【摘要】目的：分析高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、糖基化终末产物受体(RAGE)水平与子痫前期病情程度的相关性。方法：回顾性分析2020年2月至2021年2月该院收治的63例子痫前期患者的临床资料，根据子痫前期病情程度分为轻度组31例和重度组32例，另选取32名正常妊娠孕妇为对照组。检测三组HMGB1、RAGE蛋白表达水平，分析HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性。结果：重度组、轻度组胎盘组织和血清中HMGB1、RAGE蛋白表达水平均高于对照组，且重度组高于轻度组，差异均有统计学意义(P<0.05)；子痫前期患者HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关(r>0，P<0.05)。结论：HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关。

　　【关键词】HMGB1；RAGE；子痫前期；病情程度；相关性

　　【Abstract】Objective:To analyze correlations among high mobility group protein B1(HMGB1)and glycation end product receptor(RAGE)levels and severity of preeclampsia.Methods:The clinical data of 63 patients with preeclampsia admitted to this hospital from February 2020 to February 2021 were retrospectively analyzed.According to the severity of preeclampsia,they were divided into mild group(31 cases)and severe group(32 cases);another 32 normal pregnant women were selected as control group.The expression levels of HMGB1 and RAGE proteins in the three groups were detected,Analyzing the correlation between HMGB1,RAGE levels and the severity of preeclampsia.Results:The expression levels of HMGB1 and RAGE proteins in placenta and serum of the mild group were higher than those of the control group,those of the severe group were higher than those of the mild group,and the differences were statistically significant(P<0.05).The levels of HMGB1 and RAGE in the patients with preeclampsia were positively correlated with the severity of preeclampsia(r>0,P<0.05).Conclusions:The levels of HMGB1 and RAGE are positively correlated with the severity of preeclampsia.

　　【Keywords】HMGB1;RAGE;Preeclampsia;Severity of disease;Correlation

　　子痫前期是妊娠期特有的一种多系统进展性疾病，严重威胁母婴健康，也是导致孕产妇、围产儿死亡率的关键原因之一[1]。目前认为，子痫前期的发病机制可能与母体产生的过度炎症反应有关[2]。高迁移率族蛋白1(HMGB1)是炎性介质，可在炎症反应的诱导下发挥关键作用[3-4]。而糖基化终末产物受体(RAGE)是HMGB1的关键受体[5-6]。但当前临床关于子痫前期HMGB1、RAGE水平的研究较少[7-8]。本文分析HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料回顾性分析2020年2月至2021年2月本院收治的63例子痫前期患者的临床资料。根据子痫前期病情严重程度分为轻度组31例和重度组32例，另选取32名正常妊娠孕妇为对照组。对照组纳入标准：单胎；初产妇，孕前无糖尿病、高血压、自身变异性疾病史；无药物过敏史。子痫前期患者纳入标准：意识清楚；符合子痫前期诊断标准：妊娠20周后出现收缩压≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，或舒张压≥90 mmHg，伴有尿蛋白≥0.3 g/24 h或随机尿蛋白(+)，或虽无蛋白尿，但合并下列任何一项者：血小板减少(血小板小于100×109/L)；伴肝功能损害，血清转氨酶水平为正常值两倍以上；伴肾功能损害，血肌酐水平≥1.1 mg/dL或为正常值两倍以上；肺水肿；新发生的中枢神经系统异常或视觉障碍。轻度子痫前期诊断标准：在怀孕20周之后发现血压开始升高超过140/90 mmHg，但不超过160/110 mmHg，查尿常规出现尿蛋白有1+，但不超过2+，查24 h尿蛋白定量>0.3 g，但不超过2 g。重度子痫前期诊断标准：在妊娠20周以后，孕妇出现高血压，收压>160 mmHg，舒张压>110 mmHg；尿蛋白≥5.0 g/24 h或随机蛋白尿≥(+++)；患者出现持续性头疼、头晕眼花、视物模糊；持续性上腹部疼痛；肝功能异常，转氨酶升高；肾功能异常、少尿[9]。排除标准：合并精神疾病；合并血液系统严重原发性疾病；临床资料不全；依从性差；心脏受损或肝、肾功能异常。患者对本研究内容了解并自愿签署知情同意书，且研究经本院伦理委员会审核通过(批准文号：20210152)。轻度组：年龄24~33岁，平均(29.1±2.2)岁；孕周31~35周，平均(33.5±1.3)周。重度组：年龄25~33岁，平均(29.3±2.1)岁；孕周31~36周，平均(33.4±1.2)周。对照组：年龄26~32岁，平均(29.2±2.2)岁；孕周32~35周，平均(33.4±1.1)周。三组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。1.2方法(1)采集和处理样本。分娩前抽取三组孕妇6 mL空腹肘静脉血，以3000 r/min，离心半径5 cm，离心5 min，取上层血清，分装到经高压处理的2 mL离心管中，-80℃冰箱中保存，待检。待孕妇分娩时，胎盘娩出之后，在15 min内选取3份体积为8 cm3的胎盘母体面中央组织(规格：1 cm×1 cm×1 cm)，在选取胎盘组织时，要避开钙化点、坏死部位及梗死位置。采用生理盐水将胎盘组织冲洗干净，用福尔马林固定一部分，构建组织芯片，开展免疫组化检测。

　　(2)ELISA检测胎盘组织和血清中HMGB1、RAGE蛋白表达水平选用凯斯勒生物医药扬州有限公司的试剂盒，严格依据试剂盒操作标准完成各项检测流程，以保障检测结果的准确性。①配制标准品。选择100μL标准品和300μL样品加入第一孔释液中混合均匀，再从第一孔中取100μL与100μL稀释液混合均匀，再按照上述比例完成6次稀释。②加样。设置空白孔和待测孔，在待测孔中加入100μL样品稀释液，空白孔中加入10μL样品稀释液。③封板之后混合均匀，37℃水浴1 h。④完成5次洗板，每孔中加入100μL酶，25℃孵育2 h。⑤室温环境中孵育30 min，洗板5次。⑥每孔中加入显色剂，混合均匀。⑦各孔加入100μL终止液。⑧采用酶标仪在450 nm处测定各孔的吸光度值。

　　1.3观察指标(1)比较三组胎盘组织与血清中HMGB1-RAGE蛋白表达水平。(2)分析HMGB1、RAGE与子痫前期病情程度的相关性。

　　1.4统计学方法采用SPSS 22.0统计学软件处理数据，计量资料以(±s)表示，采用t检验，计数资料以率(%)表示，采用χ2检验，采用Spearman相关性分析，分析HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1三组血清HMGB1、RAGE水平比较重度组、轻度组血清HMGB1、RAGE水平均高于对照组，且重度组高于轻度组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

　　2.2三组胎盘组织HMGB1、RAGE水平比较重度组、轻度组胎盘组织HMGB1、RAGE水平均高于对照组，且重度组高于轻度组，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

　　2.3 HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度的相关性HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度均呈正相关(r>0，P<0.05)，其水平越高，子痫前期病情程度越严重。见表3。

　　3讨论

　　子痫前期是妊娠期高血压疾病中的一种[10-13]，其发病机制与原因普遍认为由多通路和多机制导致，无法通过一元论完成解释[14-15]。有学者认为，子痫前期分为两个阶段，分别是临床前期和胎盘因子进入到母体血液循环中，激活系统炎症反应，导致血管内皮细胞出现损伤。子痫前期的临床症状比较多样化[16]。导致子痫前期产生的原因可能与免疫不耐受、遗传因素、血管生成因子失衡、慢性子宫胎盘缺血等相关[17]。目前临床上治疗子痫前期的药物有降压类药物(硝苯地平、甲基多巴、肼屈嗪等)；类固醇药物、硫酸镁等[18]。特殊情况下，还可开展剖宫产手术。

　　HMGB1是一种核蛋白，可在缺氧或炎症刺激下释放[19-20]，可增加内皮细胞的渗透性，导致炎症反应持续加重[21]。HMGB1广泛存在于组织和细胞中，在脑部和肝细胞胞浆中表达，在其他细胞胞核中表达。通常情况下，HMGB1参与多种生物学过程，如细胞分化、成熟，DNA复制、转录和重组，能够与DNA结合，促进核小体形状稳定，作为组织与基因特异性转录调控因子调控细胞活性。HMGB1蛋白中缺少缩氨酸先导肽，不能从高尔基细胞器和内质网当中穿出，但仍然可释放到细胞浆中，甚至细胞外部。其在细胞外部能够参与多种生理和病理效应，如血管损伤后再狭窄、肿瘤浸润和转移、动脉粥样硬化等。RAGE是晚期糖基化终产物受体，属于免疫球蛋白超家族中的跨膜蛋白，最早是在组织匀浆中被发现与体外白蛋白结合。已经证实，RAGE在单核—巨噬细胞、非表皮细胞、神经元细胞中均有表达。RAGE具有多配体跨膜信号传导受体，结构中包括胞内、外域、跨膜区。RAGE与自身免疫疾病、多种炎症的发生之间有密切关系[22]。而HMGB1是RAGE的一个配体，HMGB1中的C-末端结构与RAGE配体具备同源性特点，在区域中与RAGE产生作用。

　　本研究结果显示，重度组、轻度组血清和胎盘组织中HMGB1、RAGE水平均高于轻度组和对照组，且重度组高于轻度组。提示子痫前期孕妇HMGB1存在核浆转移情况，可能是子痫前期的关键病理过程。本研究结果还显示，HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关。提示可将RAGE、HMGB1作为判定子痫前期病情程度的重要指标。

　　综上所述，HMGB1、RAGE水平与子痫前期病情程度呈正相关。

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