[摘要]目的探讨荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）与酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）检测乙型肝炎病毒的效果。方法目的选取2022年10月—2024年10月赤峰市传染病防治医院收治的106例疑似乙型肝炎患者作为研究对象，均进行荧光定量PCR与ELISA检测，以病理检查作为金标准，分析各方法诊断准确性。结果病理检查结果显示，阳性52例，阴性54例。荧光定量PCR法诊断灵敏度是96.15%（50/52），特异度是98.15%（53/54），准确度是97.17%（103/106），高于ELISA的84.62%（44/52）、87.04%（47/54），准确度是85.85%（91/106），差异均有统计学意义(χ2=3.983，4.860，8.742；P均<0.05）。结论荧光定量PCR诊断乙型肝炎病毒效果优于ELISA，能为临床医师诊断乙型肝炎提供更可靠的依据。

　　[关键词]乙型肝炎病毒；酶联免疫吸附法；荧光定量PCR法；检测

　　乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）持续感染会导致慢性肝脏疾病，主要表现为食欲不佳等症状，若未及时确诊并治疗，HBV会损伤多器官，甚至引起肝癌，对患者身体健康会造成严重影响[1]。所以，要选择恰当的方法检测HBV，以做到早期确诊，进而及时给予患者科学的治疗，而及时控制病情。

　　现今，临床上多用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测HBV，通过检测血清内特异性抗体、特异性抗原，能为临床医生诊断HBV感染提供参考依据，具有价格优惠、操作简单等优势，且能实现乙肝批量筛查[2-3]。但ELISA无法判断HBV感染复制状况。所以，要用更高效的方法检测HBV，以便为临床医师诊断HBV感染提供更多参考信息。随着检查技术的飞速发展，临床上逐渐用荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain re⁃action,PCR）检测HBV，能帮助医生了解病毒载量，且对低病毒载量、早期感染要更为敏感。基于此，针对HBV检测，本文探讨用荧光定量PCR法与ELISA检测该病毒的效果，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　目的选取2022年10月—2024年10月赤峰市传染病防治医院收治的106例疑似乙型肝炎患者作为研究对象，其中男55例，女51例；体质量18~25 kg/m2，平均（23.42±1.82）kg/m2；年龄35~64岁，平均（43.92±1.23）岁。本研究经赤峰市传染病防治医院伦理委员会审核批准（CFSCRBFZYY-LLSC-202002）。患者及家属均知情同意本研究。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：存在乙型肝炎典型症状，例如食欲不佳、乏力等；不伴重要脏器功能障碍。排除标准：危重症者；不配合检查者；伴精神疾病者；参与其他研究者。

　　1.3检测方法

　　检查前，指导患者保持饮食清淡，忌食油腻食物，且叮嘱研究对象，检查前24 h内忌饮酒，检查前1 d晚上8点后，需禁饮、禁食。同时，检查前，询问患者是否服药、服用哪些药物，若其服用的药物会影响肝功能，则需停药14 d后，才能进行相关检查，并向研究对象做好解释工作，避免发生纠纷。

　　病理诊断：①样本处理：采用肝穿刺活检采集肝脏组织样本，长度与厚度均需>1.0 cm。用中性甲醛（浓度10%）固定样本，然后对其包埋、染色等一系列处理，最后对其检查，以得出病理检测结果。②病理学诊断标准：肝脏组织出现汇管区炎症、小叶内病变、肝纤维化，则是阳性。

　　ELISA：①准备工作：采集空腹静脉血，每位患者采集4 mL。并用离心机器对血液样本进行离心处理，其转速、维持时间分别是3 000 r/min、10 min，离心半径10 cm，并放在-20℃的环境内保存，避免血液样本发生溶血现象。②检测步骤：对标准品进行稀释，并在空白孔内、标准孔内、待测孔内加入标准品，温育30 min，温度控制在37℃,并对浓缩洗涤液进行稀释，保存好备用。随后去除液体、封板膜，并加入适量洗涤液，然后静置30 s后再去除，上述步骤重复5次，然后拍干。然后，在待测孔内、空白孔内添加酶标试剂，共50µl，再次进行温育、拍干、重复洗涤等常规操作。此外，加入显色剂A、B，避光显色处理，期间温度控制在37℃,维持15 min。同时，3个孔内加入终止液，最后用ELISA配套试剂，并根据相关说明书进行吸光度检测，吸光度≥1.00，则是阳性；吸光度<1:00，则是阴性。同时详细分析，并记录检测结果。

　　荧光定量PCR法检测：①提取DNA：采集空腹静脉血，每位患者采集4 mL。室温下，血液样本放置0.5 h之后，对其进行离心处理，转速、维持时间分别是12 000 r/min、15 min，离心半径15 cm。待分离出血清后，再进行离心处理（12 000 r/min、离心10 min、离心半径15 cm），然后取上清液，并加入适量DNA提取液，震荡均匀混合后，放置在100℃环境下保存，维持10 min之后，再次对其进行离心处理（9 000 r/min、离心5 min、离心半径15 cm）。最后，在-20℃环境中保存处理过的标本，备用。②PCR扩增：用核酸扩增仪（厦门安普利生物工程有限公司，Anadas 9850）实施PCR扩增，其仪器检测波长、发光波长分别是525、487 nm，探针需处于扩增区中间，预变性、变性、退火、延伸等条件分别是：93℃持续2 s、94℃持续5 s、60℃持续15 s、72℃持续30 s，上述循环40次。HBV-DNA浓度在1.0×102 IU/mL以上，判断为阳性。

　　1.4观察指标

　　将病理检查作为诊断乙型肝炎的金标准，比较荧光定量PCR与ELISA诊断乙型肝炎的灵敏度、特异度、准确度。

　　1.5统计方法

　　采用SPSS 24.0统计学软件处理数据，诊断结果、诊断效能为计数资料以例数（n）和率（%）表示，组间比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　病理检查结果显示，阳性52例，阴性54例。见表1。荧光定量PCR法诊断效能高于ELISA，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表2。

　　3讨论

　　HBV感染还会危及患者的消化功能，而降低胆汁分泌量，进而引起多种不适症状[4]。且HBV感染后期，可能导致肝脾肿大，甚至引起门静脉高压，进而易引起腹水等现象，对HBV感染患者的身体、生命均会造成严重损伤[5]。现今，临床上多根据ELISA检测HBV，具有成本低、操作简单等优势。但其难以定量分析病毒在体内的含量，且无法有效判断该病毒复制情况。因此，需探索一种高效、有效的检测方法，以期早期诊断乙肝，进而给予患者早期干预，避免HBV传播。

　　本研究采用荧光定量PCR法与ELISA检测HBV，其ELISA是免疫测定方法，通过检测血清内特异性抗体和抗原，而判断受检者是否感染HBV，不仅具有准确性高、检测时间短等优势，还具有价格低廉等优势，适合用在批量样本检测中，使其被广泛应用在临床中[6]。荧光定量PCR法检测HBV抗体、抗原等时灵敏度比较高，对于极低浓度的目标病原体荧光定量PCR法也能检测出。同时，荧光定量PCR法既能检测到目标病原体，还能区分不同种类的抗体与抗原，致使该检测法特异度比较高[7]。经研究得知，荧光定量PCR法灵敏度是96.15%、特异度是98.15%、准确度是97.17%，均比酶联免疫吸附测定法高。王贺[8]研究结果指出，实时荧光定量PCR法的诊断特异度、灵敏度、准确度高于酶联免疫吸附测定法。究其原因，ELISA是定性检测方法，无法定量分析HBV在受检者体内的含量，也无法动态分析HBV传染活性、复制转录情况[9]。同时，血清分离、洗板情况、标本保存等步骤会影响检测准确性，且酶标记物、抗原或抗体、底物等的选择也会对检测准确性造成直接影响，致使ELISA准确性较低[10]。此外，ELISA检测HBV时需要用到特殊设备，再加之ELISA难以评估感染程度、病毒量间的关系[11]。所以，致使该方法诊断准确度、特异度、灵敏度低于荧光定量PCR法。而荧光定量PCR法是封闭性操作，能有效预防样本污染，且能提供更清晰、直接的量化诊断依据，可有效提升检验准确度[12-13]。此外，荧光定量PCR法用荧光信号实时动态检测PCR进程，能定量分析待测样本内特定DNA序列，并有效检测HBV-DNA含量[14]。同时，应用荧光定量PCR法中，各化学物质会导致核酸碎片化，而导致荧光PCR扩增片段较短，容易捕获到[15]。且荧光定量PCR法使用的荧光探针，荧光本底比较低，易检测到微量的扩增，致使荧光定量PCR法对血清标志物的检出率较高[16]。为此，荧光定量PCR法诊断准确度、特异度、灵敏度更高。但本研究，样本数量较少，且研究分组较少。因此，建议相关学者开展大样本、更多分组的双盲、随机临床试验研究，以提升研究结果的可靠性。

　　综上所述，针对HBV检测，本文探讨得知荧光定量PCR法诊断效果优于ELISA。

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