摘要：目的：建立HPLC-MS/MS法同时测定电子烟烟油中非法添加的依托咪酯的含量。方法：分析采用WATERS CORTECS UPLC T3色谱柱（2.1×100 mm，1.6μm），流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱模式，色谱柱温度为40℃,进样量为1μL，电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式。监测模式：FULL MS。结果：依托咪酯在1.02~102.39 ng/mL范围内线性关系良好，r=0.999 5，平均回收率为99.62%，RSD为0.37%。结论：该方法结果准确可靠，排除了采用紫外光谱、液相色谱、红外光谱鉴别方法可能产生的干扰，可用于对电子烟烟油中非法添加依托咪酯的测定。

　　关键词：依托咪酯；HPLC-MS/MS；电子烟；烟油；含量测定

　　2024年初，我国部分地区，公安部门查处的案件中，出现了一些不法分子利用依托咪酯的麻醉作用，在电子烟烟油中非法添加依托咪酯，进行电子烟的销售，产生了严重的社会危害[1]。

　　依托咪酯是一种不溶于水的白色粉末状物质，具有镇静催眠的活性，是一种短效的非巴比妥类静脉麻醉剂，医院临床上主要作为一种麻醉药品，适用于全麻诱导，也可用于短时手术麻醉，起效快速，作用短暂，对人体中枢神经系统有较强的抑制作用[2-6]，在电子烟烟油中非法添加依托咪酯，它会随烟油雾化吸入体内。吸食后会使人体形成依赖，不法分子正是用依托咪酯的麻醉效果[2]，将其充当毒品替代品进行贩卖，而且依托咪酯的成本相比于毒品要低很多倍，且滥用人群以青少年为主，这严重危害公众特别是青少年的身心健康和生命安全。长期大剂量使用依托咪酯可抑制肾上腺皮质对促肾上腺素的应激，导致血浆皮质激素低于正常，引起暂时的肾上腺功能不全而呈现水盐失衡、低血压甚至休克。出现恶心、呕吐、呃逆症状。可能有过敏反应，皮肤出现红疹,给药后不自主的肌肉活动，出现肌阵挛、震颤、强直、寒战和运动不协调，严重者类似抽搐，肌张力显著增强。药物过量会对发育期大脑造成不良损伤，可加深睡眠，出现呼吸抑制甚至呼吸暂停而死亡。

　　国家药品监督管理局、公安部、国家卫生健康委员会决定从2024年10月1日起，将依托咪酯（在中国境内批准上市的含依托咪酯的药品制剂除外）列入第二类精神药品目录[7]。

　　目前，对于电子烟烟油中依托咪酯的检测尚属监管的空白领域[8]，检测方法只能参考《中国药典》2020年版二部依托咪酯原料药及依托咪酯注射液项下，主要包括了紫外分光光度法、高效液相色谱法[9]。此类方法对结果容易产生干扰，出现假阳性，产生误判。高效液相色谱-串联质谱法具有分离和检测稳定性高的特点。

　　本研究建立了使用高效液相色谱-串联质谱法对电子烟烟油中依托咪酯进行检测的方法，并对该方法进行了验证，比较了不同提取溶剂的作用，以期为电子烟的科学监管提供技术依据。

　　1实验材料

　　1.1仪器

　　QE Focus超高效液相色谱质谱联用仪，美国Thermo公司；MSE225S-100-DU型电子天平，精度为十万分之一，德国Sartorius公司；SQP型电子天平，精度为万分之一，德国Sartorius公司；KH5200DV型数控超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司；SCI-20-D型超纯水机，重庆科润水处理设备有限公司。

　　1.2试剂与药物

　　依托咪酯对照品，批号：101132-202203，含量：99.8%，来源：中国食品药品检定研究院；甲醇，色谱纯，批号：2023101102，来源：成都市科隆化学品有限公司；乙腈，色谱纯，批号：2023092801，来源：成都市科隆化学品有限公司；甲酸，优级纯，批号：2023080101，来源：成都市科隆化学品有限公司。

　　2方法与结果

　　2.1溶液制备

　　2.1.1供试品溶液

　　精密吸取电子烟烟油0.10 mL，置100 mL量瓶中加入甲醇40 mL，超声处理（功率200 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，使用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。

　　2.1.2对照品溶液

　　精密称取依托咪酯对照品0.010 26 g，置于100 mL量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，得到质量浓度为102.39μg/mL的溶液，于避光冷藏处保存。

　　2.2 HPLC-MS/MS分析条件

　　2.2.1色谱

　　WATERSCORTECSUPLC T3色谱柱（2.1×100 mm，1.6μm），流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脱模式（0～3 min，90%～80%B；3～16 min，80%~78%B；16～18 min，78%～50%B；18～19 min，50%~40%B；19～25 min，40%～5%B；25～30 min，5%~90%B；30～35 min，90%B），流速为0.3 mL/min,色谱柱温度为40℃,进样量为1μL。

　　2.2.2质谱

　　电喷雾离子源（ESI），正离子扫描模式，监测模式：FULL MS（离子扫描范围50～500 m/z），毛细管电压：4.0 kV，鞘气温度：350℃,鞘气流速：45 L/min，辅助气流速：15 L/min，吹扫气流速：5 L/min，质谱参数见表1，依托咪酯总离子流色谱图见图1。

　　2.3方法学考察

　　2.3.1线性关系考察

　　精密吸取“2.1.1”项下制得的对照品溶液，加甲醇逐级稀释制成质量浓度分别为1.02、5.12、10.24、20.48、51.20、81.91、102.39 ng/mL的标准系列溶液。以依托咪酯对照品质量浓度作为横坐标，以依托咪酯峰面积作为纵坐标，进行线性回归，曲线模式为线性、不过零点、权重为1/X，并将信噪比为3时的浓度作为检出限，信噪比为10时作为定量限，结果见表2。从结果可以看出，依托咪酯在质量浓度范围内线性关系良好，适合定量与定性分析。

　　2.3.2精密度试验

　　取依托咪酯对照品溶液适量，在“2.2”项下条件，连续测定6次，依托咪酯峰面积的RSD为1.68%，这表明测定的仪器精密度良好。

　　2.3.3稳定性实验

　　取样品S1制得的供试品溶液，在0、2、4、6、8、12、24 h分别进样测定依托咪酯含量，结果测得的依托咪酯峰面积的RSD分别在0.96%，这表明供试品溶液在24 h内避光条件下，测定的结果是较为稳定的。

　　2.3.4重复性实验

　　取样品S1，同一制备方法，制得6份供试品溶液，测定，得到依托咪酯含量RSD为2.76%，这表明该测定方法重复性较好。

　　2.3.5加样回收率实验

　　取依托咪酯含量已测定的供试品6份，按照“2.1.1”项下的制备方法，制得供试品溶液，加入适量的依托咪酯对照品溶液，测定，计算回收率（n=3），结果见图2。平均回收率为99.62%，RSD为0.37%，回收率结果良好。

　　2.4样品含量测定

　　本次共收到公安机关提供的疑似含依托咪酯电子烟烟油共78批次，分别编号为S1～S78，按“2.1.1”项下制备方法制备供试品溶液，如测定结果偏高，则用甲醇经适当稀释后重新进样测定，每份供试品平行测定3次，测定结果见图3。

　　从图3依托咪酯含量的结果图中可以看出，不法分子在电子烟烟油中加入的依托咪酯的含量是没有规律的，属于随机性的加入，因此无法进行聚类分析，有的加入量巨大，人体吸食后对健康构成了极其严重的危害[10]，属于严重的违法犯罪行为。

　　3讨论

　　对依托咪酯的检测方法，提取溶剂考虑到依托咪酯的溶解性，采用了甲醇，前期采用甲醇-水（体积比60∶40）、甲醇-水（体积比50∶50）、甲醇-0.062%醋酸铵溶液（体积比60∶40）等进行了测定，结果发现使用甲醇溶解时，依托咪酯的色谱峰峰形及质谱响应最优，故选择甲醇作为溶剂。本实验不仅研究了依托咪酯的液相色谱质谱联用方法，而且对公安机关查封的疑似含依托咪酯的电子烟烟油进行了含量的测定，发现依托咪酯容易捕获一个质子，形成了[M+H]+的离子，在确定电离模式与流动相以后，以不同的碰撞能量对系统条件进行了优化，最终得到质谱的具体参数。依托咪酯在电子烟烟油中的非法加入，对人体健康构成了极大的危害，随着2021年7月21日合成大麻素整类管制后，以依托咪酯、美托咪酯的“烟粉”和“烟油”、含天然阿片类物质的“卡痛叶”等替代物质为主的新型毒品不断地出现，依托咪酯相比传统毒品具有相似或者更强的兴奋、致幻、麻醉等效果，过量吸食、饮用替代物质会导致神志不清、昏迷、呼吸暂停、窒息死亡，部分人群还会出现狂躁症状甚至诱发精神障碍或心血管疾病，对身心造成不可逆危害。

　　4结论

　　本实验采用了HPLC-MS/MS法测定了电子烟烟油中非法添加的依托咪酯含量，该方法灵敏度高，结果快速准确可靠，可为电子烟目前的质量控制提供科学的方法，并为公安机关对电子烟的监管提供科学依据。

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