[摘要]目的分析免疫荧光技术在难治性外阴阴道假丝酵母菌病中的应用价值。方法方便选取2022年6月—2023年5月中山大学附属第一医院惠亚医院收治的200例疑似难治性外阴阴道假丝酵母菌病患者为研究对象，均进行湿片法及免疫荧光技术检测，根据临床综合诊断判断湿片法和免疫荧光技术的诊断结果，并计算两种检测方式的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果临床综合诊断检出阳性198例，免疫荧光技术检出阳性197例、湿片法检出阳性179例。免疫荧光技术的准确度98.50%（197/200）、灵敏度98.99%（196/198），高于湿片法的89.50%（179/200）、89.90%（178/198），差异均有统计学意义(χ2=14.362，15.594；P均<0.05）。结论使用阴道分泌物检查难治性外阴阴道假丝酵母菌病时，湿片法与免疫荧光技术均可起到检验效果，但后者诊断效能更好，值得借鉴。

　　[关键词]难治性外阴阴道假丝酵母菌病；阴道分泌物检验；免疫荧光技术；阳性预测值；准确度

　　外阴阴道假丝酵母菌病曾称霉菌性阴道炎，主要是由于白色念珠菌感染所致。患者常存在外阴瘙痒、白带增多等症状，如未积极治疗，病情不断加重且反复发作，为患者身心健康带来不良影响[1]。对于此类患者而言，药物是治疗的基础，以此减轻炎症反应，缓解病症不适。越早发现并确诊，越早治疗效果更为理想。因此，为该类患者采取适宜检查方式进行快速诊断十分必要。有临床症状而多次湿片法检查阴性或治疗后反复复发及用药效果欠佳者的难治性外阴阴道假丝酵母菌病，一般建议行真菌培养加做药敏试验，但真菌培养需时5~7 d[2]。因此需要一种快速、准确的检测方法指导治疗。免疫荧光技术经典可靠，具备“免疫学”和“形态学”的双重优点，直接免疫荧光法仅需一次染色过程，操作简便，对环境、设备要求低，检验速度快，1 h内可以出彩色图文报告结果，尤其适用于各种病原体的临床快速检测[3]。基于此，本文旨在分析免疫荧光技术在难治性外阴阴道假丝酵母菌病诊断中的应用价值，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　方便选取2022年6月—2023年5月中山大学附属第一医院惠亚医院收治的200例疑似难治性外阴阴道假丝酵母菌病患者为研究对象，均进行湿片法及免疫荧光法检测。200例患者年龄24~50岁，平均（37.19±4.25）岁；患病时长1~16个月，平均（8.64±2.08）个月；体质量46~79 kg，平均（62.67±3.89）kg；已婚120例，未婚80例。本研究经中山大学附属第一医院惠亚医院伦理委员会审核批准（2022-0531-022）。患者及家属均知情同意本研究。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：疑似难治性外阴阴道假丝酵母菌病患者；经过规范治疗的外阴病患者，行二次分泌物湿片法检测，外阴阴道假丝酵母菌病临床评分为4~15分，评分内容包括:外阴瘙痒，疼痛(性交痛、尿痛)，黏膜充血、水肿，外阴抓痕、皲裂、糜烂，分泌物量及性状（豆腐渣样改变）[4]；签署知情同意书。

　　排除标准：合并细菌性阴道病、滴虫性阴道炎等其他阴道感染者（经革兰染色或滴虫镜检确认）；处于妊娠期、经期者；3 d内存在性生活、上药及冲洗者；1周内应用抗生素及免疫制剂药物者；无法全程完成研究者；自愿退出研究者；因其他疾病急需治疗退出研究者。

　　1.3检验方法

　　湿片法：在取样过程中，先在载玻片中央滴落一小滴生理盐水。随后，覆盖上盖玻片。接着，将载玻片置于酒精灯火焰的轻微热量下进行加热。使用常规光学显微镜进行观察，以便搜寻是否存在菌丝或孢子。难治性外阴阴道假丝酵母菌病湿片法的阳性判定标准为在显微镜下观察到假丝酵母菌的芽生孢子和/或假菌丝。

　　免疫荧光技术：滚动采集患者的阴道分泌物，随后将其均匀地涂抹于玻璃载片上，形成薄层。随即将0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液，pH值为7.4的溶液滴加于标本上，保持10 min后弃去，以保证样本的湿度达标。之后，按规范滴加适当稀释的荧光标记液，覆盖样本，并置于带搪瓷的容器中，控制适宜的温度。经过一段时间的静置，规范取出样本并放置于玻片架上。用0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液对样本进行多次冲洗，接着使用相同浓度和pH值的磷酸盐缓冲液进行三缸浸泡，每缸浸泡3~5 min，并适时摇动。取出玻片后，用滤纸吸去多余水分，滴加缓冲甘油（1滴）并用盖玻片封盖。之后，迅速使用荧光显微镜（型号BX50F4，品牌徕卡）对玻片进行详尽观察。若观察到特异性荧光强度样本，即可判定为阳性结果。

　　临床综合诊断：症状方面，患者主要表现为外阴阴道瘙痒（可严重至坐立不安、夜间加重）、外阴部灼热痛、性交痛及尿痛，阴道分泌物增多且呈白色稠厚的豆腐渣样或凝乳状；妇科检查可见外阴红斑、水肿，常伴有抓痕，严重者皮肤皲裂、表皮脱落，阴道黏膜红肿，小阴唇内侧及阴道黏膜附有白色块状物，擦除后露出红肿黏膜面，甚至出现糜烂及浅表溃疡。真菌学检查阳性。

　　1.4观察指标

　　参照临床综合诊断，分析不同检验方法的诊断结果。对比不同检验方法的诊断效能。

　　1.5统计方法

　　采用SPSS 20.0统计学软件处理数据，诊断结果及诊断效能为计数资料，以例数（n）和率（%）表示，组间比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1不同检验方法的诊断结果对比

　　免疫荧光技术检出阳性197例、湿片法检出阳性179例，见表1。

　　2.2不同检验方法的诊断效能对比

　　免疫荧光技术的准确度、灵敏度高于湿片法，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

　　3讨论

　　外阴阴道假丝酵母菌病主要是由白色念珠菌这类真菌引发的，这种真菌感染在女性群体中相当普遍，大约有80%~90%的病例是由这种特定的念珠菌引起的[5]。属于一种可能引发的机会性真菌感染，是妇科领域内常见的感染性疾病之一[6]。对其病因的准确诊断有利于临床的积极治疗[7]。关于外阴阴道假丝酵母菌病的病原体，绝大多数病例是由白假丝酵母菌引起的[8]。外阴阴道假丝酵母菌病是一种内在性疾病，其发生与阴道局部环境的异常密切相关，而且乳酸杆菌数量的减少也是导致这种疾病的一个重要原因[9-10]。一旦阴道的生态平衡受到破坏，亦或是有外源病原体的入侵，就很容易提高发生外阴阴道假丝酵母菌病的概率[11]。当体内雌激素水平减少，或者是阴道酸碱度上升，这会不利于乳酸菌的生长，从而导致阴道微生物群失衡[12]。

　　在临床诊断时，阴道分泌物检验较为多用，湿片法通过人为创造适用于假丝酵母菌生长繁殖的环境，以此促进其大量繁殖生长，从而观察分析，为推断是否患有外阴阴道假丝酵母菌病提供参考依据[13-14]。免疫荧光法主要是通过对阴道分泌物进行处理，之后在显微镜下观察是否存在真菌孢子、菌丝，从而判断是否患病[15-16]。此法具有操作简便、耗时短、准确性高的优势，可发挥较高的诊断价值[17-18]。随着生物分析和分子生物学研究的发展，免疫分析法已经成为了现代临床医学检验的一个非常有前景的手段之一[19]。

　　本研究表明，免疫荧光技术检出阳性197例、湿片法检出阳性179例；免疫荧光法的准确度、灵敏度高于湿片法（P均<0.05），这与姚琼等[20]研究结果一致。可见，免疫荧光技术的阳性检出率高于湿片法，且诊断效能较好。究其原因可能有以下几点，荧光检测速度快并且精准定位，该项技术的最大优点在于，通过利用荧光显微镜对荧光素所释放的荧光信号进行探测，从而实现对细胞抗原的高精度定位。利用免疫荧光技术，能够高精度地探测到微小数量的微生物，这一方法极其敏感[21]。

　　免疫荧光技术与传统快速检测技术性能比较具有较多优点[22]。①灵敏度更高，该检测方法以功能化纳米微球载体技术，结合荧光标记物探针，仪器直接检测激发荧光信号具有较高的信噪比、更高的信号检测量和检测灵敏度[23]。②检测范围更宽，荧光免疫技术采用荧光直接激发发光检测手段，荧光信号强度与荧光微球数量呈直线相关,避免了酶催化发光技术存在的催化效率及底物量限制等问题，定量范围与反应体系内参与反应的特异性蛋白量直接相关，线性范围可达到200~1 000倍，接近全自动化学发光检测水平。未来可开展多中心、大样本研究，并对比免疫荧光技术与其他先进检测方法（如分子生物学）的效能。

　　综上所述，相较于湿片法而言，采用免疫荧光技术为外阴阴道假丝酵母菌病患者检测阴道分泌物效果更佳，能够提高诊断准确度。

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