摘要：为充分挖掘利用地方特色绵羊品种资源，促进细毛羊品种改良，该研究以甘肃高山美利奴羊为母本，以引进澳洲美利奴羊为父本，利用超数排卵和腹腔镜输精生产良种胚胎，并以藏系羊为受体进行胚胎移植。试验选取5～6岁龄优质甘肃高山美利奴母羊作为供体，以藏系绵羊作为受体，采用递减法注射FSH进行超排处理。经同期发情、超数排卵、人工授精等过程后，采用手术法子宫角回收供体的胚胎，经鉴定后移植。试验结果表明，25只有效供体共采集到130枚卵子/胚胎，其中可用胚66枚，供体平均冲胚5.2枚/只，供体平均可利用胚胎2.64枚/只。将66枚胚胎移植到66只受体后，34只受体妊娠，受胎率为51.52%。该试验为探索适宜于当地特色的胚胎移植技术模式，发挥地方资源优势，促进甘肃高山美利奴羊品种改良有较大的参考意义。

　　关键词：澳洲美利奴羊；中国美利奴羊；超数排卵；胚胎移植

　　0引言

　　肃南裕固族自治县是甘肃省传统的草原畜牧业地区，细毛羊是该县的优势畜种之一。高山美利奴是肃南县特有的细毛羊品种，是以甘肃高山细毛羊为母本，澳洲美利奴羊为父本，运用育成和级进杂交法，采取多站（场）多单位开放式核心群联合育种，经过连续3代杂交和4个世代的横交固定育成的首例适应海拔2 400～4 070 m寒旱生态区的高山毛肉兼用型美利奴羊新品种，性能指标和综合品质超过了同类型澳洲美利奴羊，实现了澳洲美利奴羊在我国高海拔、高山寒旱生态区的国产化，丰富了羊品种资源的结构。2016年被国家畜禽遗传资源委员会审定为畜禽新品种，因其羊毛纤维直径细（19.1～21.5μm）、抗逆性强和生态差异化优势，成为肃南县发展潜力最大的细毛羊品种。近年，随着国家产业政策的不断调整和退牧还草工程的实施，对生态环境的保护提出了较高的要求，此外资源优势、品牌优势尚未充分转化为经济优势，地方优势品种甘肃高山细毛羊优质种质资源存量受到前所未有的挑战，群众持续增收难度较大。因此，为将资源优势变为经济优势，提高细毛羊良种供给能力，加速优质新品种产业化进程，对促进细毛羊产业良性发展尤为重要。

　　胚胎移植技术是指将良种母羊（即供体）进行超数排卵配种后回收早期胚胎，然后把胚胎移植到生殖生理状态相近的同种母羊（受体）体内继续妊娠产生后代羔羊的技术。技术程序涉及到超数排卵、同期发情、人工授精、手术冲胚、胚胎移植等主要环节。利用该技术可极大挖掘良种母羊的繁殖潜力，加快良种培育速度，因此是一种重要的快速扩繁技术。

　　本研究根据肃南县地方绵羊品种资源优势，以本土甘肃高山美利奴羊为母本，引进的澳洲美利奴羊为父本，以适应性好、抗逆性强的藏系羊为受体，利用胚胎移植技术快速扩繁优良细毛羊品种，为甘肃高山美利奴良种培育和品种保护提供技术支持，并探索细毛羊品种改良和良种推广新模式。

　　1材料与方法

　　1.1试验用品

　　羊用硅胶孕酮栓（CIDR）、羊用海绵栓、冲胚液、胚胎保存液、强效维生素ADE液、促黄体素释放激素（A3）、通式冲胚导管等购自北京比威克公司，促卵泡激素（FSH）、孕马血清促性腺激素（PMSG）、氯前列腺烯醇、促黄体生成素（LH）等购自宁波三生生物科技股份有限公司，腹腔镜（德国，KARL STORZ）、体视显微镜（Olympus）以及手术器械。

　　1.2试验时间和地点

　　试验时间为2023年9—10月，试验地点在甘肃省肃南裕固族自治县皇城绵羊育种场，属高寒半干旱气候，该地区9、10月平均气温为13℃,昼夜温差为14℃。

　　1.3试验羊的选择

　　供体羊为5～6岁优质甘肃高山美利奴母羊，受体羊为健康、经产藏系母羊。所有试验用羊利用B超孕检确认无妊娠，于试验前2个月做好驱虫药浴、免疫、疫病检查和分群。种公羊为引进的澳洲美利奴种公羊。所有实验羊加强饲养，饲喂干草、秸秆等，减少饲喂青贮饲料；公羊提前训练采精，加喂鸡蛋、胡萝卜等，授精前提前3～5 d排精以保证精子质量。

　　1.4供体超数排卵和人工授精

　　供体羊在发情周期任意1 d放置阴道孕酮栓，在放栓第9～11天连续3 d 6次以剂量递减方式注射总量为380 U的FSH。在第5次注射FSH后撤除孕酮栓，并注射0.1 mg氯前列腺烯醇。第6次注射FSH后12 h，利用公羊对供体羊进行试情，连续2 d，每天早晚各1次，并对发情羊进行标记处理。对发情的羊注射25μg促排3号，8～10 h后使用腹腔镜法进行子宫角内人工输精。精液采自澳洲美利奴公羊，采集到新鲜精液以稀释液按照1:2比例稀释，并观察精子密度、活力等情况。根据精子质量，对每只供体每侧子宫角输入0.1mL稀释过的精子。

　　1.5受体同期发情

　　受体羊与供体羊同一天放置阴道孕酮海绵栓，在第10天撤出海绵栓，同时注射330 U PMSG。在撤栓后12 h，利用公羊对受体羊进行试情，连续3 d，每天早晚各1次。做好发情记录。

　　1.6冲胚

　　在供体羊授精后6.5 d进行手术冲胚。在术前48 h对供体禁食限水。将手术羊保定后将术部剃毛、清洗和消毒，肌肉注射静松灵进行全身麻醉。在乳房前沿腹中线一侧切开3～5 cm的切口，小心牵拉出子宫和输卵管于创口表面。在子宫角基部插入冲胚管，然后在同侧子宫角尖端注入冲胚液20～40 mL，用培养皿在冲胚管的另一端接收冲胚液。完成一侧子宫角的冲胚后，用同样的方法对另一侧子宫角进行冲胚。完成两侧冲胚后缝合切口并对术部消毒。在体视显微镜下对冲出的胚胎进行检查和鉴定。将胚胎在装有保存液的培养皿中临时保存。正常发育的胚胎应为桑葚胚或囊胚，且形态完整、轮廓清晰、结构紧凑、无附着的游离细胞判定为合格胚胎，可用于移植。

　　1.7胚胎移植

　　受体羊在胚胎移植前24～48 h禁食限水。将腹部剃毛、消毒和麻醉后，利用腹腔镜观察卵巢状况，如卵巢表面存在发育良好的新生黄体，用子宫钳将同侧子宫角前端拉出腹腔，用针头在子宫角尖端扎一小孔，用移植针将胚胎通过小孔输入子宫角内，将子宫复位后缝合术口并消毒。完成移植的每只受体注射25 mg黄体酮，并加强饲养管理。在胚胎移植后45～50 d利用B超进行孕检。

　　1.8早期妊娠检测

　　使母羊保持站立姿势，由一人固定羊的头部，另一个人抬起一只后腿至腹部高度，使母羊呈站姿并且后肢对着B超操作人员。操作人员把涂有耦合剂的探头紧贴在母羊乳房后侧部位的无毛区夹窝处，探头声窗要紧密地接触诊段部位，用力推B超机探头，并在此区域用探头来回扫描数遍，观察显示屏上母羊膀胱、胎囊、胎水、子叶、胎儿、肋骨以及子宫的不同切面图像的情况，判断母羊是否妊娠，并做记录。

　　2结果

　　由表1可知，25只供体中有22只排卵并形成多个黄体，超排反应率为88%，共冲出130枚胚胎或卵子，平均每只供体冲出5.2枚。其中未受精卵或退化胚胎64枚（49.23%），可用胚胎（桑葚胚或囊胚）66枚（50.77%），平均每只供体可用胚2.64枚。受体发情结果：同期发情处理受体83只，其中66只受体卵巢存在排卵点或黄体，发情率为79.51%。

　　由表2可知，66枚胚胎移植到66只受体中，移植后45 d经B超孕检确认34只妊娠，妊娠率为51.52%。

　　3分析与讨论

　　本次试验所使用的供体为5～6岁甘肃高山美利奴母羊，这些母羊毛品质和毛产量优异，是一批珍贵的良种甘肃高山美利奴。由于年龄较大，这些羊已不适合继续用作繁殖母羊，因此尝试采用超数排卵和胚胎移植技术来繁育其后代，保留其优异遗传基因。根据超排效果看，25只供体中有22只排卵并形成多个黄体，只有3只供体无任何排卵点，超排反应率为88%，因此这些供体羊对该超排程序仍有较好的反应。

　　22只有反应的供体平均每只供体采胚5.9枚，其中平均每只供体可用胚3.0枚。这一效率低于马文奎等报道的高山美利奴平均6.83枚/只的可用胚采集率。关于细毛羊超数排卵，不同品种、不同饲养环境和不同超排程序等因素可能对超排效果有一定影响。陶萨茹拉等报道鄂尔多斯细毛羊平均可用胚为5.26枚/只，闫海龙等报道内蒙古细毛羊平均可用胚率为9.83枚/只，石国庆等和胡月超等分别报道超细毛羊可用胚率为6.68枚/只和6.39枚/只。因此，细毛羊超排后可用胚采集率一般在6枚左右。超排效果也和供体羊年龄有关。目前，多数绵羊胚胎移植供体年龄为2～4岁，不同年龄阶段的美利奴绵羊的超排效率显示，年龄较大的供体可用胚采集率会显著降低。

　　此外，冲出的卵子中有49.23%为未受精卵或退化。在手术中观察到，有部分供体存在卵巢囊肿和子宫炎症等现象，这可能对卵子发育、排卵、卵子在输卵管中的运行、受精和发育有一定影响。

　　本次试验受体为藏系羊，是当地饲养比较广泛的羊品种，由于其适应性强、善游牧而广受养殖户喜爱。根据同期发情效果看，发情率为79.51%，基本与目前马秀红等报道的藏羊同期发情效率69%类似。胚胎移植妊娠率达到51.52%，和魏立明等的报道以甘肃细毛羊为受体的肉羊胚胎移植的妊娠率（57.29%）接近。这些结果说明藏系羊可以作为细毛羊胚胎移植的受体。

　　4结论

　　本试验探索了以藏系羊为受体的胚胎移植新模式，并利用了胚胎移植技术进行高山美利奴细毛羊的品种改良，为进一步的肃南县地方品种的改良提供育种材料。

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