[摘要]目的评估丙型肝炎病毒检测应用酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）联合荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）检测的应用价值。方法选取2022年8月—2023年8月滕州市疾病预防控制中心接诊的90例疑似丙型肝炎病毒患者为研究对象，采用ELISA联合荧光定量PCR检测，以丙型肝炎病毒（Hepatitis Virus C,HCV）RNA检测结果作为“金标准”，分析检测方式的应用价值。结果HCV RNA检测结果显示，阳性率为47.78%，ELISA检测的阳性率40.00%，荧光定量PCR检测发现阳性量率42.22%，联合检测的阳性率46.67%。ELISA检测与荧光定量PCR检测在灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值方面比较，差异无统计学意义（P均＞0.05）。联合检测的灵敏度为93.02%、准确度为94.44%、阳性预测值为95.24%以及阴性预测值为93.75%，显著高于ELISA检测的67.44%、76.67%、80.56%、74.07%，联合检测的灵敏度、准确度显著高于荧光定量PCR检测（76.74%、83.33%），差异有统计学意义（P均＜0.05）。结论丙型肝炎病毒检测应用ELISA联合荧光定量PCR检测检出率高。

　　[关键词]酶联免疫吸附试验；联合检测；荧光定量聚合酶链式反应；丙型肝炎病毒

　　Study of ELISA Combined with Fluorescent Quantitative PCR for Detec⁃tion of Hepatitis C Virus

　　LIU Bo1,CHEN Changlan2

　　1.Department of Health Supervision,Tengzhou Center for Disease Control and Prevention,Tengzhou,Shandong Prov‐ince 277599 China;2.Department of Laboratory,Tengzhou Center for Disease Control and Prevention,Tengzhou,Shan‐dong Province,277599 China

　　[Abstract]Objective To evaluate the application value of enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)combined with fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PCR)for hepatitis C virus detection.Methods 90 suspected hepatitis C virus patients treated by Tengzhou Center for Disease Control and Prevention from August 2022 to August 2023 were selected as the research objects.ELISA combined with fluorescence quantitative PCR test was used,and hepatitis virus C(HCV)RNA test results were taken as the"gold standard"to analyze the application value of the de‐tection method.Results The HCV RNA test results showed that the positive rate was 47.78%,the positive rate of the ELISA test was 40.00%,the Quantitative fluorescence PCR found a 42.22%positive rate,the positive rate of the com‐bined test was 46.67%.The differences between ELISA and quantitative PCR in sensitivity,specificity,accuracy,posi‐tive and negative predictive value were not statistically significant(all P＞0.05).The sensitivity of the combined test was 93.02%,with an accuracy of 94.44%,a positive predictive value of 95.24%and a negative predictor of 93.75%,which were significantly higher than the 67.44%,76.67%,80.56%,74.07%detected by ELISA;the sensitivity and ac‐curacy of the combined test were significantly higher than that of the fluorescence quantitative PCR test(76.74%,83.33%),and the differences were statistically significant(all P＜0.05).Conclusion The application of ELISA com‐bined with fluorescence quantitative PCR for the detection of hepatitis C virus has a high detection rate.

　　[Key words]Enzyme linked immunosorbent assay;Combined assay;Fluorescence quantitative Polymerase chain reaction;Hepatitis C virus

　　丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的疾病，患者在早期没有任何的临床表现，以至于没有及时加以治疗，患者病情持续恶化，并向周边的人传播[1]。丙型肝炎病毒在全球范围内广泛存在，是一个全球性的公共健康问题。随着丙型肝炎病毒患者病情的发展，大多数感染者会出现慢性炎症，甚至出现肝纤维化、肝癌等，严重危害患者及其家人的生命和健康[2-3]。因此，对丙型肝炎病毒的早期检测与正确的诊断对于提高患者生存质量具有十分重大的意义。酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immuno‐sorbent Assay,ELISA）是目前丙型肝炎病毒感染的主要检查手段，检出速度快，已在临床推广。然而，随着近年来检测方法的不断发展，荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）检测在丙型肝炎病毒的检测中同样发挥了重要价值[4-5]。ELISA联合荧光定量PCR检测可以更好地提高丙型肝炎病毒诊断准确率，具有较高的临床应用价值[6]。本研究选取2022年8月—2023年8月滕州市疾病预防控制中心接诊的90例疑似丙型肝炎病毒患者为研究对象，旨在探究丙型肝炎病毒检测应用ELISA联合荧光定量PCR检测的应用价值，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　选取本院接诊的90例疑似丙型肝炎病毒患者为研究对象，全部接受ELISA联合荧光定量PCR检测。其中女38例，男52例；年龄21~55岁，平均（38.49±5.90）岁。研究经过医院医学伦理委员会批准，患者或家属知情同意（2012145）。

　　1.2方法

　　ELISA检测：向试剂盒中添加100μl的样品稀释液，向对应的孔中添加10μl的待测样本。在此基础上，分别建立2个阳性对照孔及3个阴性对照孔，每个对照孔中分别添加阳性或阴性对照100μl，然后封板，放入37℃温育1 h。5次洗涤处理之后，将100μl的酶标物质添加到每个孔中，相同的温度培养0.5 h，再清洗5遍之后，将50μl的基质缓冲溶液添加到每个孔中。混合均匀，37℃温育0.5 h，每个孔中添加50μl的终止溶液，用酶标仪检测，并严格遵循要求进行逐一操作。

　　荧光定量PCR检测：应用核酸试剂盒，将200μl的样本添加到反应孔中，再添加蛋白酶k10μl及核酸助沉试剂4μl，进行自动化处理。完成上述操作后，将上清液20μl装入扩增管，开展PCR定量扩增。1.3观察指标

　　①以丙型肝炎病毒（Hepatitis Virus C,HCV）RNA检测结果作为“金标准”，分析ELISA检测、荧光定量PCR检测、联合检测的检出情况。

　　②分析ELISA检测、荧光定量PCR检测、联合检测的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值。灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%。特异度=真阴性例数/（假阳性例数+真阴性例数）×100%。准确性=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%。阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%。阴性预测值=真阴性例数/（假阴性例数+真阴性例数）×100%。

　　1.4统计方法

　　采用SPSS 23.0统计学软件处理数据，计数资料（检测结果及诊断效能）用例数（n）和率（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1不同检测方法的检出情况比较

　　HCV RNA检查结果显示，43例阳性（47.78%）、47例阴性（52.22%）；ELISA检测显示，36例阳性（40.00%）、54例阴性（60.00%）；荧光定量PCR检测显示38例阳性（42.22%）、52例阴性（57.78%）；联合检测显示，42例阳性（46.67%）、48例阴性（53.33%）。见表1。

　　2.2不同检测方法的诊断效能分析

　　ELISA检测与荧光定量PCR检测在灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值方面差异无统计学意义（P均＞0.05）。联合检测的灵敏度、准确度、阳性预测值以及阴性预测值显著高于ELISA检测，差异有统计学意义（P均＜0.05）。联合检测的灵敏度、准确度显著高于荧光定量PCR检测，差异有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。

　　3讨论

　　丙型肝炎是由丙型肝炎病毒引起的传染性疾病，它可以通过血液和输血等途径进行传播，大多数丙型肝炎患者在早期没有任何表现，但是当疾病发展到一定程度时，可能会出现发热、肝功能异常、消化道损伤等症状[7-8]。丙型肝炎病毒感染与乙肝病毒感染相比，临床表现较轻微，因此常被患者忽略，不能得到早期的诊断和治疗，造成病情进展，有些患者还会发展成肝硬化、肝癌[9-10]。因此，正确地选用适当的检测方法，对丙型肝炎患者进行早期检测与确诊就变得十分重要。

　　ELISA是目前临床上普遍使用的一种常规检验手段，具有简便、便捷的特点，适合大规模采集丙型肝炎病毒，但由于反应温度、外源性物质、试剂盒质量和内源性物质等多种因素的制约，很难对患者体内的病毒进行定量分析[11-12]。丙型肝炎病毒经血传播是目前公认的丙型肝炎病毒的主要传染方式，但仍有一些丙型肝炎病毒患者的感染方式不明，ELISA法仅表明抗体为阳性就可以判断为丙型肝炎病毒，但如果没有明显的症状或诱发因素，则必须通过证实试验才能将其剔除，同时也不能确定患者是否存在着病毒的复制[13-15]。因此，许多学者主张将ELISA联合荧光定量PCR检测结合起来用于丙型肝炎病毒的诊断，以保证检验的可信度。荧光定量PCR是一种新兴的检测方法，它通过在反应系统中添加具有荧光的探针，通过对其进行荧光检测，从而实现对目标分子的检测[16]。已有研究表明，基于实时荧光PCR的方法是一种封闭的方法，可有效降低样本的污染，提高检测品质[17]。荧光定量PCR检测利用荧光分子对丙型肝炎病毒进行定量分析，为丙型肝炎病毒感染的早期诊断和预后评估奠定基础。丙型肝炎病毒检测中，ELISA联合荧光定量PCR检测可以充分体现两种诊断的优势，也可以弥补单项检测的不足之处，对于早期诊断丙型肝炎病毒具有重要价值。丁燕[18]的研究中，ELISA与PCR联合检测的准确度为94.56%，特异度为96.00%，阳性预测值为95.12%，与本研究结果一致，在本研究中，联合检测的准确度为94.44%，特异度为95.74%，阳性预测值为95.24%。

　　综上所述，ELISA联合荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒具有较高的准确率，应用价值较高。

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