摘要：为调查陕北白绒山羊隐性乳房炎流行情况，制定科学的防控策略。试验于2023年从30个陕北白绒山羊养殖场随机采集378份乳样，采用加州乳房炎检测法（CMT）和体细胞计数法对乳样进行隐性乳房炎检测，对阳性样品中细菌进行分离鉴定与药敏试验。结果显示，共54份乳样隐性乳房炎阳性，阳性率为14.29%（54/378）；从54份阳性乳样中共分离获得31株细菌，分别为葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌，所占比例分别为64.52%（20/31）、22.58%（7/31）和12.90%（4/31）；3种分离的菌株对新霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、头孢噻呋和头孢西丁均敏感。该调查结果说明，陕北白绒山羊隐性乳房炎发病率较高，养殖场（户）需采取合理用药妥善做好该病的防治。

　　关键词：绒用山羊；隐性乳房炎；致病菌；分离；鉴定；药敏试验

　　Isolation，Identification and Drug Sensitivity Test of Recessive Mastitis Pathogenic Bacteria

　　in Northern Shaanxi White Cashmere Goat

　　ZHANG Xin1，ZHAO Peng1，HAN Bin2，BAI Chongsheng2*

　　（1.Fugu County Animal Disease Prevention and Control Center，Fugu Shaanxi 719400，China；

　　2.Yulin Animal Husbandry and Veterinary Service Center，Yulin Shaanxi 719000，China）

　　Abstract：In order to investigate the prevalence of recessive mastitis of northern Shaanxi white cashmere goat，and formulate scientific prevention and control strategies．378 milk samples were randomly collected from 30 northern Shaanxi white cashmere goat farms in 2023，and recessive mastitis was detected by California mastitis test（CMT）and somatic cell counting．The bacteria in the positive samples were isolated，identified and tested for drug sensitivity．The results showed that 54 samples were positive for recessive mastitis，and the positive rate was 14.29%（54/378）．A total of 31 strains of bacteria were isolated from the 54 positive milk samples，including Staphylococcus，Escherichia coli and Streptococcus，accounting for 64.52%（20/31），22.58%（7/31）and 12.90%（4/31）respectively．The three kinds of isolated strains of bacteria were sensitive to neomycin，florfenicol，norfloxacin，ceftiofur and cefoxitin．It indicates that the incidence of recessive mastitis of northern Shaanxi white cashmere goat is high，and breeding farms（households）should prevent and control this disease by using rational drug properly.

　　Keywords：cashmere goat，recessive mastitis，pathogenic bacteria，isolation，identification，drug sensitivity test

　　0引言

　　乳房炎是牛、羊等哺乳动物的共患性疾病，患病母畜通过哺乳将病原菌传染给幼崽，导致幼畜腹泻甚至死亡，这是导致多种经济动物幼崽发病率和病死率居高不下的重要因素之一[1]。近年，陕北地区羊养殖业发展迅速，而羊隐性乳房炎是一种羊群养殖过程中常见的临床疾病，其已经成为影响陕北白绒山羊养殖业发展的重要因素。一般而言，羊隐性乳房炎无明显临床症状，不容易被养殖人员发现，但其乳汁的理化性质已改变，甚至乳产量和品质会有所下降[2]。可导致羊隐性乳房炎的病原菌种类丰富，包括葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌等，其中部分病原菌具有人畜共患风险，对公共健康造成较大的威胁[3]。

　　目前对于羊乳房炎相关病原的防治主要依赖于抗生素，而抗生素的不规范使用可导致耐药菌株出现与流行，这无疑会影响抗生素临床用药效果，提高疾病防治成本[4]。一方面，大量抗生素使用会导致乳制品中出现药物残留；另一方面，致病菌可通过乳制品感染消费者，对消费者健康造成潜在的威胁[5]。因此，掌握导致羊隐性乳房炎致病菌种类和致病菌耐药谱对于临床上治疗该病十分重要，同时对保障公共健康也具有积极意义。基于此，试验于2023年从榆林地区30个陕北白绒山羊养殖场随机采集378份乳样，调查羊群隐性乳房炎流行情况；同时对隐性乳房炎阳性样品致病菌进行分离与鉴定，通过药敏试验分析致病菌耐药谱，以了解陕北白绒山羊隐性乳房炎致病菌类型和耐药情况，为陕北白绒山羊隐性乳房炎的防治提供科学依据。

　　1材料与方法

　　1.1样品采集

　　2023年1—6月，从榆林市府谷县及周边神木市、榆阳区等5个县区的30个羊场无菌采集378份乳样。采样流程：先用温水对乳区进行清洗，再用75%含量酒精溶液进行消毒；佩戴灭菌手套，弃去前3把乳样，随后挤10～20 mL乳样置于无菌离心管内，标记相关信息后，低温送至病原诊断实验室，保存于4℃,待检。

　　1.2隐性乳房炎检测

　　采用加州乳房炎检测法对样品进行初步检测。取2 mL乳样置于乳杯中，加入KENOTEST隐性乳房炎检测试剂（为CID LINES公司产品）；用玻璃棒充分混匀，根据混合物凝集情况和颜色变化判定样品是否为隐性乳房炎阳性。若乳样全部呈凝集块，且回旋搅动时凝集块向中间集中，停止搅动则凝集块附着杯底或呈原状，则判定为隐性乳房炎阳性[6]。

　　1.3体细胞数量检测

　　根据邹鹏等[7]的方法，对乳品中体细胞数量进行计数。采用移液器取10μL乳品滴加在1 cm2载玻片上，置于恒温箱种干燥；其后，滴加适量染色液，形成均匀玻片；将载玻片置于显微镜下观察染色细胞，计算乳样中体细胞数量。若乳样体细胞数量超过50万个/mL，则判定为隐性乳房炎阳性。

　　1.4细菌分离鉴定

　　用移液器吸取50～100μL乳样滴加在鲜血琼脂培养基表面，用无菌涂布棒均匀涂布；将培养基置于37℃恒温箱培养18～24 h，观察培养基中菌落生长情况及形态学特征。挑选单一的菌落在血琼脂培养基表面进一步划线纯化，选取单一的菌落进行革兰氏染色、镜检。根据菌株的形态学特征（如大小、形态和颜色等）进行鉴定。

　　1.5药敏试验

　　采用纸片琼脂扩散法对已获得的分离菌进行药敏试验。挑选单一菌落，用适量灭菌PBS溶液稀释后涂布于鲜血固体培养基表面；待菌液稍干后，取药敏纸片贴在培养基表面，并用镊子按压纸片使之贴紧；再将培养基置于37℃恒温箱培养24 h，根据各药敏纸片对应抑菌圈直径，判定分离菌对该抗生素的敏感性。根据药敏纸片试剂盒提供的标准，分为耐药、中度敏感和高度敏感。

　　2结果与分析

　　2.1陕北白绒山羊隐性乳房炎感染情况调查结果

　　对采集的378份乳样采用凝集盘检测法和体细胞计数法分别检测调查样品隐性乳房炎阳性率，结果发现2种方法调查结果一致。结果如表1所示，12个羊场的54份乳样为隐性乳房炎阳性，场阳性率和样品阳性率分别为40.0%（12/30）和14.29%（54/378）。不同县市区的场阳性率和样品阳性率差异较大，其中神木市场阳性率最高，而府谷县最低，分别为60.0%（3/5）和16.67%（1/6）；而横山区样品阳性率最高，府谷县样品阳性率最低，分别为19.40%（13/67）和8.45%（6/71）。

　　2.2不同养殖模式羊场隐性乳房炎感染情况调查结果

　　将被调查羊场按养殖模式分为散养场和规模化养殖场，进一步分析不同养殖模式羊群隐性乳房炎感染情况差异。结果如表2所示，18个散养场中有9个羊场中含有隐性乳房炎阳性羊群，场阳性率为50.0%，对应的样品阳性率为26.90%（39/145）；12个规模化养殖场中有3个羊场含有隐性乳房炎阳性羊群，场阳性率为25%（3/12），对应的样品阳性率为6.44%（15/233）。

　　2.3细菌分离鉴定结果

　　从54份隐性乳房炎阳性乳样中共分离获得31株菌株，分离率为57.41%（31/54）。进一步革兰氏染色镜检发现，共分离获得3种细菌，分别为葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌。其中葡萄球菌所占比例最高，为64.52%（20/31），而大肠杆菌和链球菌所占比例稍低，分别为22.58%（7/31）和12.90%（4/31）。

　　2.4药敏试验结果

　　对分离获得的菌株进行药敏试验，根据各抗菌药对应抑菌圈大小判定分离菌对抗生素敏感情况。统计结果如表3所示，分离获得的20株葡萄球菌对新霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、四环素、头孢噻呋和头孢西丁敏感率均超过80%，对青霉素、庆大霉素、卡那霉素、氨苄西林和复方新诺明敏感率均低于20%；7株大肠杆菌对新霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、头孢噻呋和头孢西丁敏感率均超过80%，对青霉素、卡那霉素、四环素和氨苄西林等抗生素敏感率均低于30%；4株链球菌对新霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、头孢噻呋和头孢西丁敏感率均为100%，对青霉素、链霉素、复方新诺明和庆大霉素等抗生素敏感率均低于30%。

　　3讨论和结论

　　羊隐性乳房炎在临床上难以被发现，该病的流行不仅影响羊奶产量，哺乳羔羊甚至可能因摄入含致病菌的乳汁而发生腹泻等疾病，进而出现死亡，制约养羊业健康发展。试验结果发现，5个县市区随机挑选的30个羊场中陕北白绒山羊隐性乳房炎场阳性率为40.0%（12/30），且不同地区场阳性率为16.67%～60.0%，被调查样品羊隐性乳房炎阳性率为14.29%（54/378），说明隐性乳房炎在陕北白绒山羊群体中十分常见。进一步分析发现，散养场羊隐性乳房炎无论是场阳性率还是样品阳性率均高于规模化羊场，这主要是由于散养场养殖人员不重视疫病防控，同时饲养管理水平（如卫生管理）低。因此，养殖场工作人员应该提高对该病的防控意识，提高羊群的饲养管理水平。

　　对54份隐性乳房炎阳性乳样进行细菌分离发现，共分离获得31株病原菌，其中部分样品中未分离获得病原菌，说明可能是其他原因导致的隐性乳房炎，还需要进一步研究确定病因。革兰氏染色镜检共鉴定出3种病原菌，分别为葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌，其中葡萄球菌所占比例最高，这与李强等[8]、薛瑞林等[5]调查结果一致，即葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌是导致陕北白绒山羊隐性乳房炎的主要病原。本文未对以上菌株进行生化鉴定和分子生物学鉴定，而金黄色葡萄球菌和血清型二型链球菌均属于人畜共患型病原，因此，陕北白绒山羊隐性乳房炎样品中分离的部分病原菌可能具有潜在的公共健康威胁，该病的防治对保障公共健康也十分重要。

　　在治疗隐性乳房炎时，应先确定致病原，其后通过药敏试验筛选敏感药物，做到治疗时少用药、用高效药的目的，以减少用药成本[4]。本研究对分离的3种病原菌进行药敏试验，结果发现分离菌对部分抗菌药具有较高的耐药性，但总体而言，3种分离菌对新霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、头孢噻呋和头孢西丁敏感性均较高，后续可将以上药物应用于陕北白绒山羊隐性乳房炎的防治，但需要注意交替用药，以减少耐药菌株出现的概率。

参考文献

　　[1]敬晓棋，刘健鹏，孟建斌，等．陕西省部分地区山羊隐性乳房炎调查及灭活苗效果观察[J]．动物医学进展，2019，40（2）：51-54.

　　[2]李卫娟，刘琴，李东江，等．云南部分羊场奶山羊隐性乳房炎现状及防治[J]．动物医学进展，2013，34（6）：187-189.

　　[3]薛照越，潘玉琨，杨发龙．山羊乳房炎的研究进展[J]．今日畜牧兽医，2018，34（3）：75-77.

　　[4]刘岐，戚宇旭，杨浩钺，等．青海省湖羊临床乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验[J]．动物医学进展，2020，41（10）：130-134.

　　[5]薛瑞林，高强，李守湖，等．湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及其耐药性分析[J]．家畜生态学报，2022，43（1）：69-73.

　　[6]陈杰，魏勇，王晨豫，等．新疆部分地区9个奶牛场致奶牛乳房炎主要病原菌的检测与药敏试验[J]．中国牛业科学，2021，47（6）：9-15.

　　[7]邹鹏，韩丽英，任静波，等．鲜牛乳体细胞数的常用检测方法[J]．现代畜牧科技，2017（7）：18.

　　[8]李强，王改玲，赵泽慧，等．河南某湖羊场乳房炎的病原菌分离鉴定及防治[J]．动物医学进展，2016，37（4）：127-130.