32,IL-32）是一种广泛表达的炎症细胞因子，其可加剧炎症，加快肿瘤生成。凋亡蛋白酶激活因子-1（Apoptotic Protease Activating Factor-1,Apaf-1）是一种促凋亡因子，在调节细胞凋亡中发挥着重要的作用。临床资料显示，IL-32与Apaf-1蛋白参与肿瘤的发生和发展，对胃癌患者的早期诊断、早发现和早治疗有重要的意义[3]。本研究回顾性选取2019年1月—2022年12月南通市肿瘤医院收治的100例胃癌患者的临床资料，分析胃癌组织中IL-32与Apaf-1的表达及意义，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　回顾性选取本院收治的100例胃癌患者的临床资料，其中男64例，女36例；年龄<60岁27例，≥60岁73例；分化程度：高+中分化42例，低分化58例；浸润深度：<肌层24例，≥肌层76例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期39例，Ⅲ+Ⅳ期61例；淋巴结转移情况：转移59例，未转移41例。分别取同一患者的胃癌组织标本和正常（癌旁）胃黏膜标本，胃癌组织标本纳入胃癌组，正常胃黏膜标本作为对照，纳入癌旁组。

　　1.2纳入与排除标准

　　1.2.1纳入标准年龄≥18岁；均给予胃癌根治术切除治疗，术后病理证实为原发性胃癌；临床病理资料均完整；术后生存时间≥3个月；自愿参与并签署知情同意书。

　　1.2.2排除标准患其他原发性恶性肿瘤者；心肝肾功能异常者；近期接受放、化疗者；患血液系统疾病或自身免疫系统疾病者；精神障碍或意识异常者；依从性不高，配合度低者。

　　1.3方法

　　1.3.1试剂采用美国Affinity公司生产的IL-32兔抗人多克隆抗体，采用美国Cell Signal公司生产的Apaf-1兔抗人多克隆抗体，同时采用武汉佰乐博生物技术有限公司生产的免疫组化（Streptavidin-perosidase,SP）试剂盒。

　　1.3.2染色方法将备好的组织标本放入甲醛溶液中进行固定，脱水后给予石蜡包埋，之后进行切片，厚度约为4μm，严格按照试剂盒说明书完成操作，将阳性胃癌切片作为阳性对照组，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照组。

　　1.4观察指标

　　IL-32、Apaf-1蛋白在低倍与高倍光学显微镜下显示主要定位于细胞质中，显微镜下观察到清晰的棕黄色颗粒或黄色颗粒即表示存在阳性反应。通过5个不同高倍显微镜(×400）观察每一张切片，依据阳性细胞数占比结果与染色强度高低结果判定IL-32和Apaf-1蛋白的阳性表达情况。①阳性细胞数评分：0分：阳性细胞数所占比例<5%；1分：所占比例为5%~<25%；2分：所占比例为25%~<50%；3分：占比≥50%。②染色强度高低结果评分标准：0分：阴性，无阳性着色；1分：弱阳性，呈现淡黄色；2分：阳性，呈现棕黄色；3分：强阳性，呈现棕褐色。上述两项评分结果相乘所得的结果为最终阳性表达结果，若最终评分>1分，则表示结果为阳性（+），若最终评分为0~1分，则表示结果为阴性（-）。

　　1.5统计方法

　　使用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计数资料（IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率等）用例数（n）和率（%）表示，行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1胃癌组与癌旁组IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率比较

　　胃癌组IL-32阳性表达率高于癌旁组，Apaf-1蛋白阳性表达率低于癌旁组，差异有统计学意义（P均<0.05）。见表1。

　　2.2胃癌不同临床病理参数患者IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率比较

　　胃癌患者不同性别、不同年龄IL-32、Apaf-1蛋白阳性表达率对比，差异无统计学意义（P均>0.05）。低分化癌患者、肿瘤浸润深度≥肌层患者、Ⅲ期及Ⅳ期患者、淋巴结转移患者的IL-32阳性率高于高+中分化程度、浸润深度<肌层、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期以及无淋巴结转移患者，Apaf-1蛋白阳性率低于高+中分化程度、浸润深度<肌层、TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期以及无淋巴结转移患者，差异有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

　　3讨论

　　胃癌是一种比较常见的恶性肿瘤，国内关于胃癌发病原因的研究较多，大多数认为与饮食因素、环境因素、遗传因素、癌前病变及幽门螺杆菌感染等有密切的关系，但目前该病仍未有明确的发病机制[4-5]。临床试验表明，胃癌的发病机制与炎症及细胞凋亡异常有密切的关系，其中炎症细胞因子IL-32与促凋亡因子Apaf-1蛋白是胃癌发生、演变及转移的关键因素[6-7]。

　　李佳欣等[8]在临床试验中对比正常胃黏膜上皮组织和胃癌组织的IL-32与Apaf-1蛋白表达情况，结果显示，IL-32阳性表达率为（38.3%vs 70.0%），Apaf-1蛋白阳性表达率为（75.0%vs 31.7%）（P均<0.05），提示胃癌组织中IL-32处于高表达水平，相反，Apaf-1蛋白处于低表达水平，两者有明显的负相关关系，且两者与胃癌TNM分期、分化程度、浸润深度、是否淋巴结转移显著相关。本研究结果显示，胃癌组织与正常组织IL-32阳性表达率分别为73.00%、35.00%（P<0.05），提示胃癌组织中IL-32呈现阳性高表达，而正常组织中IL-32的表达量较少，与李佳欣等报道的IL-32表达情况基本一致，究其原因，可能与IL-32参与胃癌的发生及侵袭转移等有关。国内文献报道，约有25%的患者，其肿瘤的发生和癌变主要由慢性炎症所致，IL-32是临床上新型的促炎症细胞因子，是多种炎症性疾病发生的主要原因，也是多种恶性肿瘤的病原之一[9-11]。IL-32可通过激活激活蛋白-1、激活核因子κB、半胱氨酸天冬蛋白酶、活化p38有丝分裂原蛋白激酶等途径促进恶性肿瘤的发生[12-13]。本研究显示，胃癌组织中Apaf-1蛋白阳性表达率（29.00%）显著低于正常组织（77.00%）（P<0.05），提示胃癌组织中Apaf-1蛋白呈现低表达状态，而在正常组织中Apaf-1蛋白呈现高表达状态，与李佳欣等[8]报道的Apaf-1蛋白表达基本一致。Apaf-1是一种广泛存在于人体正常组织中的促凋亡因子，对细胞凋亡具有显著的激活促进作用，其主要通过线粒体途径诱导和加快肿瘤细胞的凋亡，有效抑制癌细胞的生长和转移，而在胃癌组织中Apaf-1蛋白呈现低表达状态，导致癌细胞凋亡存在阻碍，形成有利于癌细胞生存和繁殖的环境[14-16]。此外，本研究显示IL-32、Apaf-1蛋白的表达与肿瘤浸润、分化、分期、转移等临床病理参数有密切的关系，与李佳欣等[8]报道基本一致，提示L-32与Apaf-1可反映肿瘤的生长和发展状况，两种因子可起到协同作用，加快胃癌细胞生长。

　　综上所述，在胃癌组织的生长和发展中，IL-32的高表达与Apaf-1蛋白的低表达可加快胃癌组织的侵袭和转移，增加患者的病死率，因此及时监测IL-32与Apaf-1蛋白的表达状态，对患者的临床诊疗及预后改善有重要的作用，对降低病死率具有一定的积极意义。

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