[摘要]目的探讨不同聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术诊断细菌性食物中毒的效果。方法方便选择2022年4月—2023年4月潍坊市疾病预防控制中心的89例疑似细菌性食物中毒患者为研究对象，采集患者的呕吐物及粪便标本完成病原菌检测，分别采用常规PCR和多重荧光定量PCR完成食物中毒标本检测，以细菌微生物培养结果为金标准，计算不同PCR检测方法在细菌性食物中毒中的诊断效能。结果细菌微生物培养确诊59例细菌性食物中毒，常规PCR检出45例阳性；多重荧光定量PCR检出57例阳性。多重荧光定量PCR的准确度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值为91.01%（81/89）、91.53%（54/59）、94.74%（54/57）、84.38%（27/32），高于常规PCR的66.29%（59/89）、62.71%（37/59）、82.22%（37/45）、50.00%（22/44），差异均有统计学意义(χ2=17.857，14.699，4.252，11.283；P均<0.05）。多重荧光定量PCR的特异度与常规PCR相比，差异无统计学意义（P>0.05）。结论与常规PCR检测相比，多重荧光定量PCR用于诊断细菌性食物中毒的诊断效能更高，能有效为患者后续治疗提供依据。

　　[关键词]聚合酶链式反应；细菌性食物中毒；诊断效能

　　近年来，随着居民对健康重视，加强饮食健康成为研究重点[1]。食品安全涉及内容较多，不同环节均会造成食品污染物污染，影响消费者健康。食物中毒作为急性感染性疾病的一种，是由于患者食用被细菌或毒素感染后的食物，临床多表现为腹痛腹泻、恶心呕吐等症状，严重者将引起神经麻木、肢体无力及休克昏迷等[2]。食物中毒事件相对突然，常涉及群体且影响较大，需要快速、准确地找出病症的根源，以便及时对患者进行治疗[3]。目前，食物中毒检测方法相对较多，如血常规检查、病原学检查及粪便检查等，但是上述方法需要完成标本的分离及培养，耗时较长，且检测过程中标本容易受到污染，导致其准确性较低。聚合酶链式反应（poly⁃merase chain reaction,PCR）技术作为一种新兴的检测技术，检测时将双链DNA转变为单链，通过相应的引入实现与单链DNA结合，在聚合酶的作用下，实现单链合成为双链DNA，促进DNA片段增殖[4-5]。本研究探讨PCR技术在诊断细菌性食物中毒的诊断效能，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　方便选择2022年4月—2023年4月潍坊市疾病预防控制中心的89例疑似细菌性食物中毒患者为研究对象，采集患者的呕吐物及粪便标本完成病原菌检测。患者男48例，女41例；年龄21~74岁，平均（58.39±4.51）岁；体重指数18.7~29.3 kg/m2，平均（22.25±3.31）kg/m2。本研究得到潍坊市疾病预防控制中心伦理委员会批准（202203267），患者家属均知情同意本研究并签署同意书。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：均为潍坊市疾病预防控制中心接收的疑似食物中毒患者；以腹痛及呕吐等为主，部分患者表现为昏迷及休克；能接受标本的采集及病原菌测定。

　　排除标准：精神异常、认知障碍者；血液系统疾病、器质性疾病或严重肝肾功能异常者。

　　1.3检测方法

　　1.3.1仪器与设备生化鉴定板，购置于法国生物梅里埃公司；7.5%氯化钠肉汤及三糖铁等培养基，均购置于北京陆桥技术有限公司；显色培养基，购置于法国科玛嘉公司；琼脂糖DNA纯化试剂盒、溴化乙锭，购置于美国Gibco公司，上述所有的试剂、诊断血清及培养基均在有效期内。

　　1.3.2常规PCR①对采集的标本采用相关试剂盒提取细菌基因组的DNA，并将其保存于-20℃冰箱中，备用。以细菌基因DNA为模板，根据GenBank中食物源性致病菌序列进行检测，分析液体序列后筛选靶序列。结合靶序列采用设计的引物完成目标基因的扩增[6]；向待测样品中加入反应液及酶，并加入阴、阳性对照质控品及待测样品，最后放入核酸释放剂。将上述混合融合离心后，参考PCR说明书进行扩增。②判断标准。目标基因Ct参考值为38，检验内标Ct参考值为40；对于阳性食品标本，进一步鉴定微生物的类型[7]。

　　1.3.3多重荧光定量PCR基于常规PCR检测，对采集的标本进行多重荧光定量PCR反应，完成引入与探针的设计。设定多重PCR反应单循环参数：预变性95℃下3 min，连续完成40个循环，每个循环变性30 s，温度为94℃；退火1 min，温度62℃；延伸1 min，温度为62℃,循环完毕后，延伸10 min，温度为72℃,直到冷却为16℃,产物4℃后保存，备用。待上述检测完毕后，取PCR反应产物5μl，进行琼脂凝胶电泳，并借助紫外凝胶成像系统观察结果。判定标准：结合扩增仪器显示的实时荧光强度及其增长曲线，判断DNA含量；增长曲线呈S型、CT值<38判定为阳性；CT值>40为阴性，CT值在38~40为可疑阳性。

　　1.3.4质控方法为了保证检验结果的准确及科学，对上述所有疑似食物中毒患者均进行完成采样登记，根据《国家食源性疾病监测网工作手册》，合理使用报告表；定期检定购物的培养基及试剂等，降低人为误差[8]。

　　1.4观察指标

　　①统计不同PCR技术诊断细菌性食物中毒的结果。②以细菌微生物培养为金标准，计算常规PCR、多重荧光PCR的诊断效能，包括准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。

　　1.5统计方法

　　采用SPSS 26.0统计学软件处理数据，诊断结果与诊断效能为计数资料，以例数（n）和率（%）表示，组间比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1不同PCR技术诊断细菌性食物中毒的结果

　　细菌微生物培养确诊59例细菌性食物中毒，常规PCR检出45例阳性；多重荧光定量PCR检出57例阳性。见表1。

　　2.2不同PCR技术诊断细菌性食物中毒的诊断效能比较

　　两种PCR技术的特异度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。多重荧光定量PCR的准确度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值高于常规PCR，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

　　3讨论

　　食品安全关系到居民的身体健康及社会生产活动正常开展，并成为当前研究的热点。近年来，随着居民生活方式的改变，食品原料加工过程中被细菌污染风险较高，不仅造成严重的经济损失，亦影响居民的生命安全[9]。谭冬梅等[10]以疑似食物中毒事件中收集标本为对象，并完成其测定，通过多重实时荧光PCR能确定病原体类型，鉴定和检测副溶血性弧菌及其毒力基因，具有快速、准确和灵敏等优点。本研究中，多重荧光定量PCR的准确度、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值较常规PCR高（P均<0.05），可指导临床诊疗。PCR技术能更加快速、灵活地实现微生物的检出，且该检测方法特异性较强，能弥补传统检测方法存在的弊端。同时，PCR技术的使用由人操作检验设备，减少了检测流程，使得工作效率得到提升[11]。相关研究表明，传统检验方法出结果需≥2 d，而PCR技术仅数小时或1 d内即可得到结果[12]。同时，该检测方法借助自动化技术检测出食品中的微生物种类，有助于微生物进一步检查。PCR技术能用于检测食品中的有效成分，可用于转基因食品的鉴定，实现定性和定量分析。刘水等[13]研究表明，PCR技术用于食物中毒患者中，检查准确度为90.35%、灵敏度为89.68%、特异度为88.37%及阴性预测值为82.15%，与本研究结果相符。本研究中，多重荧光定量PCR检查用于细菌性食物中毒中诊断准确度为91.01%，灵敏度91.53%，阳性预测值94.74%，阴性预测值为84.38%，均高于常规PCR（P均<0.05），从该结果看出，不同PCR检测技术用于食物中毒中可获得较高的诊断效能，能指导患者后续方案的制定。本研究存在单中心样本量有限等局限性，未来需通过多中心、大样本研究验证多重荧光定量PCR用于细菌性食物中毒的价值。

　　综上所述，与常规PCR相比，多重荧光定量PCR用于诊断细菌性食物中毒的诊断效能更高，能为患者后续治疗提供依据。

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