摘要：为进一步了解野鼠携带布鲁氏菌的病原来源，特对新疆巴州地区野鼠及牛羊流产胎儿组织进行病原检测。采用PCR法对新疆巴州地区20只野鼠进行布鲁氏菌分子检测，并对收集的24份牛羊流产胎儿组织进行5种流产致病病原（胎儿弯曲杆菌、刚地弓形虫、胎儿三毛滴虫、胎儿毛滴虫、布鲁氏菌）的PCR筛查。结果显示，2只野鼠肝、脾中检测到布鲁氏菌，阳性率为10%（2/20），牛羊流产胎儿组织5种病原检测结果只有布鲁氏菌为阳性，阳性率为29.17%（7/24）。此外，对野鼠和牛羊流产胎儿组织中检测出的布鲁氏菌进行遗传进化分析，它们的同源性为98%，这说明存在野生动物通过吞食家畜胎盘等感染布鲁氏菌病以及携带布鲁氏菌的野生动物向家畜传播布鲁氏菌病的可能性。

　　关键词：流产；胎儿；布鲁氏菌；检测

　　0引言

　　布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属引起主要感染家畜的慢性人畜共患传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。布鲁氏菌病已遍布全球170个国家和地区，2013—2021年，我国西部地区的布病疫情呈现一定的蔓延势态[1]，这不仅阻碍了疫病流行地区的经济发展，还给人类健康带来严重威胁。在巴州地区野鼠组织中检测到布鲁氏菌后，为追溯病原来源，对牛羊流产胎儿组织进行胎儿弯曲杆菌、刚地弓形虫、胎儿三毛滴虫、胎儿毛滴虫、布鲁氏菌5种流产致病细菌（这些细菌均已被证实可导致家畜发生流产）的检测。通过对被感染野鼠进行检测可以分析野鼠感染布鲁氏菌的可能途径，进一步确定野鼠是否是通过接触感染牛羊或其流产胎儿而感染布鲁氏菌。此外，对牛羊流产胎儿组织的检测有助于了解该地区家畜布鲁氏菌病的流行情况，为制定有效的防控措施提供科学依据。

　　1材料与方法

　　1.1主要试剂

　　TIANamp Genomic DNA Kit试剂盒（离心柱型，目录号DP304），购自天根生化科技（北京）有限公司。

　　1.2主要仪器

　　组织破碎震荡仪TissueLyserⅡ,购自德国LEICA公司；智净生物安全柜HR1500-IIA2，购自青岛海尔集团；PCR仪T-GRADIENT、凝胶成像系统Image Lab Version 3.0，购自美国Bio-Rad公司；全自动核酸提取仪AU1001-96，购自北京百泰克生物技术公司。

　　1.3样本采集

　　1.3.1野鼠采集

　　2023年4—8月从新疆巴州地区获取野鼠20只，实行解剖后无菌采集，将心、肝、脾、肺、肾等脏器组织编号后加干冰密封运送至实验室，超低温冰箱保存。

　　1.3.2流产胎儿采集

　　2023年9—10月于巴州地区采集牛流产胎儿8份、羊流产胎儿16份，解剖采集肝、脾、肾及部分胃内内容物，编号后加冰袋运送至实验室冰箱冷冻保存。

　　1.4试验方法

　　1.4.1野鼠脏器和牛羊流产胎儿组织DNA的提取

　　用灼热的无菌剪刀对野鼠各个脏器组织剪取黄豆大小的样品，置于1.5 mL无RNase EP管中，用去RNA酶水反复冲洗3次，每管加入400μL的DMEM，用无菌剪（无RNase处理）剪碎使之呈细粒或浆状，12 000 r/min离心1 min得到沉淀，提取野鼠脏器DNA，以同样方法提取牛羊流产胎儿脏器DNA。

　　1.4.2野鼠脏器及牛羊流产胎儿组织中的病原检测

　　对野鼠脏器进行布鲁氏菌检测，同时对牛羊流产胎儿组织进行5种流产致病病原体（布鲁氏菌、胎儿弯曲杆菌、胎儿毛滴虫、胎儿三毛滴虫和刚地弓形虫）检测，根据参考文献[2-3]设计引物，引物序列见表1，PCR反应条件见表2。

　　2结果

　　2.1 PCR检测结果

　　用omp22 2对引物扩增布鲁氏菌基因，扩增出的产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后在253 bp出现目的条带，见图1。基于omp基因检测到野鼠脏器组织携带布鲁氏菌，总阳性率为10%（2/20）。

　　对24份牛羊流产胎儿进行了5种流产致病病原的PCR分子检测，检测到7份布鲁氏菌阳性（5份羊、2份牛），阳性率为29.17%（7/24）。用PCR对布鲁氏菌omp22基因进行扩增，扩增产物于凝胶成像仪中拍照显示扩增片段在253 bp出现目的条带，见图2，其余病原均为阴性。

　　2.2系统发育分析

　　omp22基因比对显示：野鼠脏器组织的布鲁氏菌（MK046923）与来自中国Brucella Melitensis Sheep China（MK913897）的同源性为98.00%（686/700）；牛羊流产胎儿组织的布鲁氏菌（KY312521）与来自中国Brucella Melitensis Sheep China（MK913897）的同源性为98.26%（679/691）。omp22基因遗传进化树显示：本试验检测到的来自野鼠脏器组织和牛羊流产胎儿组织的布鲁氏菌聚为一小支；来自野鼠肝、脾的布鲁氏菌与来自牛羊流产胎儿的布鲁氏菌都与来自中国西北部羊的羊种布鲁氏菌聚为一小支，与来自伊朗绵羊的羊种布鲁氏菌聚为姐妹支，见图3。

　　3讨论与结论

　　近年，布鲁氏菌病在我国的发病数逐年上升，已成为发病数上升最快的传染性疾病之一，其主要在我国东北、西北和华北地区传播。布鲁氏菌不仅可以通过家畜传播，还可以通过野生动物和人传播。世界上有60多种野生动物对布鲁氏菌产生血清学反应，30余种野生动物体内寄生各种布鲁氏菌，由此可知布鲁氏菌不仅会感染家畜和人，还会感染野生动物[4]。Lambert S等[5]法国科学家对321只野山羊泌尿生殖器和淋巴结样本进行了细菌培养，结果从30%野山羊样本中分离出羊种布鲁氏菌。另外，有学者提出小反刍动物羊种布鲁氏菌的疫源地分布在一些特定地区，而这些地区的野生反刍动物也会受到威胁[6]。

　　本次试验从新疆巴州地区野鼠脾脏以及牛羊流产胎儿内脏组织和胃内容物中均检测出羊种布鲁氏菌，由2005—2016年全国布鲁氏菌病监测数据分析可知，引起我国布病疫情的优势菌株是羊种布鲁氏菌，占比74%[7]。通过遗传进化分析可知，从野鼠脏器和牛羊流产胎儿组织检测到的布鲁氏菌同源性为98%。

　　新疆巴州地区在野鼠中检测到布鲁氏菌，且野鼠对动物的适应性较强，与人类和家畜的接触机会较多，应加强该地区啮齿类动物自然医源性疫病的防控，建立完善的野生动物疫病监测预警技术体系和制度。

参考文献

　　[1]朱燕，宋志龙，陈洁婷．2013—2021年我国西部地区布鲁氏菌病流行趋势及时空分布特征分析[J]．疾病监测，2024，39（11）：1 399-1 404.

　　[2]张辉，陈创夫，唐莉娟，等．布鲁氏菌病病原快速诊断方法建立及应用[J]．塔里木大学学报，2008（3）：40-43.

　　[3]张晓磊，张进顺，贾晓晖，等．刚地弓形虫ROP11基因的克隆及生物信息学分析[J]．中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2013，31（6）：447-449.

　　[4]谭学超，王勃森，郭抗抗，等．陆生野生动物布鲁氏菌病的流行与防控研究进展[J]．动物医学进展，2024，45（9）：100-104.

　　[5]Lambert S，Gilot-Fromont E，Freycon P，et al．High Shedding　Potential and Significant Individual Heterogeneity in Naturally-Infected Alpine ibex（Capra ibex）With Brucellamelitensis[J].Front Microbiol，2018，9：1 065.

　　[6]Lambert S，Thébault A，Anselme-martin S，et al．Brucellosis in Alpine ibex：10 Years of Research and Expert Assessments[J].Medecine Sciences：M/S，2023，39（10）：722-731.

　　[7]崔步云，姜海．2005—2016年全国布鲁氏菌病监测数据分析[J].疾病监测，2018，33（3）：188-192.