摘要：文章采用高效液相色谱法对茶叶的痕量甲醛含量进行测定分析。实验采用水浸法提取茶叶中的甲醛，使其在弱酸条件下与DNPH衍生液反应生成2，4-二硝基苯肼腙，并采用二氯甲烷萃取、净化，同时对提取条件、提取剂选择、材料用量等因素进行优化。研究发现，茶叶中甲醛的检测相关系数大于0.999 5；样品回收率为90.5%~102.3%。结果表明，高效液相色谱在茶叶甲醛含量测定中具有快速、灵敏、准确等特征，可作为茶叶甲醛含量测定的技术支撑，适用于大批量样品检测工作。

       关键词：高效液相色谱；茶叶；甲醛；食品；检测

　　甲醛是一种无色的刺激性气体，易溶于水且易挥发，对人体眼鼻等器官有刺激性，长时间接触高浓度甲醛容易致癌，故甲醛已被世界卫生组织国际癌症研究机构列为一类致癌物[1]。食品中甲醛来源广泛，主要有：①不良商家将甲醛作为添加剂用于食品保鲜；②甲醛是细胞生理代谢的正常产物，许多天然食品自身会产生甲醛本底，如水产品及水发产品中的牛百叶、鱿鱼、银耳等[2]；③食品生产过程中可能会产生甲醛，如食品发酵等。茶叶作为一种全球消费广泛的饮品，其安全性备受关注。甲醛作为潜在的食品污染物，虽然正常条件下其在茶叶中的含量较低，但在某些不规范加工或储存条件下可能会出现含量超标的问题。现有研究表明，茶叶可以吸附装修材料中释放的甲醛[3]。余涛等[4]用DNPH柱前衍生高效液相色谱法测定了啤酒中的微量甲醛和乙醛，得到了啤酒甲醛含量的检测结果。然而，目前并没有关于茶叶甲醛含量测定的研究。鉴于此，本文将利用高效液相色谱高分辨率、高灵敏度和良好重现性等优势，测定茶叶中甲醛的含量，以期探索出一个准确可靠、高效且低成本的检测方法，满足茶叶质量监控和食品安全评估的相关要求。

　　1材料与方法

　　1.1材料试剂与仪器设备

　　材料试剂：不同品牌的茶叶，市购；微孔滤膜：孔径0.22μm；有机相，100μg/mL甲醛标准溶液；乙腈，色谱纯；二氯甲烷，色谱纯；0.01 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液；2，4-二硝基苯肼（DNPH），纯度≥99.0%；0.4 g/L DNPH溶液。

　　实验所用仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪（HPLC）；二级管阵列检测器（DAD）；超声波清洗器；纯水/超纯水机；旋转蒸发器；涡旋混合器；电热恒温培养箱。

　　1.2色谱条件

　　色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6 mm×5μm×250 mm）；流动相：乙腈-水（1∶1）；流速：1.0 mL/min；波长：355 nm；进样量：10μL；柱温：40℃。

　　1.3实验方法

　　1.3.1样品处理

　　称取适量试样放于50 mL容量瓶中，加入40 mL纯水超声提取30 min后取出，放置至室温，补加纯水至容量瓶刻度并摇匀。过滤提取液，滤液备用。移取5 mL滤液于具塞离心管中，加入10 mL邻苯二甲酸氢钾溶液和5 mL DNPH衍生液，漩涡振荡均匀后于60℃电热恒温培养箱中反应60 min，取出冷却至室温。将试样液转移至分液漏斗中，加入20 mL二氯甲烷，振荡混匀后静置至分层，收集下层有机溶液；向分液漏斗中加入15 mL二氯甲烷，重复提取2次，并于圆底烧瓶中合并3次下层有机溶液，于40℃旋转蒸发至约2 mL，转移至5 mL容量瓶中，用乙腈洗涤圆底烧瓶，合并到5 mL容量瓶中并定容。用微孔滤膜过滤，滤液用高效液相色谱仪测定。

　　1.3.2标准曲线的制备

　　分别移取0.25、0.50、1.25、2.50、5.00、10.00、25.00、50.00、100.00、250.00μL的甲醛标准溶液置于具塞离心管中，加入5 mL纯水；其他操作同1.3.1中“加入10 mL邻苯二甲酸氢钾溶液和5 mL DNPH衍生液……”，得到甲醛质量浓度分别为0.005、0.010、0.025、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000μg/mL的系列标准溶液。

　　2检测结果与分析

　　2.1方法定性（定量）测量重复性

　　分别将系列标准溶液置于高效液相色谱仪下分析，并使用1260 Infinity工作站软件对各色谱峰进行处理，获得系列标准溶液的保留时间。计算得出，定性测量重复性相对标准偏差SRSD6[5]为0.044%~0.125%；平均保留时间为7.762 min；整体相对标准偏差为0.117%。同时，通过分析不同质量浓度甲醛标准溶液保留时间对应的峰面积，计算得出定量测量重复性相对标准偏差SRSD6为0.116%~2.480%。

　　2.2方法检出限（MDL）与方法定量限（RQL）

　　分别将系列标准溶液置于高效液相色谱仪下进行分析，并使用1 260 Infinity工作站软件计算信号与噪声比（选取色谱5.250~7.250 min作为基线噪声），结果如表1所示。试验结果显示，质量浓度0.010 mg/L的信噪比为3.2；质量浓度0.100 mg/L的信噪比为11.8。根据试样基线情况及茶叶样品的特性，将本方法的仪器检出限、定量限分别确定为0.010 mg/L、0.100 mg/L，计算得到的MDL和RQL分别为0.25 mg/kg、2.50 mg/kg。

　　2.3线性范围

　　分别对系列标准溶液进行进样分析，并使用1 260 Infinity工作站软件对各色谱峰进行处理。同时，以系列标准溶液的峰面积为纵坐标，以系列标准溶液的质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。研究发现，甲醛溶液质量浓度在0.005~2.000μg/L时线性关系良好。线性方程为y=335.156 06x+2.859 47，相关系数为0.999 71。

　　2.4萃取净化移取试样提取液量对检测结果影响

　　随机选取试样，称取2.0 g样品放于50 mL容量瓶中，加入0.1 mL甲醛标准溶液（100μg/mL），加入40 mL纯水超声提取30 min后取出，放置至室温，补加纯水至容量瓶刻度并摇匀。分别取加标提取液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL置于具塞比色管中进行衍生、萃取净化等操作，平行测定，计算平均回收率。以萃取净化移取试样加标提取液的体积为横坐标，平均回收率为纵坐标，绘制散点图。结果显示，当提取液取用量为5.0 mL时，试样加标回收率最高，达104.9%；之后若继续增加试样加标提取液的体积，则加标回收率降低。因此，将5.0 mL确定为该方法的试样提取液萃取净化移取量。具体如图1所示。

　　2.5方法准确度验证

　　随机选取甲醛含量小于RQL的试样2 g，分别按照MDL、5倍MDL、RQL、5倍RQL，即0.25、1.25、2.50、12.50 mg/kg的含量进行加标回收率试验，平行测定6次，计算平均回收率和相对标准偏差SRSD。试验得知，回收率为93.7%~110.2%，SRSD6为0.76%~2.68%。经验证，该方法准确度良好，具体如表2所示。

　　2.6样品分析

　　按照样品处理方法对样本进行检测，同时进行试样加标回收率实验。实验结果显示，各品牌的茶叶中均未检出甲醛含量（<2.5 mg/kg），试样加标回收率为90.5%~102.3%，说明该方法适用于茶叶甲醛含量测定。

　　3结论

　　本文采用纯水提取获得试样甲醛水溶液，与衍生剂2，4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯腙，再用二氯甲烷萃取、净化后，经色谱柱分离出试样液中的甲醛衍生物，并用DAD在355 nm波长下检测。实验确定，仪器检出限为0.010 mg/L，方法检出限和定量限分别为0.25 mg/kg、2.5 mg/kg，试样加标回收率及相对标准偏差能够满足甲醛检测需求；甲醛在茶叶样品中峰形尖锐，分离度良好，且与标准品存在明显的对应关系；试样提取液用于萃取净化的最佳取用体积为5 mL。实际茶叶样品检测结果表明，该方法适用于不同品牌茶叶的甲醛含量测定，试样加标回收率为90.5%~102.3%，精密度和准确度较高。

　参考文献

　　［1］CJ J.Formaldehyde exposure and leukaemia［J］.Occupational and Environmental Medicine,2004,61(11):875-876.

　　［2］李娟,陈斌,游京晶,等.水产品及水发产品中甲醛含量本底值的调查研究［J］.现代食品,2018(24):190-196.

　　［3］王金权,罗建中,张明,等.茶叶在甲醛污染治理中的试验性研究［J］.环境工程2005,23(4):47-48.

　　［4］余涛,陈秀杰,谭倩,等.DNPH柱前衍生高效液相色谱法测定啤酒中微量甲醛和乙醛［J］.中国卫生检验杂志,2012,22(8):1783-1787.

　　［5］国家质量监督管检验检疫总局.液相色谱仪检定规程:JJG 705-2014［S］.北京:中国计量出版社,2014.