[摘要] 目的 探讨在支原体肺炎诊断中选择实时荧光聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)检测 的价值，并分析该方案的诊断效能 。方法 选取 2022 年 8 月—2023 年 10 月来宾市人民医院收治的 1 200 例疑 似支原体肺炎患儿为研究对象，所有患儿均采集血清和呼吸道分泌物，用化学发光法测定血清中肺炎支原 体抗 体 ，用实时荧光PCR法检测呼吸道分泌物中的肺炎支原体核酸(Mycoplasma Pneumoniae Nucleic Acid, MP-DNA)，以病原学检查结果为金标准，对比各个方案的诊断效能，分析不同年龄段患儿的肺炎支原体 DNA 检 测 结 果 。 结果 实 时 荧 光 PCR 检 测 灵 敏 度(99.36%)、特 异 度(98.08%)、准 确 度(99.08%)、阳 性 预 测 值 (99.36%)、阴性预测值(98.08%)高 于 MP 血 清 学 方 法 检 测 ，差 异 有 统 计 学 意 义(χ2= 16.312、7.686、23.788、 7.595、16.119.P 均<0.05)。 结论 在支原体肺炎诊断中应用实时荧光 PCR 检测方案可提高准确率，同时该方 案具有早期、快速、简便等优势，可为临床医师制定治疗方案提供参考。

　　[关键词] 实时荧聚合酶链式反应检测,支原体肺炎,诊断,血清标本,鼻咽拭子标本

　　支原体肺炎是由支原体感染引起的疾病，作为 儿童最常见的呼吸系统疾病之一[1] 。支原体肺炎感 染人体后经过 2~3 周潜伏期，此时在临床表现为干 咳、发热、咽痛、头痛等，甚至部分患儿无明显症状， 且该病可通过飞沫和直接接触传播，因此易在人群 密集环境中发生[2] 。统计显示，近年随着空气环境、 饮食习惯等的变化，该病发生率持续升高，若未及 时治疗可引起脑膜炎等并发症，严重威胁患儿身心 健康状态[3] 。既往针对支原体肺炎以血清中检测出 的支原体抗体为主要依据，但经血清免疫学研究发 现，支原体等微生物进入人体后需要一定时间引起 免疫应答继而产生抗体，因此血清支原体抗体在支 原体感染诊断中存在一定漏诊[4] 。近年随着医疗技 术的发展及临床对分子生物学研究的不断深入，实 时 实 时荧 光 聚合 酶链 式 反应(Polymerase Chain Re ‐ action, PCR)技术被广泛应用于临床，为深入分析该 方案在支原体肺炎诊断中的价值，本文选取 2022 年 8 月—2023 年 10 月来宾市人民医院收治的 1 200 例 疑似支原体肺炎患儿为研究对象，现报道如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　选取本院收治的 1 200 例疑似支原体肺炎患儿 为研究对象，分别采集其血清和呼吸道分泌物，用 化学发光法测定血清中肺炎支原体抗体，用实时荧 光 PCR 法检测呼吸道分泌物中的肺炎支原体核酸 (Mycoplasma Pneumoniae Nucleic Acid，MP-DNA)。统计发现 1 200 例患儿中男 684 例，女 516 例;年龄 112 岁，平均(5.14±0.82)岁;入院原因：发热841 例，干咳197 例 ，头 痛 162 例 ;症 状 出 现 时 间 1~22 d，平 均 ( 10.41±1.42)d。本研究上报医院医学伦理委员会并 获得审批。同时经患儿家属知情同意(LW2023-02)。

　　1.2 纳入与排除标准

　　纳入标准：①存在干咳 、发热 、咽痛 、头痛等症 状，且符合《儿童社区获得性肺炎管理指南》中相关 诊断标准[5];②年龄 1~ 12 岁;③临床各项资料齐全; ④本研究患儿家属知情，并签署知情同意书;⑤未 采取免疫抑制剂或免疫增强药物治疗;⑥无脏器组 织损伤;⑦急性期及恢复期双份血清抗体滴度呈 4 倍 及 以 上 升 高 ;⑧ 入 院 24 h 内 支 原 体 抗 体(Myco ‐ plasma Antibody)MP-Ab≥1∶160.

　　排除标准：①自愿退出本次研究者;②入院前 2 周使用阿奇霉素等大环内酯类抗生素治疗者;③入 院后治疗中出现严重不良反应者;④病历资料不完 善者;⑤混合病原菌感染者;⑥未按要求完成随访 者;⑦先天性免疫缺陷者;⑧营养不良者。

　　1.3 方法

　　1 200 例 患 儿 均 采 集 其 血 清 和 呼 吸 道 分 泌 物 ， 用化学发光法测定血清中肺炎支原体抗体，用实时 荧光 PCR 法检测呼吸道分泌物中的 MP-DNA，在实 施检查前为患儿及其家属讲解具体检查流程、注意 事项等，同时告知其标本采集过程中注意事项，确 保其积极配合。

　　MP 血 清 学 方 法 检 测：血 清标本 采集 患 儿 的 静 脉 全 血 2~3 mL 于无 菌 生 化 管 中 ，并 分 离 出 血 清 待 检，化学发光法肺炎支原体抗体检测试剂盒由亚辉 龙生物科技股份有限公司提供 ，仪器使用亚辉龙 ICERSiFlash 3000-C 化 学 发 光 测 定 仪 ，检 测 结 果 判 定：抗肺炎支原体 IGM 抗体(Anti Mycoplasma Pneu ‐ moniaeIGM, MP-IGM)结果在 0.9~ 1.1 coI 时，为可疑 感染;MP-IGM 结果>1.1 coI 时，为阳性，提示患儿处 于肺炎支原体急性感染期。

　　实时荧光 PCR 检测：标本采集要求为鼻咽拭子 (双拭子)：用一次性鼻拭子经由患儿鼻腔轻轻旋转 一周，将采集好的拭子头垂直插入标本采集管中 ， 同时用一次性咽拭子经由患儿的咽喉后壁、扁桃体 侧壁等处反复擦拭 2~3 次，将采集好的拭子头垂直 插入同一标本采集管中密封待检 。荧光 PCR 法肺 炎支原体核酸检测试剂盒由圣湘生物科技股份有 限 公 司 提 供 ，本 试 剂 盒 的 最 低 检 测 下 限 为 500.0 copies/mL;仪 器 为 上 海宏 石 SLAN-96P 实 时荧 光 定 量 PCR 仪，扩增条件设置为 50℃ , 30 min，1 个循环 ， 95℃ , 1 min，1 个循环，95 ℃ , 15 s、60 ℃ , 30 s、45 个 循 环 ，25℃ , 10 s，1 个 循 环 ，荧 光 通 道 选 择 FAM 、 VIC 通道 。 阳性结果：动力学曲线呈“S ”型，FAM 通 道 Ct 值≤40.且 VIC(内标通道)≤40;阴性结果：FAM 通 道 Ct 值 >40.VIC(内 标 通 道)动 力 学 曲 线 呈“S ” 型 ，且 VIC(内标 通 道)Ct 值 ≤40;对 于 阳性标本 ，内 标检测结果不作要求;对于阴性样本，其内标检测 应为阳性(Ct 值≤40)，若其内标 Ct 值>40 或无显示 ， 则该样本的检测结果无效，应查找并排除原因，并对此样本重新采样，进行重复试验。

　　1.4 观察指标

　　1.4.1 诊断结果 以病原学检查结果为金标准，分析各个方案结果。

　　1.4.2 诊断效能 分析各个方案诊断效能，灵敏度=真 阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数)×100%，特异 度 = 真 阴 性 例 数/(假 阳 性 例 数 + 真 阴 性 例 数)× 100%，阴性预测值=真阴性例数/(真阴性例数+假阴 性例数)×100%，阳性预测值 = 真阳性例数/(真阳性 例数+假阳性例数)×100% 。准确度=(真阳性例数+ 真阴性例数)/总例数×100% 。

　　1.5 统计方法

　　以 SPSS 23.0 统 计 学 软 件 分 析 数 据 ，计 数 资 料 (诊断效能值)采用例数(n)和率(%)表示，组间比 较采用 χ2 检验 。P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 两种方法诊断结果对比

　　以病原学检查结果为金标准，支原体肺炎阳性939 例，阴性 261 例 。见表 1.

　　2.2 两种方法诊断效能对比

　　实时荧光PCR检测灵敏度(99.36%)、特 异 度 (98.08%)、准确率(99.08%)、阳性预测值(99.36%)、 阴性预测值(98.08%)高于 MP 血清学方法检测，差 异有统计学意义(P 均<0.05)。 见表 2.

　　3 讨论

　　支原体肺炎是除病毒、细菌外极易引起儿童肺 炎的常见病原体，在全球范围内每年均有支原体肺 炎感染病例报告，且呈现持续 、散发或不定期的特 征 。支原体肺炎的传染率较高，多在中小学 、幼儿 园等相对封闭的场所暴发 ，加之该病无特异性症 状，多表现为发热、咳嗽、咳痰等，因此，漏误诊率较 高，若未及时控制随着病情加重可诱发肺外感染 、 心力衰竭、全身炎症反应等，威胁患儿生命[6-9]。

　　肺炎支原体缺乏细胞壁，用针对抑制细胞壁合 成发挥抗菌作用的头孢菌素类 、β 内酰胺类抗生素 治疗支原体肺炎是无效的，而大环内酯类抗生素的 抗菌机制是控制细胞内蛋白质的合成，因此大环内 酯类抗生素治疗支原体肺炎效果理想，故及早实施 诊断对制订治疗方案有重要作用[10-11]。

　　本研究显示，实时荧光 PCR 检测在支原体肺炎 诊 断 中 效 果 理 想[11] 。 MP 血 清 学 方 法 具 有 操 作 简 单 、速度快等特点，但其灵敏度 、特异度较低，极易 出现假阳性的情况 。实时荧光 PCR 检测技术是一 种新兴的体外核酸扩增技术 ，可同时扩增多个标本，直接反映患儿的感染情况，该方法可通过探针 实时监测扩增时的荧光信号 ，不必进行电泳等操 作，可缩短检测所需时间，同时可提高诊断准确率， 但需要注意该方案对样本采集和操作环境要求较 高，若样本处理出现差错可直接影响诊断结果，增 加诊断难度，因此临床需要对操作人员综合能力进 行培养[12-15]。

　　本 研 究 显 示 ，实 时 荧 光 PCR 检 测 灵 敏 度 (99.36%)、特异度(98.08%)、准确度(99.08%)、阳性 预测值(99.36%)、阴性 预测值(98.08%)高 于 MP 血 清 学 方 法 检 测 ，差 异 有 统计 学 意 义(P<0.05)，该 结 果与王晶等[16]研究中 RTFQ-PCR 诊断灵敏度 、特异 度 、阳 性 预 测 值 和 阴 性 预 测 值 分 别 为 90.48%、 93.02%、95.00%、89.96%，这 一 结 果 接 近 ，可 见 支 原 体肺炎诊断中应用实时荧光 PCR 检测可行性较高， 究其原因在于实时荧光 PCR 检测是唯一一个将基 因拷贝数进行定量的方法，且检验操作较为智能， 可减少人工误差;其次该方案特异度、灵敏度较高， 将 DNA 杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融 合，应用荧光探针和光电传导，直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化，以获得定量结果，相当于 在 PCR 反应过程中自动完成了 Northern 杂交，杜绝 了传统 PCR 开放检测对环境的污染和由此导致的 假阳性，提高诊断准确率[17]。

　　综上所述，实时荧光 PCR 检测在支原体肺炎诊 断中的应用价值较高，临床医师可结合诊断结果制 定合理的干预方案 ，达到控制病情改善预后的目的。

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