摘要：文章比较PCR法、直接涂片革兰染色法的NG检测价值。将2021年9月—2025年6月实验室保存的203份疑似淋球菌感染女性标本按症状分为有症状组111份、无症状组92份，均应用PCR法与直接涂片革兰染色法进行检测。PCR法的阳性检出率为75.37%，高于直接涂片法28.08%，有症状组二者检出率均高于无症状组（P<0.05），而PCR法对有、无症状样本的检出率均高于直接涂片革兰染色法，且P<0.05；PCR法灵敏度高，适用于无症状感染及女性标本检测。

　　关键词：PCR法；直接涂片革兰染色法；淋球菌；检测

　　淋病作为我国重点防治的乙类性传播疾病，其病原体NG主要引发泌尿生殖系统化脓性感染，若检测治疗不及时易导致盆腔炎、不育症等并发症，且会增加人类免疫缺陷病毒（HIV）传播风险[1]。早期精准检测是控制淋病传播、改善患者预后的关键环节。在目前实验室常用的淋球菌检测方法中，直接涂片革兰染色法凭借操作简便、快速直观的特点，在实验室初步筛查中应用广泛；而PCR法作为分子生物学检测技术的代表，凭借基因扩增的特异性优势，在低浓度病原体检测中展现出独特价值[2]。本文对比两种方法的检测性能，以期为不同检测需求下的方法选择提供依据。

　　1材料与方法

　　1.1材料来源

　　收集2021年9月—2025年6月实验室保存的疑似淋球菌感染女性标本203份，所有标本均来自宫颈分泌物，经实验室规范保存处理，符合检测要求。将来自存在宫颈口脓性分泌物、尿频尿急等症状患者的111份样本作为有症状组，将来自无明显临床症状患者的92份样本作为无症状组。

　　1.2仪器与试剂

　　1.2.1主要仪器

　　光学显微镜、实时荧光定量PCR仪、高速冷冻离心机、生物安全柜、恒温培养箱、电热恒温干燥箱。

　　1.2.2主要试剂

　　革兰染色液、淋球菌荧光定量PCR检测试剂盒，试剂盒包含引物、探针、DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等组分，有效期内使用；尿嘧啶N-糖基化酶；无菌0.9%氯化钠溶液；无菌采样拭子。

　　1.3检测方法

　　1.3.1直接涂片革兰染色法

　　将冷冻保存的标本取出，室温解冻后用无菌拭子蘸取标本分泌物，在清洁载玻片上轻轻滚动制成均匀薄层涂片，应避免涂抹过厚或过薄。将涂片置于室温自然干燥后，通过酒精灯外焰快速固定3次，2~3 s/次，避免高温过度损伤标本。按照革兰染色标准流程操作，依次滴加结晶紫染液染色1 min，水洗；滴加碘液媒染1 min，水洗；滴加95%乙醇脱色30 s，直至涂片无紫色脱落，水洗；滴加复红染液复染30 s，水洗。将染色后的涂片置于室温自然干燥并在油镜下观察。随机观察10个以上高倍视野，以中性粒细胞内或细胞外发现形态典型的革兰阴性双球菌为阳性判断标准。

　　1.3.2 PCR法

　　严格按照PCR试剂盒说明书操作，取200μL标本分泌物置于无菌离心管中，加入500μL核酸提取液，涡旋振荡混匀1 min，12 000 r/min离心5 min，弃上清；加入300μL洗涤液，涡旋混匀后12000 r/min离心3 min，弃上清；加入50μL洗脱液，65℃水浴10 min，12 000 r/min离心5 min，取上清液作为模板DNA，置于-20℃备用。总反应体积为25μL，其中PCR缓冲液5μL，dNTPs混合物2μL，引物（上游0.5μmol/L、下游0.5μmol/L）各1μL，探针（0.2μmol/L）0.5μL，DNA聚合酶1μL，UNG酶0.2μL，模板DNA5μL，无菌去离子水补足至25μL。50℃用UNG酶消化2 min；95℃预变性10 min；95℃变性15 s，60℃退火延伸30 s，共40个循环；每个循环的延伸阶段收集荧光信号。根据PCR仪自带软件分析结果，设定阈值线（Ct值），Ct值≤38为阳性；Ct值>38或无Ct值为阴性；若Ct值在35~38需重新检测，若仍为该范围则判定为阳性[3]。

　　1.4观察指标

　　对比两种方法的阳性检出率以及不同症状状态标本两种检测方法阳性检出率。

　　1.5统计学方法

　　采用SPSS17.0统计软件分析。计数资料以例数（n）和百分率（%）表示，两种检测方法的阳性检出率比较及不同组别的差异比较采用χ2检验，检验水准α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1两种检测方法总体阳性检出率比较

　　2.2不同症状状态标本两种检测方法阳性检出率比较

　　111份有症状标本的PCR法阳性检出率为80.18%，高于直接涂片革兰染色法的40.54%（P<0.001）；92份无症状女性标本的PCR法阳性检出率为69.56%，高于直接涂片革兰染色法的13.04%（P<0.001）。PCR法在有症状女性标本中的阳性检出率为80.18%，高于无症状女性标本的69.56%（P<0.05）；直接涂片法在有症状女性标本中的阳性检出率为40.54%，高于无症状女性标本的13.04%（P<0.001）。具体见表2。

　　3讨论

　　直接涂片革兰染色法作为传统的淋球菌检测方法，凭借操作简便、快速高效、成本低廉等优势，在临床初筛中应用广泛[4]。而PCR法作为分子生物学检测的代表技术，凭借高灵敏度、高特异性的特点，成为淋球菌检测的重要方法。

　　本研究以实验室保存的疑似淋球菌感染标本为研究对象，系统比较了两种方法的检测性能，为实验室检测方法的优化选择提供了数据支撑。结果显示：PCR法总体阳性检出率为75.4%，高于直接涂片革兰染色法的28.1%（P<0.001），表明PCR法在女性淋球菌检测中具有更突出的检出能力。该结果与相关研究结论一致，原因是直接涂片革兰染色法依赖在显微镜下观察淋球菌形态；而PCR法通过特异性扩增淋球菌靶基因片段，可放大低载量病原体信号，且不受杂菌干扰，能有效识别隐匿性感染[5]。

　　本研究发现，两种检测方法在有症状女性标本中的阳性检出率均高于无症状女性标本（P<0.05），且直接涂片法受症状状态影响更显著。有症状女性因宫颈分泌物中淋球菌载量较高，且伴有大量中性粒细胞浸润，便于显微镜下识别，直接涂片法阳性检出率达40.54%；而无症状女性淋球菌载量低，中性粒细胞数量少，杂菌干扰更明显，直接涂片法阳性检出率仅13.04%，难以满足隐匿性感染检测需求。对于PCR法，有症状女性标本阳性检出率80.18%，无症状女性标本69.56%，差异具有统计学意义，但整体灵敏度均显著高于直接涂片法。该结果表明，PCR法对女性淋球菌感染检测适应性更强。

　　PCR法具有高灵敏度和高特异性优势，能有效检测低载量淋球菌，尤其适用于无症状女性标本检测，本研究无症状女性标本PCR法阳性检出率达69.56%，高于直接涂片法，可有效降低女性隐匿性感染漏诊率。此外，PCR法检测速度较快、结果客观，不受操作者经验影响，重复性好。但PCR法也存在一定的局限性：其一，对实验室环境及仪器设备要求较高，需要配备实时荧光定量PCR仪等专用设备，且实验室需具备严格的防污染措施，避免扩增产物交叉污染造成假阳性结果；其二，检测成本较高，试剂盒价格昂贵，不适合基层实验室大规模用于筛查；其三，无法区分活菌与死菌，治疗后的患者，可能会因残留的死菌核酸导致假阳性结果，难用于疗效评价[6]。

　　实验室应基于两种检测方法的性能特点，根据检测需求合理选择检测方法，必要时通过联合检测提高淋球菌检出率。（1）大规模筛查及基层实验室初筛。对于有症状男性患者，可优先采用直接涂片革兰染色法进行初筛，阳性结果可直接报告，阴性结果建议进一步采用PCR法确认，以降低漏诊率。（2）无症状感染检测及女性标本检测：建议直接采用PCR法进行检测，以提高灵敏度，避免漏诊。（3）临床确诊及疑难病例检测：采用PCR法进行检测，必要时结合分离培养法进行确认，确保诊断结果的准确性。（4）疫情防控及流行病学调查：可采用PCR法进行快速检测，提高筛查效率，及时发现传染源，阻断传播途径[7]。

　　综上所述，PCR法对女性淋球菌检测灵敏度较高，适用于无症状感染及有症状标本；直接涂片法简便快速，可用作有症状女性的初筛方法。实验室可实际情况选择或联合两种方法，以提升女性淋球菌检出率，为淋病防控提供技术保障。

参考文献

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　　［2］李晓蝶,朱琳,洪毅勇,等.不同实验条件对淋病奈瑟球菌体外转化效率的影响［J］.中华皮肤科杂志,2024,57(3):240-245.

　　［3］冯文曦,曹红卫,赵静怡,等.应用荧光定量PCR技术检测淋球菌等性传播疾病病原微生物［J］.第三军医大学学报,2002,24(11):1357-1357,1360.

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　　［6］李雨欣,周华誉,张瑜,等.沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体核酸快速检测方法的建立［J］.中国病原生物学杂志,2025,20(2):158-163,170.

　　［7］李雅梅,彭俊平.核酸检测技术应用于淋球菌耐药监测:机遇与挑战［J］.国际流行病学传染病学杂志,2019,46(4):268-272.