摘要：评估实时荧光RT-PCR技术在手足口病（HFMD）病原学检测中的应用成效，分析以粪便标本为检测样本时，其在疫情防控、疫情判定中的检测价值。选取2024年1月—2024年12月疑似HFMD患儿59例，采集其粪便标本，运用实时荧光RT-PCR技术进行病原检测，记录并分析检测结果。59例疑似HFMD患儿粪便标本中，含29例阳性、30例阴性。其中，阳性样本中，CV-A16检出18例（30.51%），CV-A6检出5例（8.47%），EV-71检出6例（10.17%）。实时荧光RT-PCR技术以粪便为标本检测手足口病病原，具有较高的灵敏度和特异性，对疫情防控、疫情判定及病原流行情况掌握有重要价值。

　　关键词：手足口病；实时荧光RT-PCR；病原学检测

　　手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是一类在低龄儿童群体中高发的急性传染性病症，其致病元凶隶属于肠道病毒家族，其中，CV-A16、EV-71、CV-A6等特定亚型，是诱发该疾病的核心病原体。此类病症的传播能力突出，极易在儿童聚集场景中扩散蔓延，易在托幼机构等场所引发聚集性或暴发性疫情，对儿童健康及公共卫生安全构成持续威胁[1]。因此，快速、准确的病原学诊断与分型对于病例早期识别、疫情性质判定及后续针对性防控措施制定至关重要。在基层公共卫生实践中，尤其是社区卫生服务中心及卫生院等机构，往往缺乏病原检测能力，多依赖临床症状进行诊断，这在一定程度上影响了疫情监测的敏感性与预警的及时性。实时荧光逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）技术凭借其卓越的检测灵敏度、精准的特异性识别能力，以及快速出具检测结果的突出特性，在病原体核酸检测领域占据核心地位，是该领域公认的关键金标准技术之一[2]。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　纳入2024年1月—2024年12月某区疑似HFMD患儿59例，年龄9月～11岁。所有病例均符合卫生部《手足口病诊疗指南（2018年版）》中疑似病例定义，并获取监护人知情同意。排除标准：①合并其他严重系统性疾病；②发病后已使用抗病毒药物可能影响病原检出；③粪便标本量不足或保存不当。样本来源于社区卫生服务中心、卫生院等无病原检测能力的机构根据临床症状初诊后送检的粪便标本，以及部分医疗机构已临床诊断、需进一步复核或分型的病例标本。补充排除、纳入。

　　1.2方法

　　采集疑似HFMD患儿新鲜粪便标本约2～5 g，置于无菌采样管中，-20℃保存备用。采用专用核酸提取试剂盒对患儿粪便样本中的病毒RNA进行提取；依据国家现行相关技术规范，运用实时荧光RT-PCR技术开展病原学检测工作。针对柯萨奇病毒A组16型（CV-A16）、柯萨奇病毒A组6型（CV-A6）及肠道病毒71型（EV-71）的保守基因区段，设计专属特异性引物与探针。检测过程中同步设置阳性对照、阴性对照及空白对照，以保障结果可靠。PCR反应体系总体积设定为20μL，在实时荧光PCR检测设备上完成扩增程序，具体循环参数为：50℃恒温孵育10 min，95℃预变性30 s；随后以95℃变性5 s、60℃退火延伸30 s为一个循环，连续进行45个循环。最终通过分析荧光信号变化曲线形态及循环阈值（Ct值）判定检测结果，判定标准为：Ct值≤38且荧光曲线呈现典型“S”型时，判定为阳性样本。

　　1.3观察指标

　　①病原检出率与构成比：分析59例疑似HFMD患儿粪便标本中CV-A16、CV-A6、EV-71的阳性检出情况，计算各病原在总阳性样本中的构成比例。

　　②方法学性能评估：结合临床诊断与疫情资料，评估实时荧光RT-PCR技术以粪便为标本在HFMD病原检测中的灵敏度、特异性及可靠性。

　　③检测时效性分析：记录样本采集至出具结果的时间，分析该方法在疫情防控中是否满足快速检测与早期预警的需求。

　　④公共卫生应用价值：探讨该检测策略在疫情监测、聚集性疫情判定、病原谱变迁跟踪及防控措施调整中的作用。

　　1.4统计学方法

　　采用描述性统计分析方法对检测结果进行整理分析。

　　2结果

　　2.1诊断结果

　　受试患儿中，男性33例，占总样本量的55.93%；女性26例，占比为44.07%。从年龄分布特征来看，1～3岁幼儿为高发群体，该年龄段患儿达31例，占整体的52.54%。全部入选病例均表现出发热及手、足、口腔部位疱疹或溃疡等手足口病典型症状，符合手足口病疑似病例的临床诊断规范。样本来源方面，为社区卫生服务中心、卫生院等机构初诊后送检的标本，所有患儿均未接受过系统性抗病毒治疗。标本采集时间为发病后1～5 d，符合病原检测窗口期要求。

　　2.2检测结果

　　经实时荧光RT-PCR检测，59例粪便标本中阳性29例、阴性30例，总阳性率为49.15%。在阳性样本中，CV-A16检出最多，共18例，占阳性样本的62.07%，占总样本量的30.51%；其次为EV-71，检出6例，占阳性样本的20.69%，占总样本量的10.17%；CV-A6检出5例，占阳性样本的17.24%，占总样本量的8.47%（见表1）。未检出其他常见肠道病毒型别。结果显示，本地区当前流行的主要病原为CV-A16，与近年来国内部分地区的流行趋势一致。检测过程均设有质控对照，结果稳定可靠，说明该方法适用于基层实验室对HFMD病原的快速识别与监测。

　　3讨论

　　3.1实时荧光RT-PCR技术在手足口病病原检测中的优势

　　依托实验室已建立的实时荧光RT-PCR平台，本研究完成对59例疑似HFMD患儿粪便标本的病原检测，整体阳性率49.15%，并在同一次反应中实现对CV-A16、CV-A6、EV-71的分型，输出Ct值用于结果量化与风险分层。该方法在封闭体系内完成扩增与判读，配合特异性荧光探针，可有效降低开盖操作与气溶胶污染所致的假阴/假阳风险；对低载量靶核酸具有较高敏感性，支持多靶标并行检测，有利于在一次反应中同时识别主要致病型别[3]。其与常规方法相比，检测周转时间更短，通常可在较短时间内完成从样本接收到报告出具全流程，同时满足基层对快速、标准化病原学诊断的需求。全流程易于规范化与质量控制，适配现有实验室条件，在常态化监测与应急状态下可保持稳定的检测能力，能够为病例早期识别、聚集性事件预警与资源调度提供可靠技术支撑。

　　3.2以粪便标本作为检测样本的价值

　　在社区卫生服务中心、卫生院等机构普遍缺乏病原检测能力的背景下，选择粪便作为HFMD病原学检测的主要样本具有突出的适配性与可操作性。肠道病毒在肠道复制并经粪便排出，发病一定阶段内核酸载量较高；配合实时荧光RT-PCR，可在早期与病程中后期形成互补覆盖，提升检出机会并支撑复查随访[4]。与其他样本相比，粪便受上呼吸道定植与短暂污染的干扰较小，更便于冷链集中转运与批量检测，也更易获得患儿与家属的配合，适合在社区初诊-实验室复核-聚集性事件处置的闭环流程中应用[5]。

　　3.3对疫情防控工作的指导意义

　　随着多血清型交替流行与EV-71疫苗广泛接种带来的病原谱变化，防控重点从单一病原应对转向快速分型、精准预警与资源优化。在这一背景下，实时荧光RT-PCR为基层提供了可落地的技术抓手。检测结果能够在病例报告后尽快明确病原学诊断与分型，为风险范围划定、停课与消毒等综合防控措施的制定提供依据，缩短了从发现到响应的时间窗[6]。同时，标准化Ct值与分型结果有助于临床与公共卫生部门开展科学判定与报告，减少了仅凭临床表现导致的误判。持续积累地区病原谱构成与季节性变化，可为疫苗策略优化、健康教育与资源配置提供参考。此外，实时荧光RT-PCR在轻重症分层、院感防控与复课评估中亦能发挥支撑作用，可有效增强联防联控的时效性与一致性。

　　4结语

　　性与快速周转的优势，显著提升了手足口病病原学诊断与分型的可及性与稳定性。本研究显示，样本采集区域当前以CV-A16为主要流行型别，提示应继续强化病例监测、聚集性疫情快速判定与复课评估等关键环节，动态调整健康教育与资源配置。未来，将优化采样时机与频次、完善质控与结果判读规范，并探索与咽拭子/疱疹液等多样本策略的互补应用，以持续提升预警及时性与防控精准性。

参考文献

　　［1］庞绪慧.荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的价值研究［J］.中国实用医药,2025,20(4):67-69.

　　［2］王秀霞,李俊平.实时荧光PCR技术在手足口病检测中的应用价值分析［J］.系统医学,2024,9(15):17-20.

　　［3］叶莹,杨应松,阮燕如,等.荧光定量PCR技术与酶联免疫法在手足口病肠道病毒检测中的应用价值比较［J］.中国当代医药,2023,30(31):133-136.

　　［4］陈樱花.荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用价值分析［J］.基层医学论坛,2021,25(34):4970-4972.

　　［5］罗滢娟.荧光PCR技术在手足口病病毒核酸检测中的应用价值分析［J］.当代医学,2021,27(23):38-40.

　　［6］卢艳玲.实时荧光PCR与DNA测序技术检测手足口病病毒结果分析［J］.实验与检验医学,2021,39(3):534-537.