[摘要] 目的 研究探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值 。方法 选取 2020 年 1 月—2021 年 3 月镇江市第三人民医院收治的 378 例肺结核患者为研究对象，依次完成传统罗氏固体药物敏感性检测(比 例法)、探针熔解曲线技术检测常用的 6 种药物耐药结果，包含利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、 阿米卡星，和比例法进行对比，计算探针熔解曲线技术检测 6 种药物的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预 测值、符合率与约登指数 。结果 与比例法作比较，熔解曲线技术检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性 预测值 、阴性预测值 、符合率 、约登指数分别为 91.70 % 、98.10 % 、61.10 % 、99.70 % 、97.90 % 、0.898;异烟肼是 87.90 % 、94.20 % 、59.20 % 、98.80 % 、93.65 % 、0.821;乙胺丁醇是 87.50 % 、97.03 % 、38.89 % 、99.72 % 、96.83 % 、 0.845;链 霉 素 是 91.30 % 、98.19 % 、87.50 % 、98.79 % 、97.35 % 、0.895;氧 氟 沙 星 是 94.74 % 、98.89 % 、81.82 % 、 99.72 % 、98.68 % 、0.936;阿米卡星是 80.00 % 、99.46 % 、66.67 % 、99.73 % 、99.21 % 、0.795 。结论 探针熔解曲线 在耐药结核病快速筛查中应用，具有较高敏感度及特异度，有利于临床早期识别耐药现象。

　　[关键词] 耐药结核病,探针熔解曲线,利福平,异烟肼,乙胺丁醇,链霉素,氧氟沙星,阿米卡星

　　结核病属于传染性疾病 ，也是危害人类生命健康的严重致死性疾病，尤其是耐药结核病 [1] 。 2019年世界卫生组织报告显示，全球新发结核病1060万，中国排第三，新发结核病78.0万[2] 。新 发结核病患者中 ，有一半以上属于新发耐多药结核病[3-4] 。 早期确诊结核病，及时发现耐药结核病 ，制订并实施科学有效治疗 ，是控制病情 ，改变生存结局的唯一方案[5-7] 。 为提高结核病治疗效果 ，需在确诊后尽早通过相关方法进行检测 ，明 确结核病患者的各种药物耐药情况 ，为临床科 学 、合理用药提供详细 、全面信息 ，指导临床用 药 ，提高结核病治疗效果 。本研究选取2020年1月—2021年3月镇江市第三人民医院检验科收治的378例肺结核患者为研究对象 ，分析探针熔解曲线在耐药结核病快速筛查中的临床应用价值 ，现报道如下 。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　选取本院检验科收治的 378 例肺结核患者为研 究 对 象 。男 223 例 ，女 155 例 ;年 龄 20~76 岁 ，平 均 (48.35±4.72)岁;病程 1~ 15 年 ，平 均( 8.34±1.28)年 。 本研究经医学伦理委员会审核批准(2023-37-01)， 患者及家属知情同意。

　　1.2 纳入与排除标准

　　纳入标准：资料完整详细;配合完成检查;精神 状态正常。

　　排除标准：检查不 配合 的 患 者 ;提供样本 污染 的患者;不配合本研究的患者。

　　1.3 方法

　　1.3.1 仪器及试剂广东体必康 BACspreader 1100C 细菌超声分散计数仪、结核分枝杆菌(Mycobacte ‐ rium Tuberculosis, MTB )核酸提取试剂盒 、聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR )熔解曲线法耐药突变检测试剂盒、厦门致善Lab-Aid 824s磁珠法核酸自动提取仪与配套荧光定量PCR检测系统、珠海贝索罗氏培养基、二级生物安全柜等 。

　　1.3.2 检测方法 比例法：严格遵循《结核病实验室检 验规程》中的要求完成罗氏固体药物敏感性检测 。 探针熔解曲线检测技术：严格遵循厦门致善荧光 PCR 熔解 曲 线 法 检测结 核 分枝 杆 菌对 药 物 检测试 剂说明书操作及结果进行判断，若是痰标本则通过 Lab-Aid 824s 磁 珠 法 核 酸 自 动 提 取 仪 完 成 纯 化 MTB DNA 提 取 工 作 ，在 PCR 反 应 管 添 加 标 记 有荧 光基团及淬灭基团的特异性寡核苷酸探针，于 PCR 扩增期间进行荧光值实时监测，结合靶序列熔点变 化判断是否为野生株或耐药突变。

　　1.4 观察指标

　　以比例法为金标准，计算熔解曲线技术检测的 敏感 度 [真 阳性 例 数/(真 阳性 例 数 +假 阴性 例 数)× 100%]、特 异 度 [ 真 阴 性 例 数/(假 阳 性 例 数 + 真 阴 性 例数)×100%]、阳性预测值[真阳性例数/(真阳性例 数+假阳性例数)×100%]、阴性预测值[真阴性例数/ (假阴性例数+真阴性例数)×100%]、符合率[(真阳 性例数+假阴性例数)/(真阳性例数+假阴性例数+ 假阳性例数+真阴性例数)×100%]、约登指数(灵敏 度+特异度-1)，涉及药物 6 种，是利福平 、异烟肼 、 乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星、阿米卡星。

　　1.5 统计方法

　　应用 SPSS 18.0 统计学软件进行分析，以传统的 比例法(罗氏固体药物敏感性检测)作为金标准对 照，计算荧光 PCR 熔解曲线法技术检测 6 种药物耐 药的敏感性 、特异度 、阳性预测值 、阴性预测值 、符 合率、约登指数。

　　2 结果

　　与比例法比较 ，熔解 曲线技术 检测利福平 、异 烟肼 、乙胺丁醇 、链霉素 、氧氟沙星 、阿米卡星耐药 性的敏感度 、特异度 、阳性预测值 、阴性预测值 、符 合率、约登指数见表 1.

　　3 讨论

　　受人口流动性持续增大、人们生活观念及性观念改变等影响，结核病与艾滋病的流行趋势日益上升，防治形式更为严峻[8] 。鉴于结核病危害性较大，需早期采用有效技术筛查疾病，及时发现结核病的存在，早期进行有效治疗[9] 。世界卫生组织报道显示 ，中国属于耐药结核病高负担国家[1]。但传统结核病诊断、检测方法已经无法满足现今严峻的结核病防治形势 ，尤其是耐药结核病[11]。世界卫生组织的相关报告显示，异烟肼耐药结核患者的增长速度更明显[12] 。针对这一情况临床推广应用 GeneXpert MTB/RIF检测，但该检测技术有限检测利福平耐药结核 ，用于异烟肼耐药 结核筛查，存在一定的漏诊率，部分患者的病情容 易耽误[13] 。现今国内基层医院常用的耐药结核病筛查方法较多，包含表型检测方法 、基因型检测方法。表型检测方法以传统比例法(罗氏固体药敏感性检测方法)、液体法(全自动培养仪 BACTEC MGIT 960 检测方法)为主，基因型检测方法以 GeneXpert MTB/RIF技术与基因芯片法等为 主 。若应用传统表型检测方法展开筛查工作 ，需 进行结核分枝杆菌培养 、药物敏感试验，具有较好 的准确性 、重复性，是现今诊断结核病的金标准方 法，但对实验室生物安全级别有较高要求，且结核 分枝杆菌的生长速度较慢 ，获取检测报告的时间较长，多 在 2~6 周出具报告，严重影响患者早期治疗。为达到快速检测耐药结核病的目的，临床医师将目光投入分子检测技术 。

　　现今分子诊断方法较多，包含线性探针反向杂 交法 、实时荧光 PCR 法以及探针熔解曲线法等[14] 。 探针熔解曲线法是现今比较推崇的方法 ，具有操 作简单 、便捷 、快速 、准确与经济等多项优点，可快 速检测结核分枝杆菌的利福平及异烟肼等耐药突 变基因 ，适合大批量样本筛查工作 。但从临床应用可发现 ，现今探针熔解曲线技术主要用于利福 平 、异烟肼两种耐药结核病筛查种，但在乙胺丁醇 以及链霉素耐药结核病筛查种的应用较少 。朱玉 梅 等[15]的研究对 耐药肺结核的多色探针熔解曲线分析技术价值展开分析 ，其中氧氟沙星的敏感度 是 87.0 % 、特异度是94.0 %，认为该技术具有显著应用价值 。本研究赞成上述观点，研究结果显示， 应用探针熔解曲线技术检测后 ，利福平敏感度为91.70 % 、特异度为98.10 % 、符合率为97.90 % ，异烟肼敏感度为87.90 % 、特异度为94.20 % 、符合率为93.65 % ，乙胺丁醇敏感度为87.50 %、特异度为97.03 % 、符合率为96.83 % ，链霉素敏感度为91.30 % 、特异度为98.19 % 、符合率为97.35 % ，氧氟沙星敏感度为 94.74 % 、特 异 度 为 98.89 % 符合率为98.68 % ，阿米卡星敏感度为 80.00 % 、特异度为 99.46 % 、符合率为 99.21 %，6 种药物耐药结核病 的筛查敏感度 、特异度与符合率均较高，可见该技 术的应用价值显著 。但在应用该检测法的时候， 必须重视相关问题，部分痰标本中的MTB含量比检测下限更低的时候 ，会导致标本表型药敏试验 为耐药 ，但分子耐药显示敏感 ，导致测序结果不 一致 。

　　综上所述，探针熔解曲线在耐药结核病快速筛 查中的临床应用效果显著。

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