摘要：通过从阿留申病毒阳性水貂筛选具有抵抗力的水貂，达到抗病毒育种的目的。第1年选留种后通过临床观察，把不 健康水貂直接淘汰。第2年选种方法，除临床表现不健康的水貂淘汰外，趾尖采血，淘汰血浆比例高于50%以上水貂;第3 年，除第2年的方法外，应用血清折光仪测定血浆中总蛋白的值，按35%比例从高往低淘汰。 3年时间不同选种方法对比， 逐年检测和淘汰，通过红细胞和血浆比例筛查及血清折光仪检测后，水貂产仔数接近阿留申病毒阴性水貂，可以应用此法 逐年筛选出抗阿留申病毒的水貂种群，提高产仔数减少农场的损失。

　　关键词： 水貂阿留申病,血浆总蛋白,血清折光仪,选种评估

　　0 引言

       水貂阿留申病( AMD )是由水貂阿留申病毒 ( AMDV )引起的一种慢性消耗性传染病。 AMD在 全世界水貂养殖场普遍存在，无净化AMD的水貂养殖场， 感染率可达95%以上。调查发现， 感染AMDV水 貂产仔率在50% ～ 65%，均产仔数平均是3.7只，严重 者平均产仔数为1只以下。没有感染AMDV水貂产仔率 在90% ～ 95%。另外，发现国内自有的水貂品种，种貂95%以上感染AMDV，但是均产仔数在5只左右。推测 是来自长时间自然选择出抗AMDV的结果。 AMDV无有 效的疫苗防控，只能淘汰病貂，提高貂群的产仔率[1-2] 。 淘汰病貂的方法常用碘凝集[1] 。缺点是假阳性和判断标 准困难，需要检验经验丰富的操作人员。

　　本实验室发现染病水貂血液红细胞占比比阴性水貂 明显偏少，免疫球蛋白普遍远高正常值，和碘凝集的检 测原理有正相关性，因此考虑数字量化阿留申病毒阳性 水貂的血浆中总蛋白浓度[3-4] ，达到和碘凝集检测相同 的目的，通过数字读取比碘凝集更容易判断水貂的健康状态。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验材料

　　中国黑龙江某水貂养殖农场水貂，每年种母在13 000只 以上，品种是丹麦进口咖啡水貂，农场分为A 、B 、C 、 F 4个分场，其中A 、C 、F场是AMDV感染率为95 %的 场， B场2019年新引进无AMDV同品种种貂3 000只，作 为阴性对照。手持折射血清蛋白仪(上海鑫际仪器有限 公司) 、高速低温离心机( eppendorf，5418 R) 。对流 免疫电泳检测方法及试剂来自丹麦毛皮协会，操作方法 按照抗原说明书操作。对流免疫电泳阳性结果的判定以 两排孔之间显示白色沉淀为阳性，阳性对照每次必须出 现作为成功标准[5]。

　　血样采集和处理：用含有肝素钠玻璃毛细管从水貂 趾尖采集血样，标记，于4 ℃保存。检测前分离血浆， 转速1 000 r/min，离心5 min ，当天采集当天检测。

　　1.2 试验方法

　　选种方法，第1年选留种后通过临床观察，把不健 康水貂直接淘汰。第2年选种方法，除临床表现不健康 的水貂淘汰外，红细胞占比低于50%的淘汰;第3年， 除第2年的方法外，应用血清折光仪测定血浆中总蛋白 的值，与阴性水貂血浆总蛋白值相比较。

　　折光仪检测方法，手持折射血清蛋白仪仪器校准， 滴加纯净水清洗手持折射蛋白仪检测表面，读取仪器上 示数， 进行校准，调整示数为“0”刻度处。将血浆滴 入仪器检测表面中央位置，读取仪器上示数(即血浆蛋 白浓度值)，进行记录。重复以上操作前，需将仪器检 测表面擦拭干净并做校准，避免交叉感染，影响试验数 据的准确性。待所有样本检测结束后，以不同场、性别 分别进行数据的统计汇总，整理数据，得出水貂感染 AMDV后血浆浓度的变化规律。

　　2 结果

　　2.1 血清蛋白测定比较

　　从图1中可以看出AMDV阳性水貂和阴性水貂的血 浆和红细胞比例完全不同，尤其是感染后发病水貂，血 浆占比明显增多。

　　通过A和B采集后毛细管血浆和红细胞比较，阿留 申病毒阳性水貂红细胞明显偏少;在C的第13行，第2个 空，设定阳性对照。阳性水貂在抗原和血清中间，偏向血浆侧，可以清楚看到白色沉淀线，以此判断水貂是否感染。

　　用血清折光仪检测水貂总血浆蛋白的结果。 B和F场 分别把部分公母水貂血浆蛋白浓度分布分开比较， A和 C场只有母貂，用于繁殖的公貂在F场。 B场为AMDV阴 性水貂，只采集部分水貂血液，把不同场水貂的血浆 折光数值占比做成柱形图，横轴表示不同场水貂折光 值占比，纵轴表示水貂场次性别。如图2所示，结合表1 所检测数据， B场公貂血浆蛋白浓度集中在7.8 ～ 9 g/dL ， 8.2 g/dL占比最高为22.5% ;B场母貂集中在7.4 ～ 9 g/dL，8.2 g/dL占比最高为18.9% 。F场公貂集中在9.8 ～ 12 g/dL，10 g/dL占比最高为14.1% ;F场母貂集中在9 ～ 11 g/dL，10 g/dL占比最高为11.5% 。A场水貂集中在10 ～ 12 g/dL，12 g/dL占比最高为17.4% 。C场水貂集中在10 ～ 12 g/dL，12 g/dL占比最高为21.8%。

　　2.2 水貂生产数据对比

　　在每年产仔结束后，统计产仔率和产仔数。从表2 可以看出AMDV阴性水貂产仔数高于阳性水貂产仔数， 因第1年小母貂产仔率要低于老母貂产仔数，但从表中 可以看出， 2020年B场为第1年的小母水貂，其产仔数 高于所有阳性水貂。若不做选种处理， AMDV阳性水 貂产仔会越来越少，正常AMDV阴性产仔最高，按留 种计算， 最高达到6 ～ 7个。通过第3年数据， 在2020年 AMDV阳性水貂产仔数不断接近阴性水貂的产仔数。

　　通过数据的记录与整理得出第1 年产仔率为A 场 76.8% 、C场80.33% 、F场80.24%;第2年产仔率是A场 80.3% 、C场84.65% 、F场84.8%，均提高了4.5%以上; 第3年产仔率是A场83% 、C场90.1% 、F场92%， 均提高 了3.45%以上。

　　3 讨论

　　中国广泛应用折光仪测定家畜初乳或者奶中免疫球 蛋白[6-7] 。此次用血清折光仪测量水貂血浆的总蛋白含 量，在全球属于首次，通过结果发现AMDV阴性水貂， 无论是公貂还是母貂血浆蛋白浓度集中在7.8 ～ 9 g/dL ， 少数出现高浓度如9.8 g/dL，少数低浓度如7 g/dL。而阳 性水貂的血浆蛋白浓度相比阴性水貂明显高出很多，其 中A 、C场水貂的血浆蛋白浓度都集中在10 ～ 12 g/dL ， 比例最高的均为12 g/dL ，血浆蛋白浓度低的水貂很少，分别占各自总数的A场<0.2% 、C场<0.4% 。F场公貂的 血浆蛋白浓度跨度较大，在各个浓度都有分布。表明此 种方法可以用于判断水貂感染AMDV后的健康度。 F场 母貂血浆蛋白浓度较为集中，仅有少数水貂血浆蛋白浓 度偏低。

　　4 结论

　　上述结果证明，可以用血清折光仪判断阿留申病毒 阳性水貂的健康，此法操作简单，对水貂健康状况指标 利于量化，比碘凝集更具优势。河北某养殖户貂场的筛 选也得到相同结果， 经过3年以上的连续筛选后，阿留 申阳性水貂的产仔数越来越接近健康水貂，表明可以通 过此方法作为水貂抗病毒育种方法。

　　参考文献

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