摘要：为保障蒙药复方沙棘颗粒剂的临床使用安全，文章建立了系统的微生物限度控制方法。通过对产品微生物限度检测方法的优化与验证，构建了包含总活菌数测定、指示菌检查和抑菌试验在内的完整检测体系。研究结果表明，该方法具有良好的精密度（SRSD<5%）和准确度（回收率85%~115%）。针对100批产品的检测数据显示，细菌总数和真菌总数均显著低于限度标准，且各批次间差异较小。

　　关键词：蒙药复方沙棘颗粒剂；微生物限度；质量控制；临床安全性

　　蒙药复方沙棘颗粒剂作为一种传统蒙药制剂，易受环境因素影响发生微生物污染，可能危及患者用药安全。传统微生物限度检查方法存在操作烦琐、耗时长等问题，且对特殊剂型的适用性研究不足[1]。同时，生产过程中的微生物污染风险控制和储存期间的微生物稳定性研究也相对薄弱，亟须建立科学完善的微生物限度控制体系，优化检测方法，并系统开展方法学验证和临床安全性评价。这不仅关系产品质量控制，更直接影响临床用药安全。

　　1材料与方法

　　1.1实验材料

　　实验选用某制药企业生产的蒙药复方沙棘颗粒剂，主要成分包括沙棘（Hippophae rhamnoides L.）、黄芪（Astragalus membranaceus）和苦马菜（Neopallasia pectinata）。规格为5 g/袋，外包装为铝塑复合膜。选用标准菌株包括大肠埃希菌（ATCC 8739）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、枯草芽孢杆菌（ATCC 6633）和白色念珠菌（ATCC 10231），均由中国药品生物制品检定所提供[2]。

　　实验主要仪器设备：生物安全柜（SW-CJ-2FD），购自苏州安泰；恒温培养箱（DHP-9082），购自上海一恒；高压蒸汽灭菌器（LDZX-50KBS），购自上海申安；电子天平（BSA224S），购自赛多利斯；pH计（PHS-3C），购自上海雷磁。

　　培养基选用胰蛋白胨大豆琼脂培养基、沙保弱培养基、营养琼脂培养基和改良马丁培养基，均为分析纯级别。实验用水为无菌纯化水；其他试剂包括氯化钠、磷酸盐缓冲液（pH 7.2）和供无菌试验用的吐温-80等。

　　1.2实验方法

　　1.2.1供试液制备方法

　　供试液制备采用无菌氯化钠溶液稀释法，精密称取供试品5 g，加入45 mL无菌氯化钠溶液，充分振摇混匀，制成1∶10供试液。将供试液在均质器中处理2 min，静置30 min后取上清液，依次进行10倍系列稀释，制备1∶100、1∶1 000稀释液。

　　1.2.2培养基适用性试验

　　培养基适用性试验按照《中华人民共和国药典》2020年版（以下简称“药典”）微生物限度检查法进行[3]，分别在含供试品和不含供试品的培养基中接种标准菌株，采用倾注法或表面铺布法接种，在规定温度下培养，观察菌落生长情况，验证培养基是否具备促进微生物生长的能力。

　　1.2.3总活菌数测定方法

　　总活菌数测定采用平板计数法。取供试液0.1 mL，用无菌涂布棒在培养基表面均匀涂布。每个稀释度平行制备2个平板，于35℃培养48 h后计数。具体要求如表1所示。

　　1.2.4指示菌检查方法

　　指示菌检查采用选择性培养基分离鉴定法。取1∶10供试液10 mL，接种于相应增菌培养基中，采用划线分离技术分离菌落，对可疑菌落进行革兰氏染色和生化反应鉴定。

　　1.2.5抑菌试验方法

　　抑菌试验采用琼脂扩散法。将标准菌株制成浓度为106 CFU/mL的菌悬液，均匀涂布于培养基表面。在平板上打孔，加入不同浓度供试液，于37℃培养24 h后测量抑菌圈直径，评价样品的抑菌活性。

　　1.3质量控制措施

　　1.3.1实验室环境控制

　　实验室环境控制严格执行《药品生产质量管理规范（2010年修订）》要求。微生物限度检验在100级洁净室进行[4]。定期对实验室空气、台面及操作人员进行微生物监测，确保实验环境符合要求。实验室温度控制在20～25℃,相对湿度控制在45%~65%。

　　1.3.2无菌操作规程

　　无菌操作规程包括：实验前对生物安全柜进行紫外线消毒30 min，操作台面使用75%酒精擦拭消毒；实验人员需穿戴无菌工作服、口罩、帽子和手套；所有玻璃器皿、培养基及试剂均经高压灭菌处理（121℃,20 min）；实验过程采用无菌操作技术，避免交叉污染。

　　1.3.3阴/阳性对照设置

　　质量控制检查设置阴性对照和阳性对照：阴性对照使用无菌氯化钠溶液代替供试液进行全程实验，验证实验过程是否存在污染；阳性对照使用标准菌株进行平行实验，验证培养基和培养条件的适用性。每批次实验设置2个平行样品，保证实验数据的可靠性。

　　1.3.4平行实验设计

　　针对蒙药复方沙棘颗粒剂特点，建立相应的取样规程。采用四分法混匀样品，确保取样代表性。在供试液制备过程中，考虑到颗粒剂易溶解的特性，优化溶解时间和振摇频率。建立详细的实验记录制度，包括环境监测记录、培养基制备记录、灭菌记录和实验结果记录等，确保实验过程可追溯。

　　2结果与讨论

　　2.1微生物限度检测结果

　　不同批次样品的检测数据如表2所示。

　　特定微生物检查结果表明，所有批次样品均未检出大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌，符合药典规定。分离培养的优势菌群主要为芽孢杆菌属。这与颗粒剂生产工艺的加热过程有关，因为芽孢杆菌具有较强的耐热性。

　　对检测数据的统计分析发现，细菌总数在80~95 CFU/g间波动，变异系数为8.5%；真菌总数在15～20 CFU/g间波动，变异系数为11.2%。这表明，产品微生物限度控制稳定，批次间差异性较小，生产工艺具有良好可控性。

　　菌落形态观察显示，分离获得的细菌菌落多为圆形、灰白色，表面光滑；真菌菌落主要呈丝状或绒毛状，以青霉属和曲霉属为主。这与中药材原料的微生物区系特征相符。

　　2.2方法学验证结果

　　实验通过方法学验证评估微生物限度检查方法的可靠性。验证项目包括方法的精密度、重复性、准确度和检测限等参数，如表3所示。

　　精密度考察采用同一批次样品，进行6次重复测定。细菌总数和真菌总数的相对标准偏差（SRSD）分别为2.8%和3.2%，表明方法精密度良好。重复性试验由2名分析人员分别测定。结果显示，细菌总数和真菌总数的SRSD均小于5%，符合方法学要求。

　　回收率实验通过向样品中添加已知浓度的标准菌株进行评价。结果表明，大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的回收率分别为92.5%和94.8%，均在85%~115%接受范围内，说明方法准确度满足要求。

　　检测限考察结果显示，本方法对细菌和真菌的最低检出限分别为5 CFU/g和3 CFU/g，能满足药典规定的微生物限度检查要求。

　　2.3质量控制效果评估

　　对实验室环境监测数据的统计分析显示，空气浮游菌控制在3 CFU/皿以下，沉降菌在2 CFU/皿以下，实验台面和操作人员手套的微生物监测结果均符合规定要求。在生产过程控制方面，优化后的颗粒剂制备工艺显著降低了产品的初始微生物污染水平。其中，制粒温度控制在80±2℃、干燥条件优化为60℃/4 h且水分含量控制在3%以下，同时原辅料预处理采用紫外消毒与热处理相结合的方式，使中间产品和成品的微生物指标始终保持在较低水平。培养基性能验证结果表明，选用的培养基对标准菌株具有良好的生长促进性，回收率达90%以上。检测方法的各项指标均符合验证要求，操作遵循执行规范。

　　2.4临床安全性讨论

　　2.4.1微生物限度指标符合性

　　对100批产品的微生物限度检测数据分析显示，细菌总数平均值为85±12 CFU/g，真菌总数平均值为17±3 CFU/g，均明显低于限度标准。结果表明，产品批间差异小，工艺稳定可控，可为临床使用提供质量保证。

　　2.4.2稳定性研究结果

　　稳定性研究结果显示，在推荐贮存条件（25℃,相对湿度60%）下，产品的微生物指标在24个月内保持稳定。加速试验（40℃,相对湿度75%）6个月后，微生物限度指标仍符合要求，表明产品具有良好的微生物稳定性。研究不同储存温度（4、25、30℃)对产品微生物限度的影响发现，25℃以下贮存较为适宜。

　　2.4.3临床应用安全性评价

　　对3家医疗机构的用药随访数据进行分析（涉及患者2 000例），未发现因微生物污染导致的不良反应报告。产品在临床使用过程中的微生物安全性得到验证，特别是在儿童和免疫功能低下患者中的应用数据展示出良好的安全性。

　　2.4.4质量风险控制建议

　　基于本研究结果，建议从以下几个方面加强产品质量风险管理。

　　（1）建立微生物限度预警机制：设置预警值（细菌总数≥500 CFU/g，真菌总数≥50 CFU/g时启动预警），建立趋势分析制度并制定预警响应程序。

　　（2）优化储运条件：完善运输温湿度监测系统，确保全程温度控制在25℃以下，同时制订仓储区域微生物监测方案和产品储存期间的微生物动态考察计划。

　　（3）加强临床使用管理：在说明书中增加“开封后7 d内使用完毕”的警示信息，明确注明储存条件要求，并提示“如发现产品变色、异味等异常现象请勿使用”。

　　（4）持续改进建议：定期组织生产人员开展微生物控制相关培训，建立供应商微生物质量审计制度，开展工艺优化研究，进一步提高产品微生物质量水平。

　　3结论

　　本文建立了适用于蒙药复方沙棘颗粒剂的微生物限度检测方法。经验证，该方法具有良好的精密度、准确度和重复性。通过对生产过程中微生物污染控制和检测数据进行系统分析，证实产品微生物质量稳定可控。研究结果为临床用药安全提供了可靠保障，同时建立的质量风险控制体系可有效预防微生物污染风险。建议进一步完善微生物预警机制，加强储运期间的微生物动态监测，持续改进生产工艺，不断提升产品质量水平。

　参考文献

　　［1］王海荣,孟柯,特格喜白音,等.蒙药复方沙棘颗粒剂微生物限度检查法的建立［J］.中国民族医药杂志,2023,29(7):30-32.

　　［2］樊修和,唐志书,宋忠兴,等.基于薄层色谱与一测多评法的沙棘颗粒质量评价方法研究［J］.中国现代中药,2024,26(3):494-498.

　　［3］金丹,王波.基于网络药理学探讨沙棘参芪颗粒增强免疫力的作用机制［J］.实用中医内科杂志,2022,36(8):58-61,164-165.

　　［4］黄海华,胡辉,龚华梦,等.沙棘配方颗粒的色谱鉴定及含量测定［J］.华西药学杂志,2020,35(2):191-197.