摘要：为验证实验室对乳粉中金黄色葡萄球菌的定量检测能力，以编号060的乳粉能力验证样品为对象进行定量检测，对比Baird-Parker平板计数法与HandyPlate®金黄色葡萄球菌测试片法的检测性能，并通过Z值法评价结果的有效性。结果显示：成品Baird-Parker平板法检测结果为3 600 CFU·mL-1，Z值为-0.36；干粉Baird-Parker平板法检测结果为3 900 CFU·mL-1，Z值为-0.22；测试片法检测结果为3 400～3 900 CFU·mL-1，平均结果为3 650 CFU·mL-1，Z值为-0.33。3种检测方案的Z值均满足|Z|≤2的“满意”标准。结论：2种方法均能准确完成乳粉中金黄色葡萄球菌的定量检测，其中平板法具有较强的鉴别特异性，而试纸条法操作简便，可为实验室选择适宜的检测方法提供依据。

　　关键词：金黄色葡萄球菌；Baird-Parker平板法；测试片法；能力验证

　　金黄色葡萄球菌作为典型的食源性致病菌，广泛存在于乳制品、肉制品等食品中。其繁殖过程中产生的耐热性肠毒素可引发恶心、呕吐、腹痛等食物中毒症状，且常规加热难以破坏，对乳粉等预包装食品的安全构成了严重威胁[1-2]。目前，乳粉中金黄色葡萄球菌的定量检测以Baird-Parker平板计数法和测试片法为主[3]。平板法将传统生物学培养与生化鉴定相结合，结果准确性高，但操作步骤烦琐、检测周期长[4]；测试片法基于酶显色反应原理，简化了培养基制备与菌落鉴别步骤，更适用于快速筛查[5]。能力验证作为评价实验室检测能力的关键手段，可通过统一样品与评价标准客观对比不同方法的性能差异，为方法优化与质量控制提供了数据支撑。

　　1材料与方法

　　1.1试验材料

　　1.1.1能力验证样品

　　乳粉中金黄色葡萄球菌定量检测能力验证样品（编号060），以乳粉为主要基质，以人工污染的方式制成的固体冻干粉，约1 g/瓶。

　　1.1.2培养基与试剂

　　Baird-Parker平板（广东环凯生物技术有限公司）；Baird-Parker琼脂基础（广东环凯生物技术有限公司）；无菌生理盐水（0.85%，国药集团）；冻干兔血浆（北京陆桥技术股份有限公司）；血琼脂平板（北京陆桥技术股份有限公司）；革兰氏染色液（广东环凯生物技术有限公司）；HandyPlate®金黄色葡萄球菌测试片（广东环凯生物技术有限公司）。

　　1.1.3仪器设备

　　立式压力蒸汽灭菌器（重庆雅马拓科技有限公司，型号：SQL1010C）；拍打式无菌均质器（上海沪析实业有限公司，型号：HX-4）；生物安全柜（苏净集团苏州安泰空气技术有限公司，型号：BSC-1300IA2）；生化培养箱（上海跃进医疗器械有限公司，型号：SPX-250-Ⅱ)；生物显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司，型号：PantheraL）。

　　1.2试验方法

　　1.2.1样品前处理

　　在生物安全柜内进行无菌操作：取60 mL无菌生理盐水加入灭菌均质袋中；打开样品西林瓶（1 g样品），添加4 mL无菌生理盐水进行再水化，待溶解后吸出，放入无菌瓶中，反复用余下的稀释液清洗西林瓶内壁和胶塞，回收清洗液放入上述无菌瓶中。

　　在含有225 mL无菌生理盐水的无菌均质袋内加入25 mL食品液体样品，均质器混匀1～2 min制成1:10的样品匀液。用1 mL无菌吸管或移液器吸取匀液1 mL，注入含有9 mL稀释液的试管内，振摇后形成1:100的样品匀液。以此类推，制备10倍系列稀释的样品匀液。

　　1.2.2 Baird-Parker平板计数法（含成品与干粉培养基）

　　接种与培养：分别吸取0.3、0.3、0.4 mL不同稀释度（原液、10-1～10-5）的样品液，均匀涂布于成品/干粉平板上；将平板正置于36℃培养箱中培养1 h，再倒置培养48 h。

　　菌落鉴别：（1）形态筛选：挑取“黑色有光泽、直径2～3 mm、周围具混浊带”的典型菌落（标记为“a”），排除无混浊带或直径<1 mm的干扰菌（标记为“b”）。（2）革兰染色镜检：取5个典型菌落涂片，经革兰染色后用100×物镜观察，阳性结果为“蓝紫色、葡萄状排列、无芽孢无荚膜”。（3）血浆凝固酶试验：将典型菌落接种于脑心浸出液肉汤中，36℃培养24h后，取0.5 mL菌液与0.5 mL 1:4稀释的冻干兔血浆混合，36℃孵育6 h，每30 min观察1次，出现凝固为阳性。（4）血平板培养：将典型菌落划线接种到血平板上，（36±1）℃培养18～24 h后观察菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色）,菌落周围可见完全透明溶血圈。

　　1.2.3测试片法

　　接种与培养：将金黄色葡萄球菌测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1 mL样品匀液滴加到测试片中央，缓缓盖上上层膜，排除多余空气。测试片正面向上水平放置，（36±1）℃培养18～24 h。

　　菌落判读与计数：疑似金黄色葡萄球菌为品红色菌落，合适的计数范围在20～200 CFU。若整个培养区域呈品红色，可能是菌浓度过高，需进一步稀释样品，以获得确切的计数。

　　1.2.4能力验证评价标准

　　采用Z值法评价检测结果有效性，公式如下：

　　2结果与分析

　　2.1 Baird-Parker平板计数法结果

　　2.1.1菌落形态与生化鉴定

　　成品与干粉平板上的菌落形态一致：典型菌落（a）呈黑色、表面光滑凸起，周围环绕1～2 mm的混浊带，符合金黄色葡萄球菌特征；干扰菌（b）多为浅灰色，无混浊带，数量占比<30%。

　　生化鉴定结果显示：5个典型菌落经革兰染色后均为“G+、葡萄状排列、无芽孢无荚膜”；血浆凝固酶试验中，所有典型菌落均在3～4 h出现凝固；在血平板上，菌落呈圆形、光滑凸起、湿润、金黄色，菌落周围可见完全透明溶血圈，确认目标菌为金黄色葡萄球菌。

　　2.1.2定量检测结果

　　表1显示，成品培养基与干粉培养基的检测结果分别为3 600 CFU·mL-1、3 900 CFU·mL-1，相对偏差为8.3%；原液与10-1稀释度菌落数“多不可计”（标记为“N”），10-3及以下稀释度菌落数<10 CFU，因此选择10-2稀释度进行计数，以确保结果准确。

　　2.2测试片法结果

　　表2显示，10-1稀释度的目标菌落数为339~315 CFU，计算结果为3 400～3 900 CFU·mL-1，平均值3 650 CFU·mL-1；空白对照无菌落生长，排除污染干扰。

　　3结论与讨论

　　本实验室采用平板法与测试片法检测乳粉中金黄色葡萄球菌，能力验证结果均为“满意”，Z值-0.36～-0.22，表明实验室具备该项目的定量检测能力，方法的准确性与重复性良好。

　　平板法的优势在于通过革兰染色与血浆凝固酶试验实现“形态+生化”双重鉴别，特异性强，可有效排除表皮葡萄球菌等干扰菌，适合作为仲裁方法或对复杂基质进行精确检测；但需制备/灭菌培养基，进行多步生化试验，操作时间长，对实验人员技能要求高。测试片法无需培养基制备与生化鉴定，仅需1步接种培养，操作时间缩短，且菌落显色特异性高，干扰菌易区分，适合高通量样品的快速筛查；但依赖测试片的质量稳定性，且无法进一步生化验证可疑菌落，不适用于争议样品的仲裁。建议后续优化干粉培养基的制备流程，并扩大样品量验证测试片法在低污染水平（<100 CFU·g-1）乳粉中的适用性，进一步提升检测技术的稳定性。

参考文献

　　［1］张明新,王丽杰,王寒青,等.乳粉中金黄色葡萄球菌检测能力验证结果分析［J］.食品安全导刊,2025(19):76-78.

　　［2］宋洋.乳粉中金黄色葡萄球菌两种定性检测方法的能力验证及分析［J］.市场监管与质量技术研究,2025(2):29-32,55.

　　［3］田喜梅,潘爽.药品中金黄色葡萄球菌检验能力验证结果及分析［J］.实验室检测,2025,3(1):78-81.

　　［4］易小利,陈玟妃.食品中金黄色葡萄球菌检测能力验证结果分析与讨论［J］.现代食品,2024,30(7):168-172.

　　［5］沈锐,马力,严海元,等.3种方法分离鉴定金黄色葡萄球菌［J］.食品工程,2024(1):84-87,104.