[摘要] 目的 评估半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应 用效能。 方法 选取 2022 年 9 月—2023 年 9 月于平邑县结核病防治所就诊的 90 例疑似肺结核患者为研究对 象，采用 Xpert MTB/RIF 技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测 90 例疑似肺结核患者痰标 本，对检测结果进行比较。 结果 以固体培养结果作为金标准，痰培养阳性率 85.56%，阴性率 14.44% 。Xpert MTB/RIF 阳性率 84.44%、阴性率 15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率 48.88%、阴性率 51.11% 。Xpert MTB/ RIF 检验的灵敏度 97.40%、准确度 96.67%、阳性预测值 98.68% 以及阴性预测值 85.71% 均高于涂片抗酸染色 法检验 50.64%、52.22%、88.64%、17.39%，差异有统计学意义(χ2=43.768、46.722、5.922、22.546.P 均<0.05)。 结论 与涂片抗酸染色法相比，在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。

　　[关键词] 涂片抗酸染色法,活动性肺结核,早期检验,半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检测(Xpert MTB/ RIF)

　　肺结核是一种常见的慢性传染病，发病后多表现为咳嗽 、咳 痰 ≥2 周、咳血或血痰是肺结核的主要局部症状[1]。近年来，由于医学科技的快速发展，肺结核的诊断方法日益增多，而痰培养是 “金标准”，但由于该方法耗时较久，样本采集方法 和操作气溶胶污染都可能对检验结果产生一定的 干 扰[2] 。 Xpert MTB/RIF 检 验 、涂片抗酸染色法检验是活动性肺结核的常用诊断方法，Xpert MTB/RIF具有较高的检出率[3] 。Xpert MTB/RIF 检 测 周 期短，自动化程度高，结核分枝杆菌灵敏度高，对活动性肺结核的早期诊断有较好的指导意义[4]。为评析Xpert MTB/RIF方法与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的有效性，本次研究选 取 2022 年 9 月—2023 年 9 月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象开展调研。现报道如下。

　　1 资料与方法

       1.1 一般资料

　　选择于本院就诊的 90 例疑似肺结核患者为研 究对象，均提供半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检 测(Xpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色法检验。其中， 男 61 例，女 29例;年龄 28~78 岁，平均(50.34±6.56) 岁。研究经所医学伦理委员会批准同意(PYXJFS- JY-2023-011)。

　　1.2 纳入与排除标准

　　纳入标准：均符合肺结核的诊断标准[5];患者具 有良好的沟通与表达能力;患者均自愿参与本次研 究。排除标准：多器官功能障碍患者;合并传染性 疾病患者;危重症患者;癌症患者。

　　1.3 方法

　　90 例疑似肺结核患者，均提供Xpert MTB/RIF 方法、涂片抗酸染色法检验。

　　半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检 测(Xpert MTB/RIF )：Xpert MTB/RIF 反应盒及样品试剂 (Sample Reagent, SR)均购自美国 Cepheid 公 司 。 使用仪美科技生产的全自动实时荧光 PCR 仪(型 号：GXIV-4N3-6)。在进行操作之前，将生物安全柜中的紫外线灯照射台面，时间为 30 min。 后启动生物安全柜，运行 5 min 后，检查安全柜的运行 是否正常，使用乙醇浓度为 75% 进行台面消毒处 理。准备相关材料，放置在生物安全柜中。在反应盒的侧壁和相应的处理管上标记痰液标本序号。采集痰标本放置在有螺旋盖的前处理管中， 前处理管中添加相当于痰标本两倍体积的SR痰标本处理液。后将处理管的螺旋盖旋紧。生物安 全柜中前处理管在涡旋振荡器上涡旋振荡。将前处理管中的痰液标本静温处置 15 min，使痰液标本充分液化 ，静 置 10 min。 如果出现细小块状以及未液化的标本 ，需要重复上述操作使其溶解 。 清洁台面，将反应盒移至扩增区，完成检测。

　　涂片抗酸染色法检验：采用乙醇脱脂处理，干 燥清洁后备用。将承载痰标本的容器打开后，预 防出现气溶胶以及标本外溢 。将痰标本中的干 酪 样 脓 样 以 及 可 疑 部 分 约 0.05 mL在玻片的正面轻轻环状涂抹均匀，制作成痰膜。将制作完毕的痰膜静置在生物安全柜中自然干燥，后行染色处理。

　　1.4 观察指标

　　将痰培养法作为金标准，对比分析 Xpert MTB/ RIF 检验、涂片抗酸染色法检验的阳性检出率= 阳性例数/总例数 ×100%，阴性检出率=阴性例数/总例数×100% 。

　　对比分析半巢式全自动实时荧光定量 PCR 检 测(Xpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色法检验的应用效 能。灵敏度 = 真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例 数)×100%。特异度 = 真阴性例数/(假阳性例数+真 阴性例数)×100%。准确性 =(真阳性例数+真阴性 例数)/(假阳性例数+真阴性例数+真阳性例数+假 阴性例数)×100%。阳性预测值=真阳性例数/(真阳 性例数+假阳性例数)×100%。阴性预测值=真阴性 例数/(假阴性例数+真阴性例数)×100% 。

　　1.5 统计方法

　　使用 SPSS 23.0 统计学软件对数据资料处理分 析 ，计 数 资 料 用 例 数(n)和 率(%)表 示 ，行 χ2 检 验，P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 对比分析 Xpert MTB/RIF 检验、涂片抗酸染色 法检验的诊断结果

　　痰培养法显示，77 例阳性(阳性率 85.56%)、13 例阴性(阴性率 14.44%)。 Xpert MTB/RIF 方法检验 76 例阳性、14 例阴性。涂片抗酸染色法检验 44 例 阳性、46 例阴性。见表 1.

　　2.2 对比分析 Xpert MTB/RIF 检验、涂片抗酸染色法检验的应用效能

　　Xpert MTB/RIF 检验的灵敏度、准确度、阳性预 测值以及阴性预测值均高于涂片抗酸染色法检验， 差异有统计学意义(P 均<0.05)。 Xpert MTB/RIF 检 验与涂片抗酸染色法检验特异度对比，差异无统计 学意义(P>0.05)。见表 2.

　　3 讨论

　　肺结核主要由结核分枝杆菌感染导致。肺结 核的发病率逐年升高，如果得不到及时的诊治，将 会对患者的生命和健康产生很大的危害[6]。对活动 性肺结核患者进行痰中结核分枝杆菌的测定，对于 寻找感染源、制订治疗方案及评估疗效具有十分重 要的作用。

　　涂片抗酸染色法显微镜检验是目前临床上常用 的一种方法，操作简便，但操作人员会受到一定的主 观因素的影响，导致灵敏度下降。痰培养法的诊断 准确率很高，但实验过程繁琐[7-8]。肺结核以痰液培 养为“金标准”，其检出率很高，但其需要很久的时 间，会延误患者的最佳治疗时间，并且会导致疾病的 恶化，并不能区分结核分枝杆菌和非结核性分枝杆 菌，会出现假阳性和假阴性的情况。而 Xpert MTB/ RIF 以其特异性高，操作简便，快速等优点受到广大 医师和患者的欢迎[9-10]。涂片抗酸染色法是最传统 的一种有效的检测技术，通过“染-洗片-复染”过程， 可以对分枝杆菌染色，在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其他细菌呈蓝色，从而增加检测的可靠性，但 其检测结果容易受到外部环境的干扰，导致一些患 者无法达到预期的筛查效果，容易造成漏诊和误 诊[11-12]。目前，Xpert MTB/RIF 已越来越多地用于活 动性肺结核早期检验中，Xpert MTB/RIF 基于荧光试 剂，实现了对 PCR 全流程的实时监测，同时检测全流 程的 Ct 值与初始复制数量之间存在着良好的直线相 关 性 ，能够有效地提升检测的准确性[13-14] 。袁 桢 等[15] 在研究中，荧光定量检验 PCR 诊断活动性肺结 核的灵敏度 100.00% 及准确度 98.75% 均高于涂片抗 酸染色法(P 均<0.05)。其研究与本次研究结果一致，本次研究中Xpert MTB/RIF检验的灵敏度 97.40%、准确度 96.67% 高于涂片抗酸染色法检验(P 均<0.05)。提示 Xpert MTB/RIF 在活动性肺结核的 诊断中具有较高的临床价值，可用于肺结核的早期筛选。

　　综上所述，活动性肺结核早期检验中半巢式全 自动实时荧光定量 PCR 检测(Xpert MTB/RIF)的应 用效能高于涂片抗酸染色法的应用研究。

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