摘要：文章分析富集检测法在大样本量生食果蔬沙门氏菌检测中的应用。研究采用25 g样品进行直接增菌检测，并采用2 kg样品进行清洗-富集检测，分析黄瓜、西红柿中沙门氏菌的检测灵敏度，同时分析该病菌的耐药性。分析发现：大样本量清洗-富集检测法的检出限优于25 g直接增菌法；2 kg样本量的沙门氏菌检出率为9.4%，高于25 g检样量的0.7%，黄瓜、西红柿检出率为9.7%、9.0%，69.2%的菌株对至少1种抗生素耐药，46.2%存在多重耐药。大样本量清洗-富集检测法可提高生食黄瓜和西红柿中沙门氏菌的检出率，为生食果蔬沙门氏菌污染监测提供指导。

　　关键词：生食果蔬；沙门氏菌；富集检测法

　　食品安全与人民群众的身体健康与生命安全息息相关，也是维护经济发展和社会稳定的重要基础。食品细菌污染作为影响食品安全的常见危险因素，致病菌类型有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。其中，沙门氏菌作为一种重要的食源性致病菌，广泛分布于自然界，主要经被污染的食品传播给人类，从而诱发食源性疾病。摄入被沙门氏菌污染的食品后，人体可能会在6～72 h内出现腹痛、腹泻等急性胃肠炎症状[1]。大样本量筛查是保障食品流通环节安全的关键技术手段，富集检测法通过选择性增殖目标菌、降低基质干扰，有效解决了生食果蔬样本中沙门氏菌浓度低、检测假阴性率高的难题[2]。

　　1材料与方法

　　1.1材料与试剂

　　1.1.1所需样品

　　本研究所用样品为购自当地农贸市场的黄瓜和西红柿，均为生食果蔬，无明显病害和机械损伤。样品来源于本地区22家菜市场、15家超市及13家果蔬专卖店，共计139份样品，其中黄瓜72份、西红柿67份。每份样品采集量≥2.5 kg，遵循无菌操作原则，采集不同部位的样品，2 h内送回实验室检测。

　　1.1.2所需试剂

　　由北京陆桥技术有限责任公司提供缓冲蛋白胨水、四硫磺酸钠煌绿增菌液、氯化镁孔雀绿增菌液、XLT4琼脂培养基、胰蛋白胨大豆琼脂、沙门氏菌显色培养基；胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）；沙门氏菌；吐温80、氯化钠、氢氧化钠、盐酸革兰氏阴性需氧菌药敏板；DNeasy基因组提取试剂盒；Qubit dsBR检测试剂盒。

　　1.1.3所需仪器与设备

　　本研究所需仪器和设备包含：（1）电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司；型号ME204E）；（2）拍打式均质器（法国Interscience公司；BagMixer®400W）；（3）电热恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司；DNP-9272）；（4）电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司；DHG-9140A）；（5）恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司；LRH-250）；（6）自动微生物平皿螺旋加样系统（美国螺旋生物科技公司；Spiral Biotech EZ-SPIRAL）；（7）全自动微生物分析系统（法国生物梅里埃公司；VITEK®2 COMPACT）；（8）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（德国布鲁克公司；Bruker microflex LT/SH）；（9）荧光计（美国Thermo Fisher Scientific公司；Qubit®4）；（10）测序平台（美国Applied Biosystems公司；ABI 3730XL）；（11）改良摩尔拭子富集装置（美国Mole-Master公司；Mole-Master®MM-1）。

　　1.2方法

　　1.2.1制备标准菌株

　　取鼠伤寒沙门菌CMCC(B)50920的TSA平板新鲜二代培养物，用无菌0.9%氯化钠溶液制备1.5~2.0麦氏浊度的菌悬液，加入5%蔗糖-5%脱脂乳粉冻干保护剂，100μL/瓶分装后真空冷冻干燥22～24 h，制成定量冻干沙门氏菌（103 CFU/瓶）。取20个冻干样品复溶后计数，确认浓度为（1.52±0.11）×103 CFU/瓶，变异系数6.2%，-20℃保存备用。

　　1.2.2样品染菌处理

　　将冻干标准菌株复溶后梯度稀释，制备101 CFU/mL和100 CFU/mL的菌悬液。取1 mL菌悬液点涂于2 kg和25 g的黄瓜、西红柿样品表面，使接种量分别为100 CFU（n=3）和10 CFU（n=3），在生物安全柜中干燥5～10 min。另取相同重量未染菌样品作为阴性对照（n=3）。

　　1.2.3检测方法

　　25 g样品直接增菌检测法。将样品置于无菌均质袋中，加入225 mL BPW，600次/min拍打均质1 min，将pH调至6.8±0.2，在36℃下培养18～24h。取1 mL和0.1 mL预增菌液分别接种至10 mLTTB和RV培养基，在42℃下培养22～24 h，划线接种于XLT4琼脂平板和沙门氏菌显色培养基，在36℃下培养18~24 h，挑取可疑菌落进行MALDI-TOF-MS鉴定和生化确证。

　　2 kg样品清洗-富集检测法。将样品置于灭菌容器中，加入10 L无菌水和0.1%吐温80，浸泡5 min后揉搓清洗10 min，采用改良摩尔拭子富集装置对清洗液进行过滤富集，取出滤芯后按上述增菌、分离、鉴定步骤操作。

　　1.2.4市售样品检测

　　从每份样品中分别取25 g和2 kg，按上述两种方法进行沙门氏菌检测，记录阳性检出情况。

　　1.2.5药敏实验

　　参照CLSI推荐的肉汤稀释法，采用革兰氏阴性需氧菌药敏板测定分离菌株对16种抗生素的最低抑菌浓度（MIC），包括氨苄西林、头孢他啶等9类抗生素，以大肠埃希氏菌ATCC 25922为质控菌株，按CLSI M100-S32标准判读结果。

　　1.3数据处理

　　采用SPSS 25.0软件进行统计学分析，不同检样量和品种的检出率差异用X2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

　　2结果

　　2.1不同检测方法对黄瓜和西红柿中沙门氏菌的染菌回收结果

　　不同检测方法对黄瓜和西红柿中沙门氏菌的染菌回收结果见表1。

　　2.3沙门氏菌耐药性分析

　　耐药判定标准参照CLSI M100-S32；多重耐药定义为对3类及以上抗生素耐药，本研究中6株（46.2%）菌株为多重耐药，其中对氨苄西林-四环素-链霉素-复方新诺明耐药最为常见，具体结果见表3。

　　3讨论

　　近年来，食品安全事件频繁发生，其中以食源性致病菌污染事件较为常见，食品安全作为重要民生问题已引起社会各界的广泛关注，也成为食品卫生监督工作的重中之重。生食果蔬内沙门氏菌污染具有浓度低、分布不均的特点，传统25 g样品直接增菌检测因采样代表性不足，难以有效捕获目标菌，导致检出率偏低[3]。本文建立的2 kg大样本量清洗-富集检测法，通过扩大采样规模并结合改良摩尔拭子富集装置，显著提高了黄瓜和西红柿中沙门氏菌的检出灵敏度，检出限可达102 CFU/样品，市售样品检出率从0.7%提升至9.4%。归纳可得，大样本量检测法的优势主要体现在以下两方面：一是通过2 kg混合采样，减少沙门氏菌分布不均带来的采样误差，尤其适用于受灌溉水、粪肥局部污染的果蔬；二是采用10 L清洗液充分洗脱样品表面及缝隙中的沙门氏菌，结合高效富集装置浓缩目标菌，提高低浓度污染检出率[4]。此外，本研究采用定量冻干沙门氏菌进行染菌处理，更接近自然污染状态下的细菌生理特征，使方法验证结果更具可靠性。

　　本研究结果显示：市售黄瓜和西红柿中沙门氏菌的检出率分别为9.7%和9.0%，表明两种果蔬的污染风险相近。分离菌株呈现丰富的血清型多样性，表明污染来源复杂，可能与受污染的灌溉水、土壤、粪肥以及加工流通环节的交叉污染有关[5]。耐药性分析显示：69.2%的菌株存在耐药性，46.2%为多重耐药菌株，提示生食果蔬中的沙门氏菌可能来源于养殖环境，通过粪肥还田、灌溉水污染等途径扩散至果蔬生产环节。多重耐药菌株的存在增加了临床治疗难度，因此加强生食果蔬沙门氏菌耐药性监测具有重要意义。

　　综上所述，2 kg大样本量清洗-富集检测法可显著提高生食黄瓜和西红柿中沙门氏菌的检出率，该方法操作可行、灵敏度高，适用于大规模监测工作。市售生食黄瓜和西红柿存在一定程度的沙门氏菌污染，分离菌株具有血清型多样性和多重耐药特征，需加强生产、加工、流通全链条的风险管控。

参考文献

　　［1］普春敏,陈丽丽,索玉娟,等.食品中诺如病毒的分离、富集与分子检测技术研究进展［J］.上海农业学报,2024,40(5):131-141.

　　［2］马晨,陈雪华,钱程.海口市市售新鲜蔬菜微生物污染分析［J］.浙江农业科学,2015,56(3):396-401.

　　［3］代艳梅,郑吉和.常见不同类别食品致病菌监测对比研究［J］.中国卫生产业,2017,14(8):44-45.

　　［4］王翠,石慧.沙门氏菌在果蔬中的内化机制及污染源的追踪与防控策略［J］.食品与发酵工业,2025,51(16):421-427.

　　［5］刘嘉敏,杨彩群.等温扩增技术在果蔬汁中沙门氏菌检测中的应用［J］.现代食品,2025(18):191-193.