摘要：通过小鼠急性毒性试验评价治疗奶牛乳房水肿病中药复方加味公英散的安全性，将复方制备成相当于原药材1.0 g/mL的水煎液，选取40只小鼠，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、对照组，以40、20、10 g/kg体重的剂量灌胃给药，对照组灌胃等体积的生理盐水，给药后连续观察7 d，记录死亡数和计算半数致死量（LD50）；另取20只小鼠，随机分为2组，试验组以最大剂量（40 g/kg）、最大灌胃体积（40 mL/kg）灌胃小鼠，对照组灌胃等体积的生理盐水，给药后连续观察7 d，观察小鼠临床表现、体重变化及死亡情况。结果表明，急性毒性试验各剂量小鼠均无死亡，无明显毒性反应，无法计算LD50，判属无毒级别，小鼠体重变化、脏器系数与对照组相比无显著差异（P＞0.05）。

　　关键词：加味公英散；奶牛；乳房水肿；急性毒性

　　Application Effect of Modified Gongying Powder Compound in Acute Toxicity Test of Mice

　　QIN Meihui，TIAN Geng，GUO Jiadong，WAN Jinlong，TAO Dayong

　　（College of Animal Science and Technology，Tarim University，Alar Xinjiang 843300，China）

　　Abstract：The safety of the traditional Chinese medicine compound modified gongying powder for the treatment of dairy cow breast edema was evaluated by acute toxicity test in mice．The Gongying powder was prepared into a water decoction equivalent to 1.0 g/mL of the original medicinal material．40 mice were randomly divided into high-dose group，medium-dose group，low-dose group and control group．The mice were given 40 g/kg，20 g/kg and 10 g/kg body weight by intragastric administration．The control group was given an equal volume of normal saline．After continuous observation for 7 days，the number of deaths was recorded and the median lethal dose（LD50）was calculated．Another 20 mice were randomly divided into two groups．The experimental group was intragastrically administered with the maximum concentration（40 g/kg）and the maximum intragastric volume（40 mL/kg），and the control group was intragastrically administered with the same volume of normal saline．After administration，the clinical manifestations，body weight changes and death of the mice were observed for 7 days．The results showed that there was no death in each dose of mice in the acute toxicity test，no obvious toxic reaction，and the LD50 could not be calculated，which was judged to be non-toxic．There was no significant difference in body weight change and organ coefficient between the mice and the control group（P＞0.05）.

　　Keywords：modified gongying powder，cow，breast edema，acute toxicity

　　0引言

　　加味公英散是以蒲公英、金银花、连翘为主，丝瓜络、通草、木通、青皮、浙贝母等为辅，方中蒲公英清热解毒、消肿散结、利水，为君药；金银花清热解毒、散热疏风，连翘清热解毒、消肿散结，木通、青皮清热解毒、消肿排脓，共为臣药，以加强蒲公英清热解毒、消肿散结之功；丝瓜络通络、活血、祛风，浙贝母化痰消痈、清热散结，通草清热利尿、通气下乳，共为佐使药。诸药合用，共奏清热解毒、消肿散痈之功，拟用于奶牛乳房水肿病。为评价该制剂的临床用药安全性，依据农业部兽药评审中心兽药急性毒性实验（LD50测定）指导原则[1]，参照《中华人民共和国兽药典》相关标准，本试验进行半数致死试验和最大给药量试验，为急性毒性试验、药效学实验剂量选择等提供依据[2]。

　　1材料与方法

　　1.1试验药物

　　奶牛乳房水肿病中药复方，以金银花、蒲公英、连翘为主，购于阿拉尔市青源生物科技有限公司。按照蒲公英60 g、金银花60 g、连翘60 g、丝瓜络30 g、通草25 g、木通25 g、青皮20 g、浙贝母30 g，制成相当于原药材1 g/mL的水煎液，121℃高压灭菌，4℃保存备用。

　　1.2试验动物及饲养条件

　　昆明小鼠，体重（18±25）g，购于动物科学与技术学院实验站，饲养于温度、湿度适宜环境，为防止非试验因素导致小鼠死亡，试验开始前分组饲喂3 d后无异常情况，方进行试验。

　　1.3主要仪器

　　电子天平（上海梅特勒—托利多仪器有限公司）；恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司）；EYEL4（上海爱朗仪器有限公司）

　　1.4方法

　　1.4.1半数致死试验

　　选取40只，昆明小鼠体重（18±25）g，随机分为4组，每组10只，雌雄各半，第1组为高剂量组（40 g/kg）、第2组为中剂量组（20 g/kg）、第3组为低剂量组（10 g/kg）、第4组为对照组，小鼠试验前1 d禁食不禁水，第2天小鼠试验组灌胃0.2 mL，对照组灌胃等体积的生理盐水，灌胃6 h后进行饲喂，连续观察7 d，记录死亡情况及半数致死剂量。如果受试药物组的小鼠全部存活，未能测出半数致死量值，说明该受试药物毒性很低，可按照《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》进行最大给药量试验[3]。

　　1.4.2最大给药量试验

　　选取20只，昆明小鼠体重（18±25）g，随机分为2组，每组10只，雌雄各半，试验组以最大剂量（40 g/kg）、最大灌胃体积（40 mL/kg）灌胃小鼠，小鼠试验前1 d禁食不禁水，第2天小鼠灌胃1.2 mL，分3次灌胃，对照组灌胃等体积的生理盐水，灌胃6 h后进行饲喂，连续观察7 d。观察小鼠临床表现、体重变化及死亡情况，检查小鼠脏器系数、组织病理变化情况。

　　（1）观察小鼠临床表现、体重变化及死亡情况。灌胃后连续观察7 d，记录小鼠临床表现，同时对灌胃的1、3、5、7 d进行小鼠体重测量，观察死亡情况。

　　（2）测定主要脏器系数。解剖小鼠，摘取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，观察脏器是否大小、颜色发生改变，有无结节、肿瘤和坏死现象，然后吸干水分称重，用于计算主要脏器系数。脏器系数=脏器重量（g）/体重（kg）。

　　（3）观察病理组织切片。剖检的组织样品用生理盐水冲洗干净后，用4%多聚甲醛溶液浸泡固定，乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，进行HE染色，用光学显微镜观察各组织脏器病理组织学变化。

　　（4）统计学方法。本试验用SPSS 27.0进行统计学分析，在数据资料符合正态分布的情况下，采用“平均数±标准差”表示，组间应用单因素方差分析进行统计分析，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

　　2结果

　　2.1半数致死试验

　　小鼠分别给药后观察7 d，各组小鼠均无异常，精神状态较好，未发现死亡。解剖后各脏器组织未发现病理变化，见表1。

　　2.2最大给药量试验

　　2.2.1观察小鼠临床表现及死亡情况

　　小鼠分别给药后观察7 d，各组小鼠均无异常，精神状态较好，未发现死亡。解剖后各脏器组织未发现病理变化，见表2。

　　2.2.2对小鼠体重变化的影响

　　试验期间分别记录1、3、5、7 d的体重变化，可见各组小鼠体重正常增加，无显著性差异（P＞0.05），见表3。

　　2.2.3对小鼠主要脏器系数的影响

　　解剖小鼠，观察各主要脏器大小、颜色、有无明显变化。称重后计算脏器系数，比较各组间系数的变化。由表可见最大给药量组小鼠的心、肝、脾、肺、肾与空白组比较无显著性差异（P＞0.05），见表4。

　　2.2.4小鼠主要脏器病理变化

　　最大给药组（图1A）和对照组（图1a）心脏心肌细胞形态结构正常，未出现纤维化、萎缩、坏死等现象，间质无水肿、充血以及出血现象；最大给药组（图1B）和对照组（图1b）肝脏肝小叶结构正常，肝细胞形态结构正常，排列清晰，肝血窦未见充血；最大给药组（图1C）和对照组（图1c）脾脏红髓和白髓结构清晰，可见淋巴小结结构正常；最大给药组（图1D）和对照组（图1d）肺脏细支气管结构清晰，肺泡结构清晰，无破损，无明显扩张，萎缩；最大给药组（图1E）和对照组（图1e）肾脏肾小球结构清晰，近端小管和远端小管结构明显；最大给药组（图1F）和对照组（图1f）小肠肠腺与小肠绒毛形态结构正常，无损伤。

　　3讨论

　　公英散是历经千年流传下的经典方剂，具有清热解毒、消肿散痈的功效，现代药理研究表明，金银花、连翘、蒲公英[4]、芙蓉叶和贝母五味中药所含的绿原酸、蒲公英甾醇、连翘苷等成分具有显著的抗炎活性[5]。随着抗菌药物过度使用，广泛应用中药，中药成分复杂，一些中药的毒副作用引起重视。

　　急性毒性试验是评价新药的重要环节，小鼠作为试验动物被广泛使用。本试验对小鼠进行公英散水煎剂半数致死量试验，未出现明显的毒性反应；将公英散水煎液按最大剂量（40 g/kg）、最大灌胃体积（40 mL/kg）体重对小鼠进行最大给药量试验，未出现明显的毒性反应。表明该制剂具有较高的临床用药安全性。

　　4结论

　　本研究选择小鼠作为试验动物考察加味公英散复方的急性毒性，小鼠无明显中毒反应，证明复方加味公英散属实际无毒。最大给药组给药后连续观察7 d，小鼠精神状态良好、饮水量、采食量和排便情况正常，主要脏器组织病理学检查未发现异常，表明复方加味公英散有较高的临床用药安全性。

　参考文献

　　[1]农业农村部兽药评审中心．兽用化药中药研究技术指导原则汇编（2022年）[M]．北京：中国农业科学技术出版社，2022.

　　[2]李仪奎．中药药理实验方法学[M]．上海：上海科学技术出版社，2006.

　　[3]国家食品药品监督管理局．中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则：GPT2—1[S]．北京：中国医药科技出版社，2007-08-23.

　　[4]孟然，薛志忠，鲁雪林，等．蒲公英的功效成分与药理作用研究进展[J]．江苏农业科学，2021，49（9）：36-43.

　　[5]李贺赟，曾方兴，朱瑞雪，等．蒲公英的临床应用及其用量[J].吉林中医药，2019，39（10）：1 291-1 293.