[摘要]目的探讨喉癌组织中微小RNA-552（microRNA-552,miR-552）、热休克蛋白90α（heat shock protein 90α,HSP 90α)的表达及其与肿瘤分期的相关性。方法便利选取2024年1—12月于齐齐哈尔医学院附属第三医院耳鼻喉科诊治的60例喉癌患者（研究组）以及60例喉良性肿物患者（对照组）为研究对象。比较两组miR-552、HSP 90α的表达水平差异、不同喉部肿瘤分期的miR-552、HSP 90α表达水平以及miR-552、HSP 90α表达水平与肿瘤分期的相关性。结果研究组miR-552、HSP 90α表达水平高于对照组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。Ⅲ+Ⅳ期患者miR-552、HSP 90α表达水平均高于Ⅰ+Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（P均<0.05）。miR-552、HSP 90α表达水平与分期存在正相关关系（r=0.442、0.636；P均<0.05）。结论miR-552与HSP 90α的表达水平与分期存在一定相关性，可作为肿瘤进展的标志物，对患者病情转归及预后具有重要影响。

       [关键词]微小RNA-552；热休克蛋白90α;喉部肿瘤；病理分期

　　喉癌属于喉部恶性肿瘤，发于喉黏膜上皮，具有较强侵袭性。据国际癌症机构研究报告显示，2020年全球新增癌症1 930万例，死亡近1 000万例,约为51.81%[1]。该疾病以进行性呼吸困难、吞咽障碍为主要临床表现[2]。晚期喉癌患者预后不理想，极大影响生活、生存质量，因此早期诊疗对于喉癌患者尤其重要，可有效提升生存率。研究表明，基因水平标志物在喉癌诊断中具有较高的灵敏度、特异度，对癌症病情的控制和预后情况具有较高的临床价值[3]。微小RNA（microRNA,miRNA）对下游靶基因具有定向调控能力，微小RNA-552（microRNA-552,miR-552）属于一类新发现的miRNA，可通过对靶基因的调节达到促进血管功能的效果，可作为喉癌患者预后情况不良的潜在标志物之一[4]。热休克蛋白90α（heat shock protein 90α,HSP 90α)为细胞质蛋白质，同属于肿瘤标志物的一种，在恶性肿瘤中具有较高的表达水平，可作为癌症病情发展或转归的重要参考[5]。然而，现阶段临床中关于miR-552及HSP90α的表达在喉部不同肿瘤、分期中的相关性尚不明确，基于此，本研究纳入喉部肿瘤良、恶性共120例患者进行探讨，旨在为喉癌的防治提供新思路。现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　便利选取2024年1—12月于齐齐哈尔医学院附属第三医院耳鼻喉科诊治的60例喉癌患者（研究组）以及60例喉良性肿物患者（对照组）为研究对象。研究组患者根据国际抗癌联盟第七版TNM分类进行分期，Ⅰ+Ⅱ期患者25例，Ⅲ+Ⅳ期患者35例。两组研究对象一般资料对比，差异均无统计学意义（P均>0.05），具有可比性，见表1。本研究经齐齐哈尔医学院附属第三医院伦理委员会审核批准（2024LL-18），患者及家属均知情同意本研究。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：研究组经病理学确诊为喉癌；无喉癌相关病史；对照组通过病理学检查确诊为喉良性肿物；未接受过手术、药物等针对喉部肿瘤的相关治疗；美国东部肿瘤协作组评分<3分。

　　排除标准：合并心、脑血管疾病或肝、肾功能异常者；重要脏器、免疫功能不全者；合并严重凝血功能障碍者；既往存在神经障碍疾病史者。

　　1.3检测方法

　　两组均提取病灶处活检组织，存放于-80℃冰箱中以待后续检测。

　　miR-552表达使用实时荧光定量PCR进行检测，检测试剂来自北京索莱宝科技有限公司。检测时对提取组织的总RNA进行提取，逆转录为cDNA，后予PCR扩增，miR-552上游引物5’-GTTTAACCTTTTGCCTGTTGG-3’，下游引物5’-CGAACGCTTCACGAATTTG-3’；反应体系25µl，条件如下：于50℃温度中孵育20 min，后95℃下预变性1 min；56℃退火1 min，65℃下予以延伸扩增，保持45 s，共进行35次循环，最后一轮需于70℃下持续反应8 min。选取U6为其内参基因，采用Livak法计算其相对照的表达量。

　　HSP 90α表达水平通过蛋白免疫印迹技术进行检测。首先，制备分离胶和聚丙烯酰胺凝胶，浓度分别为12%和5%。取20µg蛋白样品进行上样，并将恒流电泳设置为35 mA。接着，激活聚偏二氟乙烯（poly vinylidene fluoride,PVDF）膜，然后与制备的凝胶一同置于电转缓冲液中，在冰上稳定100 V条件下进行2 h转移。转移结束后，彻底清洗PVDF膜，并将其放入杂交袋中，在室温下封闭1 h。随后，加入适量稀释的抗体，置于4℃下孵育至次日。使用Tris-HCl缓冲液进行2次洗涤，15 min/次，共洗涤2次。洗涤后，将PVDF膜放入经1:2 000稀释的辣根过氧化物酶标记的IgG中，在室温下放置1 h，再进行2次清洗。最后，按照增强型化学发光试剂的使用说明进行检测，并对图像进行分析。

　　1.4观察指标

　　比较两组miR-552、HSP 90α表达水平的差异；比较研究组患者恶性肿瘤不同分期下，miR-552、HSP 90α表达水平；分析miR-552、HSP90α表达水平与肿瘤分期的相关性。

　　1.5统计方法

　　采用SPSS 26.0统计学软件处理数据，miR-552、HSP90α表达水平为计量资料数据，经Shapiro-Wilk检验符合正态分布，以(±s）表示，组间比较行两独立样本t检验。miR-552、HSP90α表达水平与肿瘤分期的相关性通过Spearman进行相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1两组研究对象miR-552、HSP 90α表达水平比较

　　研究组miR-552、HSP 90α表达水平高于对照组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

　　2.2不同喉部肿瘤分期的miR-552、HSP 90α表达水平比较

　　Ⅲ+Ⅳ期患者miR-552、HSP 90α表达水平均高于Ⅰ+Ⅱ期患者，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表3。

　　2.3 miR-552、HSP 90α表达水平与肿瘤分期的相关性

　　miR-552、HSP 90α表达水平与肿瘤分期存在正相关（P均<0.05）。见表4、图1。

　　3讨论

　　手术是治疗喉癌的主要方法，尤其适用于早期喉癌患者，可彻底切除肿瘤，但也会为患者带来危害，术后易出现喉部功能障碍，如声音嘶哑、呼吸困难等问题，还可能导致气管狭窄，损害患者健康。因此，癌症的早期诊断对病情转归及预后具有重要意义。对于癌症的早期诊断，目前尚未有明确的检测分子指标，然而已有多项研究指出[6-7]，肿瘤的发生与机体基因之间存在密切关系。

　　miR-552是一种位于染色体1p34.3的小型非编码RNA，miRNA家族在肿瘤的发生、发展中起重要作用，在多种癌症中的表达水平显著上调[8]。miR-552近年来在癌症研究中受到广泛关注，通过靶向不同的基因而参与多种生物学过程，如结直肠癌的一项研究表明，miR-552通过靶向ADAM28抑制其表达，从而促进癌细胞的转移[9]。此外，李玉珍等[10]研究发现，miR-552可通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。在本研究中，研究组miR-552表达水平高于对照组（P<0.05），提示喉癌患者肿瘤具有强侵袭性，同时易发生转移，与上述相关研究结论相似。而有研究指出，miR-552在胃癌中的表达水平与肿瘤的分期和病理分级有关，其表达水平在Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期中存在显著差异[11]。本研究结果表明，Ⅲ+Ⅳ期患者miR-552表达水平均高于Ⅰ+Ⅱ期患者（P<0.05）。同时另一项研究显示，miR-552的表达水平在TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的喉癌患者中显著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的患者，表明miR-552表达水平与喉癌肿瘤分期呈正相关[12]。miR-552在喉部良性肿瘤、Ⅰ+Ⅱ期患者中的低表达水平均表明其与患者的临床病理特征和预后密切相关。

　　HSP 90α是一种重要的分子伴侣蛋白，广泛存在于微生物中，参与蛋白质的折叠、成熟和调控，对细胞信号的传导和应激反应至关重要[13]。有研究表明，在乳腺癌患者中，Ⅲ+Ⅳ期患者的血清HSP 90α水平高于Ⅰ+Ⅱ期患者，提示其高表达与疾病的侵袭性特征和较差的总体生存率正相关，可作为评估肿瘤分期的一个生物标志物[14]。同时本研究结果显示，Ⅲ+Ⅳ期患者HSP 90α表达水平高于Ⅰ+Ⅱ期患者（P<0.05），与上述研究结果一致。在肿瘤细胞中，HSP 90α表达水平升高显著，有希望成为临床治疗中的潜在靶点[15-16]。miR-552与HSP 90α在喉癌患者中均表现出高表达水平，因此二者联合表达可更准确预测喉癌患者的死亡风险，从而精准区分癌症不同分期，在评估喉癌病情及预后方面具有较高价值，有助于更好理解喉癌的生物学行为，同时为临床治疗提供新的靶点。

　　综上所述，miR-552、HSP 90α的表达水平肿瘤分期存在一定相关性，对喉癌及其他恶性肿的病情评估均具有重要意义。

　[参考文献]

　　[1]UNG H,FERLAY I,SIEGEL RL,et al.Global cancer statistics 2020:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].CA Cancer J Clin,2021,71(3)209-249.

　　[2]曾进,谢华顺,李丽娟,等.经口入路低温等离子切除早期声门型喉癌的中长期随访结果[J].中国微创外科杂志,2021,21(3):210-214.

　　[3]魏鑫鑫,李晓玲,黄维平,等.TKTL1和WISP-1在喉癌患者病灶组织中的表达及对预后的影响[J].分子诊断与治疗杂志,2021,13(12):1977-1980,1985.

　　[4]张明,王吉荣.miR-552-3p通过抑制DACH1促进肝细胞性肝癌细胞增殖、迁移和侵袭[J].南京医科大学学报(自然科学版),2020,40(4):538-544,583.

　　[5]孙伟,李肖.血浆热休克蛋白90α预测肝细胞肝癌介入治疗预后的临床价值[J].中华肿瘤杂志,2024,46(2):118-126.

　　[6]刘冠彤,袁永轩,高阳,等.雌激素受体信号通路与胃癌关系的研究进展[J].癌变·畸变·突变,2024,36(2):155-158.

　　[7]谢紫平,刘立威,房锦存,等.ARHGAP21通过失活WNT信号通路抑制非小细胞肺癌中的上皮间质转化[J].南方医科大学学报,2023,43(8):1322-1332.

　　[8]郑紫恒,许春进.外泌体miR-552的表达对胃癌生物学行为的影响及临床意义[J].医药论坛杂志,2021,42(19):102-105.

　　[9]陈雨思,程双华,陈仕高.miR-552在结直肠癌组织中表达及其与临床病理特征关系[J].湖南师范大学学报(医学版),2023,20(3):110-113.

　　[10]李玉珍,方海云,杨柳,等.miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为[J].肿瘤药学,2022,12(2):197-203.

　　[11]李猛,仲雅婷,陈成,等.miR-552和miR-592在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系[J].胃肠病学和肝病学杂志,2021,30(10):1096-1100,1106.

　　[12]曾妮,高芳芳,王爱华,等.miR-552和HSP 90α与喉癌临床病理因素及预后的相关性研究[J].疑难病杂志,2024,23(1):57-62.

　　[13]刘金钰,邓萍,石磊,等.HSP90α在宫颈癌细胞及组织中的表达及其与肿瘤凋亡的关系[J].中国实验诊断学,2024,28(10):1165-1170.

　　[14]郑阿梅,王传彬,武林松,等.CDFI联合AFP、HSP 90α对乳腺癌分期的诊断[J].现代科学仪器,2022,39(3):111-115.

　　[15]张兵,陈瑞红,杨威,等.肝细胞癌患者血清HSP 90α和PIVKA-Ⅱ水平变化及其临床意义探讨[J].实用肝脏病杂志,2021,24(4):548-551.

　　[16]姚冬梅,田添.Hsp 90α、CER及AFP预测原发性肝癌患者TACE疗效的价值[J].分子诊断与治疗杂志,2024,16(8):1399-1402.