[摘要]目的探析实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术在手足口病检测中的应用价值。方法非随机选取2021年1月—2023年11月高唐县疾病预防控制中心收治的100例疑似感染手足口病患儿为研究对象，均进行实时荧光PCR检查、DNA测序技术检查，以病毒分离培养结果为金标准，对比两种技术的诊断情况。结果病毒分离培养结果显示100例疑似患儿中有73例确诊。实时荧光PCR技术诊断效能灵敏度97.26%（71/73）、特异度88.89%（24/27）、准确度95.00%（95/100）、阳性预测值95.95%（71/74）、阴性预测值92.31%（24/26）明显高于DNA测序技术的72.60%（53/73）、55.56%（15/27）、68.00%（68/100）、81.54%（53/65）、42.86%（15/35），差异有统计学意义(χ2=17.340、7.477、24.175、7.462、15.821，P均<0.05）。实时荧光PCR技术的病毒亚型检出率高于DNA测序技术，差异有统计学意义（P均<0.05）。结论在手足口病检测中，实时荧光PCR技术的应用价值高于DNA测序技术，更利于为后续治疗提供可靠参考依据。

　　[关键词]实时荧光PCR技术；手足口病；DNA测序技术；临床诊断；诊断效能

　　手足口病是比较常见的病症，多出现在儿童中，尤其是五岁以下的幼儿，属于由肠道病毒引起的传染病，主要通过飞沫或接触感染传播，其得名于其典型的症状，包括口腔疱疹、手部和脚部皮疹[1-2]。在对该种病症实施治疗前，通常通过症状和体征进行初步诊断，但确认诊断需进行病毒检测，为后续治疗方案的制订提供参考依据[3-4]。病毒分离培养是手足口病诊断的金标准，但其检测价格较高，且检测时间较长，并不适用于大规模检测、筛查[5-6]。实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术、DNA测序技术是现代医学技术快速发展下大力推广应用的新型检验技术，可实现对病毒的有效检测[7]。本研究旨在分析探析实时荧光聚合酶链式反应PCR技术在手足口病检测中的应用价值，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　非随机选取2021年1月—2023年11月高唐县疾病预防控制中心收治的100例疑似感染手足口病患儿为研究对象。其中男53例、女47例；年龄2~12岁，平均（6.03±1.13）岁；病程3~7 d之间，平均（4.12±0.54）d；体重指数18~25 kg/m2，平均（21.03±1.81）kg/m2。本研究经高唐县疾病预防控制中心伦理委员会审核批准（20240203）。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：出现口痛、讨厌饮食、低烧，且四肢等部位出现小泡；接受病毒分离培养试验；年龄≥2岁；患儿家长知情并自愿参与。

　　排除标准：合并有其他较为严重病症者；存在有先天性疾病者；配合度较低者。

　　1.3方法

　　首先进行标本的获取，是从咽拭子的方式得到的，放于含有病毒的保存液，及时送检。

　　在病毒分离的试验中，需要将样本接种的细胞培养物放入培养箱中，在适当的培养条件下，观察细胞是否出现病变，如果出现病变则进行病毒分离，将培养物中的病毒收集，并通过离心等方法分离病毒颗粒，进而对分离得到的病毒进行鉴定和确认。

　　进行实时荧光PCR检测时，使用试剂盒将样本中的RNA提取出来，而后转录成cDNA，以便后续的PCR反应。其次，操作期间依据实验室的具体试剂盒和PCR体系，准备PCR反应混合液，通常情况下混合液有PCR缓冲液、引物、荧光探针（例如Taq⁃Man探针）、cDNA和聚合酶。再次，将PCR反应混合液加入PCR管或板中，使用PCR仪进行扩增，期间实时荧光PCR仪会监测反应体系中的荧光信号，并记录荧光增加的程度，荧光信号的增加与目标病毒的存在有关。最后进行数据的分析，通过实时PCR仪的软件分析荧光曲线和阈值周期数（Ct值），通过与标准曲线或对照样品进行比较，确定样品中目标病毒的存在与否。

　　DNA测序检验中使用DNA测序仪仪器，严格遵照说明书进行各项检验操作。

　　1.4观察指标

　　诊断效能：将病毒分离培养结果作为金标准，对两种技术的诊断结果进行分析，并计算两种技术的诊断效能（灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值阴性预测值）。

　　病毒亚型检出情况：基于病毒分离培养结果，对两种技术的病毒亚型检出情况进行分析，包括肠道病毒通用型检出率、肠道病毒71型检出率、柯萨奇病毒A16。

　　1.5统计方法

　　本研究数据的统计处理工具为SPSS 23.0统计学软件，诊断效能为计数资料，以例数（n）和率（%）表示，行χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1不同技术诊断效能比较

　　病毒分离培养结果显示100例疑似患儿中有73例确诊。经实时荧光PCR技术检验有74例阳性、26例阴性，真阳性71例、真阴性24例；经DNA测序技术检验有65例阳性、35例阴性，真阳性53例、真阴性15例，见表1。实时荧光PCR技术诊断效能高于DNA测序技术，差异有统计学意义（P均<0.05），见表2。

　　2.2两种技术病毒亚型检出情况比较

　　实时荧光PCR技术的各类病毒亚型检出率高于DNA测序技术，差异有统计学意义（P均<0.05），见表3。

　　3讨论

　　手足口病作为临床常见病症，虽然大多数症状较轻，但仍有诱发重度并发症的可能，进行及时有效治疗至关重要[8]。治疗前进行病毒检测能够明确患者是否感染了手足口病病毒，以便采取相应的治疗和控制措施，避免病毒的传播[9]。病毒分离培养是一种常见的手足口病病毒检测方法，其原理是将患者样本中的病毒分离出来，并在适当的培养基中培养，使其增殖[10]。相较于其他方式，病毒分离培养准确度更高，可以确定病毒的存在和类型，并可进行药物敏感性试验，但该种方式需要较长的时间（通常为3~7 d）获得结果，且对实验室条件和技术要求较高，不利于大范围普查[11]。为此也就需要探索一种更为高效且便捷的检查方式。

　　本研究中，经病毒分离培养结果显示100例疑似患儿中有73例确诊。实时荧光PCR技术诊断效能高于DNA测序技术（P均<0.05）。在病毒亚型检出分析中，实时荧光PCR技术对各类病毒亚型检出率高于DNA测序技术（P均<0.05）。分析原因：DNA测序技术是一种通过测序病毒DNA来检测手足口病病毒的方法，目前在临床中的应用率较高，主要是将病毒样本中的DNA提取出来，并使用测序技术确定其核酸序列[12]。该种方式可以准确确定病毒的遗传信息，包括病毒株的亚型和变异情况，且DNA测序技术还可以用于病毒的流行病学研究和溯源分析[13]。但是该种方式也存在一些问题，比如需要较高的设备和技术要求，且相对较为耗时和昂贵[14]。实时荧光PCR技术属于一种新型检测技术，其原理是通过特定引物和荧光标记的探针，扩增和检测病毒核酸[15]。相较而言，实时荧光PCR技术可以快速、准确地检测手足口病病毒，具有高度敏感性和特异性[16]。李文瑞等[17]研究结果显示，实时荧光定量PCR技术下手足口病患儿诊断准确率为88.34%，高于常规方式的诊断准确率（P<0.05）。与本研究结论一致，表明实时荧光定量PCR技术在手足口病检验中效果突出。

　　综上所述，在手足口病检测中，实时荧光PCR技术的应用价值高于DNA测序技术。

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