摘要：构建复方鲜竹沥液质量检测体系，以对照制剂为参照，评估3家厂商9批产品。采用HPLC指纹图谱结合化学模式识别，确定（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷、原儿茶酸和绿原酸为质量标志物。含量测定结果显示：5批原儿茶酸、2批绿原酸不足对照70%，3批南烛木树脂酚葡萄糖苷远低于检测限。所建方法可简便精准地评价市售制剂质量。

　　关键词：复方鲜竹沥液；中药指纹图谱；化学模式识别；质量标志物；含量测定

　　复方鲜竹沥液为中药复方制剂，在痰热咳嗽、痰黄黏腻等疾病治疗中效果显著[1-2]。《中国药典（2020年版）》收载的复方鲜竹沥液质量标准仅含3味药材的薄层鉴别与常规检查项目，缺乏主要有效成分的定性定量指标，难以对其质量进行系统控制[3]。中药对照制剂可保障投料可靠，指纹图谱能全面反映成分特征，均为重要的质控手段[4]。本研究以复方鲜竹沥液对照制剂为随行对照，建立HPLC指纹图谱及3种质量标志物含量测定方法，旨在评价不同厂家市售制剂的质量。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器

　　Agilent 1260II高效液相色谱仪（配DAD检测器，Agilent）；Direct-Q 8 UV-R超纯水系统（Merck Milipore）；XPR10超微量电子分析天平、FE28 pH计（均为Mettler Toledo）；FB224万分之一天平（上海舜宇恒平科学仪器）；FE28 pH计（Mettler Toledo）。

　　1.2试剂及对照

　　实验用水为超纯水；乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾为分析纯。糠醛、对羟基苯甲酸等4种对照品购自阿拉丁试剂（上海）有限公司；5-羟甲基糠醛、原儿茶酸等5种购自中国食品药品检定研究院；糠酸购自上海源叶生物科技有限公司；（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷购自成都普菲德生物技术有限公司，纯度均符合要求。

　　20批复方鲜竹沥液对照制剂（S1～S20）依照法定处方及工艺，根据《药品生产质量管理规范》（GMP）生产制备。A、B、C 3个公司共提供9批样品。

　　2样品制备

　　2.1单个对照品储备液

　　对照品贮备溶液（1 mg/mL)的制备方法：将5-羟甲基糠醛、糠醛、原儿茶酸、糠酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、隐绿原酸、香草醛、对香豆酸、槲皮苷、（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷及水杨酸按照要求称量5 mg，并分别保存于适宜的5 mL量瓶内，向其中加入50%甲醇充分稀释，达刻度后摇匀备用。

　　2.2对照品定位溶液（100μg/mL）

　　量取1 mL对照品储备溶液，转移至10 mL容量瓶中，以50%甲醇稀释至刻度线，摇匀备用。

　　2.3混合对照品溶液

　　移取对照品贮备溶液制成浓度为3、2、10、10、5、12、10、1、2、20、10、4μg/mL的混合对照品溶液。

　　2.4供试品溶液

　　吸取复方鲜竹沥液1.0 mL，经水系微孔滤膜（0.22μm）过滤弃去初滤液，收集续滤液即得。

　　2.5各单味药材供试品溶液

　　单味药材供试品溶液按《中国药典（一部2020年版）》制备后以“2.4”项方法处理。

　　3方法与结果

　　3.1色谱条件

　　安捷伦ZORBAX Eclipse plus C18柱（4.6×250 mm，5μm），以20 mM磷酸二氢钾（pH 2.1）（A）和乙腈（B）为流动相，进行梯度洗脱（0～15 min，96%A；15~50 min，96%～88%A；50～80 min，88%A；80～85 min，88%～70%A；85～100 min，70%～40%A；100～105 min，40%A；105～106 min，40%～96%A；106～110 min，96%A）；采用多波长切换程序对各组分进行检测（0～8.5 min，310 nm；8.5～30 min，254 nm；30~43 min，325 nm；43～57 min，310 nm；57～84 min，210 nm；84~110 min，254 nm）；流速1 mL/min；柱温35℃；进样量10μL。

　　3.2方法学考察

　　按照“2.4”项方法制备供试品溶液，依“3.1”项色谱条件进行6次连续测定以评估精密度，再进行0~24 h稳定性与重复性测试。通过计算各共有峰的相对保留时间与峰面积的相对标准偏差（SRSD<3%），验证方法的精密度、稳定性和重复性。

　　3.3指纹图谱的建立

　　取20批复方鲜竹沥液（S1~S20），按“2.4”项方法制备供试品，依据“3.1”节色谱条件进行HPLC分析。将结果导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012A版），以S10为基准图谱，对峰面积>0.05%的色谱峰进行多点校正与匹配，建立HPLC指纹图谱，共识别24个共有峰。其中，12个共有峰经混合对照品比对确认，含5-羟甲基糠醛等关键成分，涉及鲜竹沥、桔梗、鱼腥草等药材。19号峰分离良好且峰面积最大，选为参照峰。12个未知峰初步归属为多种药材相关成分。相似度评价显示，所有批次相似度均为1.000，一致性极佳，证实各批次质量稳定，能够为质量控制与评价提供可靠依据。

　　3.4化学模式识别

　　以24个共有峰峰面积为变量，采用SPSS 26对29批复方鲜竹沥液进行聚类分析，欧式距离为5时，样品聚为三类（B厂家S24～S26、C厂家S27~S29、对照制剂与A厂家样品）。经SIMCA-P 14.1进行主成分分析，提取8个主成分，累计方差贡献率97.50%，得分图分类结果与聚类分析一致。进一步开展偏最小二乘判别分析，模型参数R2X=0.981、R2Y=0.942、Q2=0.879，200次随机排列交叉验证（R2截距0.142、Q2截距-0.589）证实无过度拟合；VIP>1的4号峰（糠醛）、19号峰及20号峰（（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷）为导致样品质量差异的关键因素。

　　3.5复方鲜竹沥液3种质量标志物的含量测定

　　精密称取原儿茶酸9 mg、绿原酸7 mg置于10 mL量瓶中，另精密称取（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷6 mg置于另一10 mL量瓶中，加入50%甲醇定容摇匀，分别制得储备液I、Ⅱ；取储备液I 1 mL、储备液Ⅱ5 mL置于10 mL量瓶定容，得混合储备液；再取该储备液1 mL置于10 mL量瓶定容，即得混合对照品溶液。供试品溶液同“2.4”项下方法制备，色谱条件同“3.1”项。取混合对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分别加入50%甲醇定容至10 mL，制得系列工作液。各取10μL进样测定，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。由表1可知3种质量标志物的线性相关系数均>0.999，线性关系良好。

　　4结果与讨论

　　4.1色谱条件考察

　　以乙腈-20 mM/L磷酸水溶液（pH 2.1）为流动相、柱温35℃时，分离效果最佳。因不同色谱峰吸收特性存在差异，为全面捕获色谱信息，最终采用310、254、325、210 nm多波长切换检测法。

　　4.2基于化学模式识别的质量标志物筛选

　　经OPLS-DA模型筛选并结合成分稳定性（4号峰糠醛不稳定）、检测灵敏度及药效活性综合考量，最终确定了Q-marker的筛选策略[5]：保留君药中特征性、稳定且可测的（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷作为核心标志物，从臣药（鱼腥草、枇杷叶）的共有药效成分中，补充选择峰形好、性质稳定、药理活性明确且在不同厂家间也存在一定波动的原儿茶酸（5号峰）和绿原酸（11号峰），共同构成复方鲜竹沥液的Q-marker组合。

　　4.3含量测定结果分析

　　9批样品中，5批原儿茶酸、2批绿原酸含量不足对照制剂的70%，3批（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷含量低于检测限（2.98μg/mL）。复方鲜竹沥液中，君药鲜竹沥的特征性成分（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷在4批样品中的含量高于对照制剂，3批远低于对照制剂；臣药鱼腥草、枇杷叶的代表性活性成分—原儿茶酸、绿原酸亦存在含量差异。（+）-南烛木树脂酚-3α-O-β-D-葡萄糖苷是鲜竹沥的特征性成分[6-7]。部分厂家（如S21~S23）该成分极度缺乏，鲜竹沥的法定炮制工艺为干馏法，部分厂家可能出于成本或环保考虑，采用水煮法或水蒸气蒸馏法，这些方法难以将竹材中的木脂素类成分有效提取出来，导致其在终产品中含量极低甚至缺失[7]。原儿茶酸和绿原酸是鱼腥草、枇杷叶等臣药中的重要活性成分，具有抗炎、抗菌等作用[8-9]。部分厂家（如S25~S29）这两种成分的含量显著偏低，这可能源于臣药药材的道地性不佳、投料量不足，或是提取工艺未能最大化保留这些酚酸类成分。综上，含量测定结果与化学模式识别结果相互印证，共同揭示了当前市售复方鲜竹沥液产品质量参差不齐、部分产品存在质量缺陷的现状。

　　5结论

　　本研究以对照制剂为参照，在优化色谱条件的基础上，建立复方鲜竹沥液色谱指纹图谱及三种质量标志物定量分析方法，实现对市售制剂的系统质量评估。研究结果可直观反映产品质量差异，可为生产厂商规范现代化制备工艺、制定科学可行的质量控制标准提供技术支撑。

参考文献

　　［1］王丽,赵年昆.复方鲜竹沥液联合异丙托溴铵治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的临床研究［J］.现代药物与临床,2017,32(8):1565-1569.

　　［2］马静,肖凡,李晓琳.复方鲜竹沥液联合特布他林治疗儿童喘息性支气管炎的临床研究［J］.现代药物与临床,2019,34(9):2636-2639.

　　［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部2020年版)［M］.北京:中国医药科技出版社,2020.

　　［4］赵娟,谢世静,赵兴华,等.中药指纹图谱质控方法研究进展［J］.云南中医中药杂志,2020,41(1):82-86.

　　［5］刘昌孝.发展中药质量标志物(Q-marker)理论方法和策略,研究提升中药科学技术水平［J］.药学学报,2019,54(2):185-186.

　　［6］赵青群,付辉政,林凯鹏,等.鲜竹沥正丁醇部位化学成分研究［J］.中草药,2021,52(7):1891-1897.

　　［7］张贤睿,王莹,李耀磊,等.鲜竹沥化学成分、药理作用研究进展及质量标志物(Q-Marker)预测［J］.中草药,2024,55(3):1026-1033.

　　［8］肖旭坤,王翰华,阮洪生.枇杷叶化学成分和药理活性研究进展［J］.中医药导报,2019,25(21):60-66.

　　［9］武营雪,丁倩云,刘静,等.鱼腥草化学成分、药理及质量控制研究进展［J］.药物分析杂志,2022,42(1):108-120.