摘要：为了解新平县小反刍兽疫(PPR)的免疫效果，科学防控小反刍兽疫。采用多阶段抽样方法， 2018—2022年，共采 集免疫山羊血清样品2 046份，利用抗体阻断ELISA检测方法，进行小反刍兽疫免疫抗体检测与分析。结果显示：小反刍 兽疫平均抗体阳性率80.89%( 1 655/2 046 );其中：规模场个体免疫阳性率84.72%( 981/1 158)，散养户个体免疫阳性率 75.90%( 674/888 );公羊免疫抗体阳性率84.39%( 1 043/1 236)，母羊免疫抗体阳性率75.56%( 612/810 );“小反刍兽 疫弱毒活疫苗(Clone9株)”免疫抗体阳性率80.95%( 799/987 );“小反刍兽疫—山羊痘二联活疫苗”免疫抗体阳性率 80.83%( 856/1 059)。结果表明：规模场个体免疫阳性率高于散养户，差异显著(P<0.05 );公羊抗体阳性率高于母羊， 差异显著(P<0.05 );小反刍兽疫弱毒( Clone9株)单苗和二联活苗抗体阳性率差异不显著(P>0.05 )。

　　关键词： 小反刍兽疫,抗体,监测,分析

　　0 引言

　　小反刍兽疫因其传染性强、死亡率高， 一直成为 羊养殖业危害较大的疫病，又称作“羊瘟”[1-2] 。该病 由小反刍兽疫病毒( PPRV )引起，小反刍兽疫病毒 ( PPRV)属副黏病毒科麻疹病毒属。羊主要通过呼吸 系统传播[3] ，该病多发于秋冬季，感染后临床症状表现为高热、精神沉郁、食欲减退，口腔黏膜弥漫性溃疡， 眼鼻分泌物增加。山羊和绵羊是该病唯一的自然宿主， 山羊高度易感，绵羊次之。该病被世界动物卫生组织 ( OIE)将其列为法定报告的动物疫病，我国将其列为 一类动物疫病[4-6] 。目前，小反刍兽疫尚无有效的治疗 措施，防控手段主要依靠疫苗免疫[7] 。2018—2022年，新平县使用的疫苗是新疆天康生物技术有限公司生产的 “小反刍兽疫弱毒活疫苗(Clone9株) ”和“小反刍兽 疫—山羊痘二联活疫苗”。为了解疫苗的免疫效果，新 平县2018—2022年抽取部分规模场和散养户进行血清学 免疫抗体检测。

　　1 血清样品来源

　　经统计，新平县羊常年存栏5万～ 6万只， 100只以 上存栏约2万，饲养品种为山羊，饲养方式主要以山地 散养为主。因羊养殖场群数多，故采用多阶段随机抽样 的方法[8-9] ，先随机抽场，再从被抽到的场内随机抽个 体。具体为：按预估流行率的抽样公式n=z2 ×p(1-p)/e2 ， 式中n为抽样数， p为被调查地的预期流行率， z为调查 置信度(置信水平为95%时， z2=1.962 )，e为可接受误 差，计算需抽取的理论场点数，后按比例分层抽样，随 机抽取规模场和村;个体抽取量[6]按照95%置信水平， 80%预期免疫合格率， 10%可接受误差计算。个体抽样 时群内随机选羊，采用颈静脉采血方法。 2018—2022 年，累计采集58个场点山羊血清样品2 046份，其中： 2018年采集11个场点山羊血清样品240份(规模场血清 样品数136份，行政村散养户血清样品数104份); 2019 年采集12个场点山羊血清样品480份(规模场血清样品 数288份，行政村散养户血清样品数192份)， 2020年采 集12个场点山羊血清样品480份(规模场血清样品数243 份，行政村散养户血清样品数237份); 2021年采集11 个场点山羊血清样品386份(规模场血清样品数217份， 行政村散养户血清样品数169份); 2022年采集12个场 点山羊血清样品460份(规模场血清样品数274份，行政 村散养户血清样品数186份)。

　　2 检测试剂和仪器

　　小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，购 自青岛立见生物有限公司， MultiskanFC酶标仪，购自Thermo公司; 10 ～ 1 000 μL单道移液器及30 ～ 300 μL 八道移液器，购自德国Brand公司。

　　3 方法

　　试剂盒提前半小时从冰箱取出回温至室温( 20 ～ 25 ℃),取出试剂盒内的ELISA板，充分摇匀各试剂，参 照说明书按顺序加入PPRVB阴阳性血清、样品稀释液 各50 μL，样品孔加入25μL样品稀释液和25μL血清样 品;轻轻振匀孔中样品(勿溢出) ，37 ℃孵育60 min; 甩干PPRVB抗原包被板孔中液体， 20倍稀释后的洗涤液 洗板4次，吸水纸上拍干;每孔加入50 μL 5倍稀释后的 PPRVB酶标抗体， 37 ℃孵育30 min ;洗板4次拍干;每 孔加入50μL底物溶液显色;室温下避光孵育15 min ; 每孔加入50μL终止液;用酶标仪( Thermo Multiskan FC )450 nm 波长测定样品和对照的OD值。试剂盒质 控标准：阴性对照血清阻断率PBNC<40且阳性对照血 清PBPC>60.试验结果有效。结果判定：按照阻断率 ( PB )=100-OD/ODCm × 100 ;待检血清阻断率PBS>50 时判为阳性， PBS ≤50时判为阴性。

　　4 统计分析

　　应用Excel软件和SPSS 22.0软件进行统计学分析， 以P<0.05表示差异比较存在显著性。

　　5 结果

　　5.1 总体情况

　　累计采集的58个场点，合格场点数50个，群平均免 疫合格率86.21% ;2 046份山羊血清样品， 阳性样品1 655 份，个体免疫抗体平均合格率80.89%，检测结果见表1.

　　5.2 不同类型场户免疫情况

　　规模场1 158份血清样品，阳性981份，平均阳性率 84.72% ;行政村散养户 888份血清，阳性674份，平均 阳性率75.90%，差异显著(P<0.05 )，具有统计学意 义，结果见表2.

　　5.3 不同性别免疫情况

　　公羊1 236份血清样品，阳性1 043份，平均抗体阳体阳性率75.56%。差异显著(P<0.05 )，具有统计学 意义，结果见表3.

　　5.4 不同类型疫苗免疫情况

　　经统计， 2018—2022年，免疫“小反刍兽疫弱毒活 疫苗(Clone9株)”的羊血清样品987份，阳性799份， 抗体阳性率80.95%;免疫“小反刍兽疫—山羊痘二联活 疫苗”的羊血清样品1 059份，阳性856份，抗体阳性率 80.83%，差异不显著(P>0.05 )。

　　6 讨论

　　( 1 )散养户抗体阳性率低于规模场。原因：新平 县位于云南省中部偏西南，地处哀劳山中段东麓，是典 型的山区县，散养户多为偏远山地散养，村落路途遥 远、村防疫员前往疫苗接种时疫苗长时间暴露，蛋白质 变性，免疫原性降低，存在免疫失效的可能。其次，散 养户认为养殖存栏少，疫苗接种可做可不做，部分养殖 户仍存在拒免现象，加之饲养管理方面较薄弱，定期补 免意识也不强;而规模场的圈舍建设、饲养管理、生物 安全管理水平更为科学和规范，养殖设备也更为先进， 羊存栏量大，场主对免疫工作高度重视，制定的免疫程 序较合理，并能详细记录免疫档案，根据档案资料对漏 免羊及时补免。

　　( 2)连续5年公羊抗体阳性率均高于母羊抗体阳性 率，原因可能：公羊大多留作种用，饲养周期较长，养 殖户较重视疫苗免疫，长期反复免疫使得公羊抗体水平 较高;而母羊主要用作繁殖， 怀孕期间不建议注射PPR疫 苗，从而存在漏免，导致母羊整体抗体阳性率低于公羊。

　　( 3 )“小反刍兽疫弱毒活疫苗( Clone9株)”和 “小反刍兽疫—山羊痘二联活疫苗”2种疫苗免疫羊的 平均抗体阳性率分别为80.95%和80.83%，差异不显著 (P>0.05 )，表明两种疫苗均免疫原型良好，能对羊群 起到一定的免疫保护作用，后续小反刍兽疫的防控可继 续选用该种疫苗。

　　7 总结

　　2018—2022年检测的山羊血清样品免疫抗体合格率均高于70%，达农业农村部要求。 5年间新平县域内未 发生小反刍兽疫疫情，说明新平县小反刍兽疫免疫效果良好。

　　针对免疫抗体水平不高的场户，建议继续完善疫苗运输储存冷链设备;提高村级兽医员疫苗接种操作技 术;明确养殖户免疫主体责任，督促其做好免疫档案、 养殖档案，对漏免羊及时补免;重点加强散养户的饲养 管理水平，加大散养户的免疫力度，对拒免养殖户按相 关法律规定给与处罚，尽力做到应免尽免，不留空挡; 动物疫病防控部门加大调运检疫监管和监测力度，避免 外购羊输入性疫情发生。

　　受地理环境、饲养方式、实验条件、抽样方式及血 清样本等诸多因素限制[10] ，本次分析结果与实际可能存 在一定误差，但整体上基本能反应近5年新平县小反刍 兽疫免疫抗体水平，可为今后小反刍兽疫防控工作提供参考。

　　参考文献

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