摘要：为分析探讨不同抗凝管对部分凝血激活酶时间（PTT）结果的影响，文章分别对两个厂家生产的抗凝管的管帽、管体和抗凝剂进行PTT试验。与空白或阴性对照组相比，2种抗凝管的管帽均对PTT无显著影响（P>0.05）；抗凝管A的管体对PTT无显著影响（P>0.05），但抗凝管B的管体的PTT显著低于空白和阴性对照组（P<0.05）；与空白对照组相比，2种抗凝管中的抗凝剂均对PTT无显著影响（P>0.05），但与阴性对照组相比，其PTT显著升高（P<0.05）。由此可知，影响抗凝管PTT结果的主要因素是抗凝管的管体部分。

　　关键词：抗凝管；部分凝血激活酶时间；影响因素

　　凝血四项，作为血栓和止血系统的过筛试验，在临床上常用于术前了解患者的凝血状况，是控制抗凝药物用量的测定指标。然而，目前用于测定凝血四项的抗凝管的种类繁多，材质也各不相同。部分凝血激活酶时间（PTT）是标准GB/T 16886.4-2022中开展体外血栓形成试验推荐的检测指标。由于本实验室测得的不同厂家的枸橼酸钠抗凝管的PTT结果不尽相同，因此，本文分别对抗凝管的管帽、管体及抗凝剂开展部分凝血激活酶时间试验，以找出影响抗凝管PTT结果的因素。

　　1材料与方法

　　1.1仪器与试剂

　　主要的检测仪器是由日本Sysmex公司生产的Sysmex CA600系列全自动凝血分析仪及其配套反应杯。主要试剂包括：兔脑磷脂（批号：SRP014-0821），购于Bertilab；氯化钙试剂（批号：563877），购于西门子。阳性对照材料为巴斯德吸管，阴性对照材料为高密度聚乙烯（批号：KOM357），购于USP。

　　1.2分组

　　根据厂家的不同，将2种抗凝管设置为样品A和样品B，且2种抗凝管均为枸橼酸钠抗凝剂。每种抗凝管按照管帽、管体和抗凝剂部位分为3组，分别为试验组1：A1，B1；试验组2：A2，B2；试验组3：A3，B3。另设空白对照组、阴性对照组、阳性对照组。

　　抗凝剂与管体分离：先将抗凝管进行离心，取出抗凝剂，备用；然后用纯化水冲洗管体内壁3次；再用氯化钠注射液清洗管体内壁3次，甩干后备用。

　　1.3试验方法

　　1.3.1贫血小板血浆（PPP）的制备

　　取5只健康成年新西兰兔，体重为2.5~2.8 kg，心脏采血共100 mL，以2 000 g的离心力离心10 min，取出上清液即为PPP，置于4℃环境中保存备用。

　　1.3.2实验步骤

　　根据标准GB/T 16886.12-2017[3]，称取0.20 g管帽按照0.2 g/mL的比例加入1 mL PPP；管体按公称容量加入2 mL PPP；抗凝剂按1∶9（实际应用）的比例加入PPP；阴性对照材料按3 cm2/mL比例加入PPP；阳性对照材料按6 cm2/mL加入PPP；空白对照组不加任何材料的PPP；每组各设置3个平行实验。

　　各管轻轻地混匀后置于水浴恒温振荡器中，在37±2℃下60 r/min振荡孵育15 min。孵育结束后，将各管PPP转移至新的预冷离心管中，置于冰浴中待测。各管测试前均需置于漩涡振荡器中振荡15 s，并用全自动凝血分析仪测定凝血时间。

　　结果按照如下公式计算：BC（%）=t/t0×100%

　　式中：BC为各组平均凝血时间占空白对照百分比；T为测试样品（阴性对照材料、阳性对照）平均凝血时间；t0为空白对照平均凝血时间。

　　1.4结果分析

　　本文应用SPSS 22.0对结果进行单因素方差分析，以均值±标准差（Mean±SD）的形式来表示。P<0.05表示差异具有统计学意义。

　　2结果

　　结果表明，2种抗凝管的管帽与空白对照及阴性对照组相比均无显著性差异（P>0.05）（见表1）。抗凝管A管体的凝血时间与空白及阴性对照组相比无显著性差异（P>0.05）；抗凝管B管体的凝血时间明显低于空白及阴性对照组（P<0.05）（见表2）。2种抗凝管中的抗凝剂与空白对照组相比均无显著性差异（P>0.05），但与阴性对照组相比均有显著性差异（P<0.05），且其凝血时间比空白对照及阴性对照组都要高（见表3）。

　　3讨论

　　部分凝血激活酶时间指的是再钙化的枸橼酸盐血浆加上部分凝血激活酶后的凝固时间。其试验原理为：在37℃条件下，将兔脑磷脂作为凝血的活性表面，激活内源凝血途径，同时在Ca2+的参与下，使凝血酶原转变为凝血酶，将纤维蛋白原转变为纤维蛋白，并观察贫血小板血浆凝固所需时间，即为部分凝血激活酶时间。PTT是内源凝血系统较为敏感的试验，常用于评价医疗器械是否为内源凝血系统激活物。PTT试验也是GB/T 16886.4-2022标准中体外凝血试验的推荐方法之一。本实验室先前进行的研究表明，不同厂家生产的抗凝管会对PTT的试验结果产生影响，因此本文通过对抗凝管各部件分别进行PTT试验，分析影响抗凝管凝血时间的因素。

　　抗凝管由管帽、管体和抗凝剂3部分组成，本文分别对这三个部件/组成进行了PTT试验。研究表明，试验1组中，管帽对凝血时间无影响，主要是因为目前的管帽多为改性庚基橡胶材料，这是一种血液相容性较好的材料，不会与血液成分发生反应，因此也不会激活凝血因子，对凝血时间也无影响。试验3组中，枸橼酸钠抗凝剂与空白对照组相比，对PTT无显著影响，但比空白对照组及阴性对照组的结果均要高。枸橼酸钠抗凝剂的抗凝原理是通过枸橼酸钠与血液中的钙离子螯合，以消耗血液中游离的钙离子，从而达到抗凝的效果。钙离子作为凝血过程中的凝血因子之一，在血液凝固过程中发挥着至关重要的作用。血液中加入过多的枸橼酸钠，就会消耗血液中的钙离子，使血液不再凝固，从而延长凝血时间。现有研究指出，抗凝比例为1∶5的抗凝血与比例为1∶9的抗凝血相比，前者的凝固时间更长。而本试验结果显示，抗凝剂与PPP按照1∶9的比例混合后，PTT结果会比正常值略高，这与已有研究结果恰好一致。试验2组发现，抗凝管B的管体可以激活凝血酶，使PTT结果降低，并明显低于正常结果，但抗凝管A管体的PTT结果与空白组一致。结合管帽和抗凝剂的研究结果分析，本文认为影响抗凝管PTT结果的主要因素是抗凝管的管体。王延群曾经报道，不同材质的真空采血管对凝血时间有影响，且与采血管的材质有关。有的采血管为玻璃材质，如果抗凝管内壁处理不好，不光滑的内表面就会激活多种凝血因子，导致血液的凝固速度加快，凝固时间变短。这也是本实验选择使用巴斯德吸管尖头或玻璃珠作为阳性对照的原因。此外，抗凝管一般要进行硅化处理，如果管壁硅化不好也会激活凝血因子，导致凝血时间缩短。由此可见，凝血管的质量直接影响着凝血时间的长短。在本实验中，抗凝管A和B的PTT试验结果明显不同。

　　综上所述，在本实验所设置的条件下，影响抗凝管PTT结果的主要因素是抗凝管的管体，这与抗凝管的材质或工艺存在极大的关联。抗凝管的材质、工艺或表面涂层的好坏会直接影响血液相容性实验的结果。此外，基于测试原理进行分析，不同质量的抗凝管可能会对临床凝血指标APTT的结果产生不同的影响，但其影响程度还有待进一步研究。

　    参考文献

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