[摘要]目的探讨宫颈癌甲基化分子分型与疾病短期复发及远处转移预测的关系，识别关键预后因素。方法回顾性选取2018年1月—2024年12月齐齐哈尔医学院临床病理诊断中心保留病理组织标本的130例宫颈癌患者的临床资料（训练集100例，独立验证集30例）。按患者在1年内是否复发及是否发生远处转移分为无进展组和复发/远处转移组。通过免疫组化染色分析甲基化调控蛋白表达，并检测治疗后血清肿瘤标志物水平。结果研究发现，国际妇产科协会（International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO）分期较高的患者更容易出现疾病进展，且淋巴脉管浸润状态在复发/远处转移组中更高；DNMT1、DNMT3B和TET2蛋白表达水平在复发/远处转移组中显著高于无进展组；鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag）和糖类抗原125（carbohydrate antigen 125,CA125）水平在复发/远处转移组中也显著高于无进展组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。多变量分析确定了FIGO分期、淋巴脉管浸润状态、DNMT 1、DNMT3B、TET2蛋白表达及SCC-Ag和CA125为关键预后因素。外部验证结果支持这些发现。结论本研究揭示了FIGO分期、淋巴脉管浸润状态、SCC-Ag、CA125、DNMT 1、DNMT3B和TET2蛋白表达在宫颈癌短期复发及远处转移中的潜在作用。这些发现为进一步理解宫颈癌的分子机制提供了新的视角，并为临床预后评估提供了有价值的参考。

　　[关键词]宫颈癌；甲基化；复发；远处转移；预测

　　宫颈癌是全球女性癌症相关死亡的主要原因之一，术后复发和远处转移是影响患者预后的核心挑战。中国每年新发宫颈癌病例占全球的28.8%，死亡人数约5万人，占全球死亡总数的17.24%[1]。现有临床模型基于传统病理特征进行预后预测，敏感性和特异性普遍较低，难以满足精准医学需求[2-3]。DNA甲基化是一种重要的表观遗传修饰方式，参与调控基因表达[4]。DNMT 1、DNMT3B和TET2蛋白在维持和调节DNA甲基化水平中起关键作用。DNMT 1主要负责维持已有的甲基化模式，而DNMT3B则参与新甲基化的建立；TET2通过氧化5-甲基胞嘧啶，促进去甲基化过程。这些蛋白质的异常表达可能导致基因组不稳定性和肿瘤抑制基因的沉默，从而促进肿瘤的发展[5-7]。近年来，基于甲基化特征的分子分型逐渐成为研究热点[8]。然而，针对宫颈癌的甲基化分子分型研究相对较少，特别是在预测短期复发及远处转移方面，尚缺乏系统的探索。本研究旨在评估甲基化分子分型与宫颈癌短期复发及远处转移的关系及其预测价值，现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　回顾性选取2018年1月—2024年12月齐齐哈尔医学院临床病理诊断中心保留病理组织标本的130例宫颈癌患者的临床资料，其中2018年1月—2023年12月100例患者作为训练集，2024年1—12月30例患者作为独立验证集。记录患者在1年内是否复发以及是否发生远处转移，1年内没有发生复发或远处转移的患者定义为无进展组，训练集80例，验证集24例；1年内发生复发或远处转移的患者定义为复发/远处转移组，训练集20例，验证集6例。本研究经齐齐哈尔医学院临床病理诊断中心伦理委员会审核批准（2025XJS-03）。

　　1.2纳入与排除标准

　　纳入标准：①经组织病理确诊为宫颈鳞癌或腺癌；②初诊时无远处转移；③术后随访资料完整且时间≥12个月；④病理标本完整性≥80%，肿瘤细胞占比≥60%；⑤建档时患者或家属对研究内容知情同意。

　　排除标准：①合并其他恶性肿瘤病史者；②随访期间失访或非肿瘤相关死亡者。

　　1.3资料收集方法

　　通过医院电子病历系统收集患者人口学资料（年龄、体重指数、生育史、民族、病理类型）、临床病理特征[国际妇产科协会（International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO）分期、分化程度、淋巴脉管浸润状态]、免疫组化结果（DNMT 1、DNMT3B、TET2蛋白表达水平）及实验室指标[鳞状细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag）和糖类抗原125（carbohydrate antigen 125,CA125）]水平。所有患者接受标准化治疗方案，统计患者术后1年内局部复发及远处转移情况，使用盆腔MRI及胸部CT进行评估。收集患者术后6个月检测血清SCC-Ag及CA125数据。记录治疗相关不良事件及生存状态。病理标本处理与甲基化检测流程与第一阶段一致，确保数据客观性。

　　进行免疫组化染色分析评估宫颈癌患者组织中DNMT 1、DNMT3B和TET2蛋白的表达情况。将手术切除的组织样本固定在4%多聚甲醛溶液中，并进行石蜡包埋处理，随后切成厚度为4μm的切片。所有切片均按照标准免疫组化染色程序进行处理：依次进行脱蜡、梯度酒精水化、抗原修复、阻断与封闭步骤。具体来说，切片经过二甲苯脱蜡和梯度酒精水化后，使用柠檬酸盐缓冲液（pH 6.0）进行高压抗原修复，然后用正常山羊血清进行封闭以减少非特异性结合。分别孵育针对DNMT1（货号：ab19905）、DNMT3B（货号：ab2851）和TET2（货号：ab94580）的一抗，室温孵育过夜。次日，切片经PBS洗涤后，孵育相应的二抗，室温避光孵育2 h。使用DAPI染色液对比染色细胞核，最后用抗荧光淬灭封固剂封固切片。所有使用的抗体均来自Abcam plc（英国）。染色结果通过显微镜观察并拍照记录。在光学显微镜下，每张切片选取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞。细胞核或细胞质呈现棕黄色的细胞被计为阳性细胞。染色强度评分标准如下：无染色计0分，弱染色（淡黄色）计1分，中等染色（棕黄色）计2分，强染色（棕褐色）计3分；同时计算阳性细胞比例（0~100%）。最终，宫颈癌组织中DNMT 1、DNMT3B和TET2蛋白的表达水平通过以下公式计算得出：H-score评分=（不同染色强度阳性细胞比例×染色强度分值）之和，总分为0~300分。

　　利用全血自动分析仪（生产企业：Abbott Labo-ratories，型号：ARCHITECT i2000SR）测定血清中SCC-Ag及CA125的水平。采集两组患者5 mL空腹静脉血，使用离心机（生产企业：Eppendorf，型号：5427 R）以离心半径10 cm，3 500 r/min的速度离心15 min，随后收集上清液作为血清样本。采用SCC-Ag试剂盒（生产企业：Abbott Laboratories，货号：CF051163）和CA125试剂盒（生产企业：上海透景生命科技股份有限公司，货号：CP011010）进行检测，操作严格遵循说明书步骤。

　　1.4统计方法

　　采用SPSS 29.0统计学软件处理数据，年龄、体重指数等计量资料，经Shapiro-Wilk检验符合正态分布，以（x-±s）表示，组间比较行两独立样本t检验；生育史、民族等计数资料以例数（n）表示，组间比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。进行COX回归分析、LASSO分析与ROC曲线分析，评估宫颈癌甲基化分子分型对疾病短期复发及远处转移的预测价值，并进行外部验证。

　　2结果

　　2.1两组患者一般资料比较

　　无进展组与复发/远处转移组在年龄、体重指数、生育史、民族构成以及病理类型方面比较，差异均无统计学意义（P均>0.05）。见表1。

　　2.2两组患者临床病理特征比较

　　无进展组与复发/远处转移组FIGO分期、淋巴脉管浸润状态比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。两组分化程度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

　　2.3两组患者免疫组化结果比较

　　无进展组与复发/远处转移组DNMT1、DNMT3B及TET2蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表3。

　　2.4两组患者实验室指标比较

　　无进展组与复发/远处转移组SCC-Ag和CA125水平比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。见表4。

　　2.5宫颈癌甲基化分子分型与疾病短期复发及远处转移的关系

　　首先使用LASSO回归进行变量选择，通过交叉验证确定了最优的lambda值，该值最小化了均方误差，并选择了具有非零系数的预测因子。这一过程保留了以下变量作为宫颈癌短期复发及远处转移的关键预后因素：FIGO分期、淋巴脉管浸润状态、DNMT 1蛋白表达、DNMT3B蛋白表达、TET2蛋白表达、SCC-Ag、CA125。将上述7个研究变量纳入Cox回归模型进行分析，结果表明，所有变量均为宫颈癌短期复发及远处转移独立影响因素（P均<0.05），见图1、表5。

　　2.6宫颈癌甲基化分子分型对疾病短期复发及远处转移的预测价值

　　ROC结果显示，FIGO分期、淋巴脉管浸润状态、DNMT 1蛋白表达、DNMT3B蛋白表达、TET2蛋白表达、SCC-Ag、CA125的ROC曲线下的面积AUC为0.656、0.637、0.767、0.744、0.744、0.672、0.688，见表6、图2。

　　2.7外部验证数据分析

　　在外部验证数据中，年龄、体重指数、生育史、民族、病理类型、FIGO分期及淋巴脉管浸润状态在无进展组与复发/远处转移组之间比较，差异均无统计学意义（P均>0.05）。两组间DNMT 1蛋白表达、DNMT3B蛋白表达、TET2蛋白表达、SCC-Ag和CA125水平比较，差异均有统计学意义（P均<0.05）。外部验证集的ROC具有较高的预测价值，见表7、图3。

　　3讨论

　　在本研究中，FIGO分期较高的患者更有可能发生复发或远处转移。无进展组中大部分患者处于FIGO I期，而复发/远处转移组中有更高比例的患者处于FIGOⅡ期。这表明肿瘤的临床分期可能与患者的预后密切相关。无进展组中淋巴脉管浸润的比例较低，仅为37.5%，而在复发/远处转移组中这一比例明显增加，达到了65%。这些结果提示，淋巴脉管浸润可能是导致疾病进一步恶化的重要机制[9-10]。

　　本研究发现，DNMT 1蛋白在无进展组中的表达水平低于复发/远处转移组。同样，DNMT3B和TET2蛋白在无进展组中的表达水平也低于复发/远处转移组。这些蛋白质参与DNA甲基化调控过程，异常表达可能导致基因组不稳定性和肿瘤抑制基因的沉默，从而促进肿瘤的发展。DNMT 1负责维持已有的甲基化模式，DNMT3B参与新甲基化的建立，而TET2则通过氧化5-甲基胞嘧啶促进去甲基化过程[11-12]。智艳芳等[13]研究表明，DNMT 1在宫颈癌组织和细胞中高表达，可以促进宫颈癌细胞生长和转移，与本研究结果相符。

　　复发/远处转移组中的SCC-Ag和CA125水平高于无进展组。这一结果提示SCC-Ag和CA125水平可能反映了疾病的进展情况[14]。已有研究表明，SCC-Ag和CA125水平在宫颈癌的诊断和监测中有一定应用价值，如袁明英等[15]的研究显示，宫颈癌进展与SCC-Ag和CA125的表达水平呈正相关。本研究则为这些标志物在预测宫颈癌短期复发及远处转移方面提供了新的证据。

　　多变量分析显示FIGO分期、淋巴脉管浸润状态、DNMT 1蛋白表达、DNMT3B蛋白表达、TET2蛋白表达、SCC-Ag和CA125在预测疾病进展方面具有重要意义，表明综合考虑多种生物标志物可以提高预后评估的准确性。ROC曲线分析显示，DNMT 1、DNMT3B和TET2蛋白表达的AUC均较高，显示出较好的预测能力。外部验证的结果与训练集一致，进一步证实了这些因素在预测宫颈癌短期复发及远处转移中的重要性。本研究的发现仍需在更大队列中得到进一步验证。此外，研究主要聚焦于蛋白表达水平与预后的相关性，对这些表观遗传调控因子在宫颈癌中的具体作用机制尚未进行深入的功能实验探索。

　　本研究揭示了甲基化分子分型在宫颈癌短期复发及远处转移中的潜在作用，为临床预后评估提供了有价值的参考。未来的研究应继续深入探讨这些蛋白质的生物学功能及其在宫颈癌发展中的具体机制，以期为宫颈癌患者的个性化治疗提供更有效的策略。

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