精制狗皮膏中粉防己碱含量测定论文

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2025-01-08 11:45:46 来源：作者：liziwei

摘要：目的：建立精制狗皮膏中粉防己碱含量检测方法，并对分析方法验证。方法：GL Sciences InertSustain C18 4.6×250 mm×5μm色谱柱；以甲醇为流动相A，乙腈为流动相B，水（每30 mL加0.41 g十二烷基磺酸钠、0.1 mL冰醋酸）为流动相C，进行梯度洗脱；流速1.5 mL/min；柱温30℃;检测波长为280 nm。结果：得到线性方程A=76.227C-0.007 8（r=1），线性关系良好，各组回收率在92.48%~105.73%之间，RSD≤4.0%。结论：本文拟定方法

　　摘要：目的：建立精制狗皮膏中粉防己碱含量检测方法，并对分析方法验证。方法：GL Sciences InertSustain C18 4.6×250 mm×5μm色谱柱；以甲醇为流动相A，乙腈为流动相B，水（每30 mL加0.41 g十二烷基磺酸钠、0.1 mL冰醋酸）为流动相C，进行梯度洗脱；流速1.5 mL/min；柱温30℃;检测波长为280 nm。结果：得到线性方程A=76.227C-0.007 8（r=1），线性关系良好，各组回收率在92.48%~105.73%之间，RSD≤4.0%。结论：本文拟定方法可用于精制狗皮膏胶浆及药片中粉防己碱含量测定。

　　关键词：精制狗皮膏；粉防己碱；含量测定

　　精制狗皮膏功能主治为舒筋、活血、散寒、止痛，用于筋骨痛、急性挫伤、扭伤、风湿痛、关节痛、胁痛、肌肉酸痛等症，属于橡胶贴膏剂，执行标准有卫生部部颁标准中药成方制剂第八册WS3-B-1665-93，标准中没有含量测定项，方东伟等开发了4种挥发性成分检测方法，但生产工序中因成分挥发前后工序含量可能不一致，故制药企业在精制狗皮膏工艺验证中对混合均匀性进行质量评价时，往往找不到有效的评价方法，本文在文献的基础上开发了精制狗皮膏中粉防己碱含量测定方法，并对拟定方法进行了方法学考察。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器

　　ThemoFisher U3000高效液相色谱仪；岛津AUW120D电子分析天平；粉防己碱对照品，110711-201810，标示量99.6%，自中国食品药品检定研究院；乙腈、甲醇，色谱纯；十二烷基磺酸钠，化学纯，其他试剂为分析纯。

　　1.2试验用样品

　　自制胶浆及药片样品，批号2201121，7 cm×10 cm（长×宽）。

　　2方法与结果

　　2.1含量测定方法

　　色谱条件与适用性：使用GL Sciences InertSustain C18 4.6×250 mm×5μm色谱柱，厂家货号：5020-07346；以甲醇为流动相A，以乙腈为流动相B，水（每30 mL加0.41 g十二烷基磺酸钠、0.1 mL冰醋酸）为流动相C，按表1中规定进行梯度洗脱；流速1.5 mL/min；柱温30℃;检测波长为280 nm。理论板数按粉防己碱峰计算应不低于2 000。梯度洗脱时间-流动相对应如表1。

　　对照品溶液的制备：取粉防己碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.02 mg的溶液，即得。

　　胶浆供试品溶液的制备：取胶浆约2 g，置已称重滤纸上精密称定，用滤纸将胶浆包住，放入250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入约35 cm2布片两片，再加入2%盐酸甲醇80 mL，摇匀，使胶浆附着于布上，待溶液澄清后，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1∶1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　药片供试品溶液的制备：取药片2片（140 cm2），置于250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入2%盐酸甲醇80 mL，摇匀，使胶浆附着于布上，待溶液澄清后，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1∶1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　2.2方法学考察

　　为验证上述拟定方法准确性，我们参考《中国药典》2020年版四部附录9101分析方法验证指导原则对拟定方法进行了方法学考察，考察情况简要说明如下：

　　2.2.1色谱条件

　　在《中国药典》2020年版一部防己【含量测定】项下检测条件基础上，进一步摸索出拟定方法所载色谱条件。

　　因该方法仅用于试验评价均匀度及产品质量指标变化情况，并未对色谱条件的耐用性进行考察，而是对色谱柱、流动相比例作出严格限定。

　　2.2.2专属性考察

　　阴性药材浸膏的制备：依照提取生产处方，取药材（不含防己）依生产工艺提取、浓缩，制成阴性药材浸膏。

　　阴性样品溶液制备：依照生产处方取2片量对应的原辅料及阴性药材浸膏，依供试品制备方法，制成阴性样品溶液。

　　另依法制备粉防己碱对照品溶液及供试品溶液。

　　在拟定色谱条件下，依次测试空白溶剂（50%甲醇）、阴性样品溶液、对照品溶液、供试品溶液，对应色谱图如图1。

　　色谱图显示：溶剂、阴性样品色谱图中，在对照品对应保留时间不存在干扰；供试品色谱图中，对照品对应主峰分离度良好。

　　2.2.3供试品制备方法考察

　　在前期条件摸索前提下，设计如下3种供试品制备方法做进一步考察：

　　药片方法1：取药片2片（共140 cm2），去除盖衬，黏贴面向内对折，剪成宽不过1 cm的碎片，置250 mL烧瓶中，精密加入2%盐酸甲醇50 mL，精密称重，加热回流3 h，称重，用2%盐酸甲醇补充减失重量，混匀，过滤，精密量取续滤液25 mL，置蒸发皿内蒸干，加流动相分多次溶解残渣并定容至50 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　胶浆方法1：取胶浆约2 g，置已称重滤纸上精密称定，用滤纸将胶浆包住，放入250 mL烧瓶中，加乙醚80 mL，振摇使胶浆分散，置通风橱内水浴将乙醚挥干，精密加入2%盐酸甲醇50 mL，精密称重，加热回流3 h，称重，用2%盐酸甲醇补充减失质量，混匀，过滤，精密量取续滤液25 mL，置蒸发皿内蒸干，加流动相分多次溶解残渣并定容至50 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　药片方法2：取药片2片（140 cm2），置250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入2%盐酸甲醇80 mL，摇匀，使胶浆附着于布上，待溶液澄清后，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1:1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　胶浆方法2：取胶浆约2 g，置已称重滤纸上精密称定，用滤纸将胶浆包住，放入250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入约35 cm2布片两片，再加入2%盐酸甲醇80mL，摇匀，使胶浆附着于布上，待溶液澄清后，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1:1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　药片方法3：取药片2片（140 cm2），置250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入2%盐酸甲醇80 mL，加热回流30 min，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1:1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　胶浆方法3：取胶浆约2 g，置已称重滤纸上精密称定，用滤纸将胶浆包住，放入250 mL烧瓶中，加入三氯甲烷80 mL，振摇使胶浆完全分散，加入约35 cm2布片两片，再加入2%盐酸甲醇80mL，加热回流30min，过滤，用三氯甲烷-2%盐酸甲醇（体积比1:1）溶液60 mL分两次荡洗烧瓶、膏布及滤器，并用玻棒挤出膏布中残液，合并滤液，蒸干，残渣加流动相溶解并定容至100 mL，滤过，取续滤液，即得。

　　在拟定色谱条件下，取各供试品溶液注入液相色谱仪测定峰面积，测定结果如表2。