摘要：不同产地的天冬总氨基酸含量存在差异。文章以水提法为基础，以L-天冬酰胺为对照，采用分光光度法，用2%茚三酮和磷酸二氢钾-氢氧化钠溶液来显色，并在568 nm下测定吸光度，对11个不同产地的天冬进行总氨基酸含量测定，进而计算天冬的总氨基酸含量。结果表明，天冬的总氨基酸含量较高，且不同产地的含量差异较大；L-天冬酰胺在4~14μg/mL质量浓度范围内与吸光度呈现良好的线性关系（R2=0.999 2），回归方程为A=0.072 7c+0.003，平均回收率101.429%，SRSD=3.9%。该方法可被应用于测定天冬的总氨基酸含量。

　　关键词：天冬;总氨基酸;产地;含量测定；可见分光光度法

　　天冬（Asparagi Radix）为百合科植物天冬（Asparagus cochinchinensis（Lour.）Merr.）的干燥块根[1]。其性味甘、苦，属寒，归肺肾经，具有养阴润燥、清肺生津的功效，适用于治疗肺燥干咳、顿咳痰黏、腰膝酸痛、骨蒸潮热、内热消渴、热病津伤、咽干口渴、肠燥便秘等症候。中药天冬的化学成分丰富，主要含有氨基酸类甾体类、多糖类及木脂素类等[2]。天冬富含的氨基酸类主要有天冬酰胺，以及甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丝氨酸等19种[3]。其氨基酸和多糖类成分的药理作用较为丰富[4]。近年来，以天冬作为原材料的制药需求呈快速增长态势[5]，但相关定量研究却较少[6-7]。在2020版中国药典中[1]，天冬的质量控制仅涉及水分、总灰分、二氧化硫残留量和醇溶性浸出物的检查，缺乏对内在质量的全面评价。因此，本文对天冬中的总氨基酸含量测定[6]进行了方法学考察。研究采用紫外分光光度法，并选用L-天冬酰胺作为对照品，通过2%茚三酮和磷酸二氢钾-氢氧化钠显色，计算天冬药材中总氨基酸的含量。研究于2023年11月收集了湖南永州、广西玉林、四川遂宁、福建南平等11个产地的天冬新鲜块根，除去杂质，迅速洗净、切片，用于测定不同产地的天冬药材中总氨基酸含量。测定天冬中氨基酸含量，对于科学评价天冬质量具有重要意义。

　　1主要仪器与材料

　　1.1仪器

　　主要使用的仪器有：北京普析通用仪器有限公司的TU-1900 UV分光光度计、翱艺仪器（上海）有限公司的UV-1200 UV-可见光谱仪、上海海康电子仪器厂的FA214型电子秤、昆山市超声波设备有限公司的KQ-600E型超声波清洗机、杰瑞尔电气有限公司的金坛市HH-1数显恒热水浴罐。

　　1.2材料

　　L-天冬酰胺（CAS：70-47-3，纯度≥98%），福州飞净生物科技有限公司;天冬Asparagi Radix药材（市售）；茚三酮、氢氧化钠、磷酸二氢钾，均来自国药集团化学试剂有限公司；所用的试剂都为分析纯；水为高纯水。

　　2方法与结果

　　2.1试剂制备

　　2.1.1检测试剂制备

　　测定氨基酸总量的试剂参照文献[6]，配置2%的茚三酮乙醇溶液；pH为6.8缓冲液；100 ug/mL L-天冬酰胺对照溶液。

　　2.1.2供试溶液制备

　　使用磨药碗精细打磨天冬成粗粉，并称取天冬粗粉1 g，加水50 mL，超声提取30 min，抽滤，将滤液定容至100 mL。

　　2.2检测波长选择

　　精密量取2.5 mL对照品溶液，并将其置于25 mL容量瓶中，加入水至10 mL，然后分别加入2 mL缓冲剂和显色剂，摇动均匀。当其在沸水中显色15 min后取出，立即放入冰水浴中5 mL，取出并加水至刻度，放置10 min。用对应试剂作空白对照，在400~800 nm范围内进行扫描。结果表明，对照液在565~569 nm区间时出现良好的吸收峰；经过几次扫描，确定了568 nm的测量波长。结果如图1所示。

　　2.3标准曲线绘制

　　精密吸取3.5 mL（质量14μg），加水至10 mL，然后分别加入2 mL的缓冲液和显色剂，使其均匀并在沸水中进行15 min的显色；将其从沸水中取出后马上冷却5 min，并补充到刻度，放置10 min后作为母液，倍比稀释[8]。在568 nm最大吸收波长处测定不同质量浓度标准品的吸光度（A）值并以L-天冬酰胺质量浓度(μg/mL）为横坐标、吸光度（A）值为纵坐标，绘制标准曲线。结果如图2所示。

　　2.4稳定性实验

　　用2.3法显色，于0、5、15、30、60、120 min进行多次测定。测定结果为SRSD=0.836%，表明显色120 min内稳定。

　　2.5精密度实验

　　定量吸取对照溶液，共6份，按照2.3的方法显色，测定计算结果为SRSD=0.141%，表明该法精密度良好。

　　2.6重复性实验

　　定量吸取同一批次6份样品溶液，按照2.3的方法显色，测定计算结果为SRSD=0.125%，表明该法重复性良好。

　　2.7加样回收率实验

　　各取6份已测得含量的天冬样品溶液，每份14μg，分别各加入L-天冬酰胺对照品溶液。按2.3项下的方法显色后，依法测定，计算回收率。结果显示，平均回收率为101.429%，SRSD为3.9%。

　　2.8样品的含量测定

　　精密吸取各样品液，按标准曲线绘制项下的方法显色并测定，以L-天冬酰胺（C4H8N203）计算各样品中的天冬总氨基酸含量。本实验共测定7个省11个不同产地的天冬样品总氨基酸含量。结果如表1所示。

　　3实验结果讨论

　　3.1天冬中总氨基酸含量结果分析

　　11个产地的天冬总氨基酸含量的范围是0.66%~12.61%，平均值为5.18%。由于产地不同，各品种天冬的总氨基酸含量存在差异。若以-40%为下限，天冬总氨基酸含量应不低于3.11%。

　　3.2不同产地天冬中总氨基酸含量比较

　　11个地区的天冬氨基酸总量存在一定差异，总体上看，湖南、湖北、福建和四川的天冬总氨基酸含量相对较高。结果表明，11个地区的天冬总氨基酸在东、西、北边缘含量较高；从云南高原到广西的山地，到湖南的山地，再到福建的丘陵，大致呈现逐渐增加的态势。贵州黔西南册亨、四川遂宁蓬溪、福建南平政和以及湖南永州江永的天冬总氨基酸含量较高，这是因为其纬度相似；而湖南湖北地区含量较高，则是因为经度相似，均属于亚热带温润季风区，降水丰富，利于氨基酸成分的积累。

　　湖北恩施氨基酸含量较高，原因在于其位于武陵山区。该地区四季分明、昼夜温差大，有利于中药材如黄精充分吸收阳光和雨露，且该地山地林地面积广，地表腐殖质多，喀斯特地貌地表岩层排水性较好，林中雨露充足光照强，有利于天冬生长，可促进其自身氨基酸合成。湖南永州天冬的总氨基酸含量明显高于湖南娄底，因湖南永州南岭北麓，虽然两者都属于中亚热带潮湿季风区，具有夏季高温、多雨的特点，但位于北麓的天冬处于山体阴坡，光照时间比娄底短，既具有亚热带湿润季风气候的特征，又在山区海拔高度、地形地势影响下形成了阴、凉、湿的山区气候特点，正好适应天冬喜阴怕强光的习性。因此，更有利于天冬自身氨基酸的形成。广西等地天冬总氨基酸含量最低,可能是由于其沿海，纬度较低、气候炎热，常年强降雨或强降雪，整体气温较低，且土壤多为偏酸性的红壤，腐殖质较少，虽然地表植被较多，但地面大多闷热，不利于天冬自身氨基酸成分的积累。

　　实验结果显示，不同产地的天冬总氨基酸含量差异较大：湖南永州江永的天冬总氨基酸含量最高，为12.61%；贵州遵义习水的天冬总氨基酸含量最低，为0.66%，二者相差近20倍。可见，受气候、环境、温度、湿度、光照、土壤等因素影响，不同产地的天冬总氨基酸含量存在较大差异。

参考文献

　　［1］国家药典委员会.中国药典(一部2020版)［M］.北京:中国医药科技出版社,2020.

　　［2］张渝渝,魏江平,谭春斌,等.天冬化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物的预测分析［J］.中国野生植物资源,2023,42(9):70-80.

　　［3］吴俊杰.中药天冬研究概况［J］.实用中医内科杂志,2012,26(8):78-79.

　　［4］吴飞,刘梦迪,李月侠,等.天冬中总氨基酸及多糖的提取工艺研究［J］.池州学院学报,2017,31(3):60-63.

　　［5］韦树根,马小军,柯芳.中药天冬研究进展［J］.湖北农业科学,2011,50(20):4122-4124.

　　［6］刘亮,刘英波,周英信,等.天冬中总氨基酸的含量测定［J］.中国民族民间医药,2012,21（15）:45-47.

　　［7］马家驰,项勤,刘浙创,等,异硫氰酸苯柱前衍生法测定天冬中天冬素含量［J］,科技通报,1990,6(3):152-154.

　　［8］张高博,谢承乾,陈晓敏.野樱莓中绿原酸提取工艺研究［J］,生物化工,2022,8(5):36-39.