摘要：文章探究了爵床总黄酮有效部位在对抗醋酸泼尼松致小鼠实验性骨质疏松方面的作用及机制。实验对象为50只小鼠，随机分为正常对照组、爵床总黄酮有效部位高、中、低剂量组，以及模型组。通过给小鼠灌胃醋酸泼尼松，诱导小鼠发生实验性骨质疏松症。每组小鼠分别灌胃相应药物，每日一次，连续4周后取血清检测生化指标，并对小鼠股骨进行骨物理和骨生化指标检测。结果显示，醋酸泼尼松模型组小鼠的股骨中骨羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量明显降低（P<0.01)，血清中血钙、血磷、碱性磷酸酶含量明显升高（P<0.01)；而爵床总黄酮有效部位剂量组相对模型组，小鼠股骨骨重和骨质含量明显提高（P<0.01)，且血清中碱性磷酸酶含量显著增加（P<0.05)。该结果验证了爵床总黄酮有效部位能对抗小鼠实验性骨质疏松的作用机制。

　　关键词：爵床总黄酮；有效部位；骨质疏松；生化指标

　　爵床，是爵床科爵床属植物爵床（Rostellularia procumbens（L.）Ness）的干燥全草，早见于《神农本草经》，又称疳积草，小青草，刺眼老母草等。其传统上被认为具有清热解毒、活血止痛的功效，主要分布于我国江西、湖北、浙江、江苏等地，且资源丰富。爵床含有木脂素、三萜、黄酮、香豆素、生物碱和脂肪酸等类型的化合物。孙彦君等[3]报道了黄酮类成分山柰酚具有广泛药理活性，包括抗骨质疏松、雌激素样作用等。日本研究学者的报道也表明，爵床中的黄酮类成分具有预防和防止骨质疏松的作用，有助于降低骨质疏松骨折的风险。基于此，本文以多指标检测项为基础，探究了爵床总黄酮有效部位在抗骨质疏松方面的作用效果及影响机制。

　　1实验材料

　　1.1实验材料与仪器

　　爵床药材（产自江西）采用爵床总黄酮有效部位(每克约含总黄酮0.70 g，约相当于药材200 g），临用前用蒸馏水配制成适当质量浓度备用。

　　TD25-WS多管架自动平衡离心机来自江苏龙冈医疗器械厂；全自动生化分析仪来自美国Beckman公司；醋酸泼尼松来自东芝堂药业有限公司；羟脯氨酸试剂盒、无机钙、磷试剂盒，碱性磷酸酶（ALP）试剂盒均购自北京中生生物工程高技术公司；无水乙醇来自北京化学试剂公司。

　　1.2实验动物

　　昆明种小鼠，生产合格证号为JZDW，No：2014-0973，由江西中医药大学实验动物科学部提供。

　　2实验方法与结果

　　2.1方法

　　爵床总黄酮有效部位的制备：取2 kg爵床全草晒干后研磨，60℃烘干，过孔径0.250 mm（60目）筛备用→先用25倍量石油醚90℃回流4 h→减压抽滤回收石油醚，除去脂溶性成分→再加入25倍药材量的80%乙醇，90℃回流提取2次，时间为1.5 h→滤过，得爵床醇提液→离心过滤→大孔树脂精制纯化→浓缩干燥，制成干粉。

　　骨质疏松模型建立与分组实验：参考相关文献[4-5]，将50只昆明种小鼠随机分成5组，每组10只，分别为正常对照组（生理盐水5 mL/kg灌胃）；醋酸泼尼松模型组（5 mg/kg醋酸泼尼松灌胃）；爵床总黄酮有效部位高、中、低剂量组，先给予5 mg/kg泼尼松，1 h后再分别给予30、20、10 mg/kg(药量/小鼠质量)，给药量为5 mL/kg。每日1次，连续4周。

　　股骨的物理指标检测：将小鼠经摘眼球并取血的方式处死，然后取左侧股骨；随后，去除股骨上的附着肌肉和软组织后，分别称量其湿重和干重。根据参考文献，使用游标卡尺测量股骨的长度（股骨大转子和股骨颈汇合处最低点到股骨踝间窝的长度）、股骨横径（股骨曲面的第三转子下行至股骨干交接处间的距离）。

　　血清生化指标检测：将小鼠摘眼球取血，分离血清，用生化分析仪检测血清中钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）含量。

　　骨钙、磷含量检测：取小鼠左侧股骨，除净附着的肌肉和软组织研碎，每份骨样本加6 mol/L HCl 5 mL。在108℃下消化16 h之后过滤，稀释相应倍数后选用相应试剂盒测定钙、磷的含量，计算骨矿含量/骨重（BW）值。

　　骨羟脯氨酸含量测定：取上述滤液0.2 mL于2 mL容量瓶中，加6 mol/L的氢氧化钠调pH至6，取出处理后按羟脯氨酸试剂盒的使用说明进行测定。

　　统计处理：所有测定指标均用x±s表示，并用SPSS16.0软件进行数据分析。

　　2.2结果

　　2.2.1各组小鼠股骨物理指标检测结果

　　研究结果显示，与正常对照组相比，醋酸泼尼松模型组小鼠的股骨湿重、干重明显较低（P<0.05）；而爵床总黄酮有效部位低、中、高剂量组与模型组相比，数值增高，且具有显著性差异（P<0.01）。股骨长度各组相当，无明显变化。模型组小鼠股骨横径相对正常对照组显著减小（P<0.01）；而爵床总黄酮低、中、高剂量组股骨横径则呈现增大趋势（P<0.01）。具体数据如表1所示。

　　2.2.2各组小鼠骨生化指标检测结果

　　研究显示，与正常对照组相比，醋酸泼尼松模型组小鼠的骨羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量明显降低（P<0.01)，表明用醋酸泼尼松长期灌胃小鼠可促使小鼠骨有机质含量的丧失。与醋酸泼尼松模型组相比，爵床总黄酮有效部位各剂量组的小鼠股骨羟脯氨酸、钙、磷含量均明显增加（P<0.01）。具体如表2所示。

　　2.2.3各组小鼠血清生化指标检测结果

　　结果显示，与正常对照组相比，醋酸泼尼松模型组小鼠的血钙、血磷和碱性磷酸酶含量均有所升高（P<0.01)。这可能是由于醋酸泼尼松促进了骨代谢和骨吸收，并同时抑制了骨生长。血清中碱性磷酸酶含量可以反映骨形成的活跃程度。模型组血清中ALP含量升高。与模型组相比，爵床总黄酮有效部位剂量组的血钙、血磷含量明显降低，同时血清中ALP含量显著升高（P<0.05）。这说明爵床总黄酮有效部位能够增强骨形成作用，从而改善醋酸泼尼松引起的小鼠骨质疏松症状。具体数据如表3所示。

　　3讨论

　　实验结果表明，长期大剂量灌胃醋酸泼尼松可引起小鼠股骨的骨重下降、骨质含量降低。其原因可能是长期使用糖皮质激素使骨内骨代谢加强，抑制骨生成，造成骨质成分的比例改变，进而导致骨的脆性增高、韧性下降。而应用爵床总黄酮有效部位灌胃的小鼠实验组，在骨生化指标、骨物理指标和血清生化指标方面，相对于模型组来说，均明显提高，骨质疏松症状得到了有效缓解。这说明，爵床总黄酮有效部位对小鼠实验性骨质疏松症有良好的对抗作用。综上，本实验表明，醋酸泼尼松可抑制小鼠的骨生长并引起骨丢失，而爵床总黄酮有效部位具有对抗小鼠实验性骨质疏松的作用，但其改善骨质疏松的深层机制尚不明确，有待进一步的科学实验探究。

参考文献

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