摘要：该试验旨在研究枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡血清卵泡刺激素（FSH）和促黄体生成素（LH）含量的影响。试验选取21日龄体重相近的健康科宝肉鸡120只，随机分为正常饲养组（CON组）、热应激组（HS组）、热应激+枯草芽孢杆菌组300 mg/kg（HS+BS组）3组，试验期21 d。结果显示，与CON组相比，HS组的血清FSH和LH的含量均显著降低（P＜0.05），而卵巢组织中热休克蛋白（HSP70）含量显著升高；与HS组相比，HS+BS组的血清FSH和LH的含量显著升高（P＜0.05），且卵巢组织中的HSP70含量显著低于CON组（P＜0.05），表明枯草芽孢杆菌能够有效提高热应激肉鸡的血清FSH和LH含量，并降低HSP70的表达水平，有助于缓解热应激诱导的肉鸡生殖激素分泌失调，提高热应激时肉鸡的繁殖性能。

　　关键词：枯草芽孢杆菌；热应激；卵泡刺激素；促黄体生成素

　　Effect of Bacillus subtilis on Serum Follicle Hormone and Luteinizing Hormone Levels in Heat-stressed Breeder Chickens

　　FENG Kangmei1，HUANG Hong2，ZHAO Yuqing1，DING Yuming1，MA Yingying1，CHEN Qi1，LIU Si'nan1，WANG Xifeng1，LIU Deyi1，XIONG Yongjie1*

　　（1.College of Animal Science，Anhui Science and Technology University，Fengyang Anhui 233100，China；2.Animal Husbandry and Veterinary Branch，Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences，Qiqihar Heilongjiang 161005，China）

　　Abstract：This study was conducted to investigate the effects of Bacillus subtilis on the content of serum follicle-stimulating hormone（FSH）and luteinizing hormone（LH）in broilers under heat stress．A total of 120 21-day-old healthy Kebao broilers with similar body weight were randomly divided into 3 groups：control group（CON group），heat stress group（HS group）and heat stress+Bacillussubtilis group 300 mg/kg（HS+BS group）．The experiment lasted for 21 days．The results showed as follows：Compared with CON group，the serum FSH and LH contents in HS group were significantly decreased（P＜0.05），while the heat shock protein（HSP70）content in ovarian tissue was significantly increased；Compared with HS group，the serum FSH and LH contents in HS+BS group were significantly higher than those in HS group（P＜0.05），and the HSP70 content in ovarian tissue was significantly lower than that in CON group（P＜0.05），indicating that Bacillus subtilis can effectively improve the serum FSH and LH contents of broilers under heat stress．And reducing the expression level of HSP70 is helpful to alleviate the dysregulation of reproductive hormone secretion induced by heat stress，and then improve the reproductive performance of broilers under heat stress.

　　Keywords：Bacillus subtilis，heat stress，follicle-stimulating hormone，luteinizing hormone

　　0引言

　　我国家禽养殖历史悠久，家禽养殖产业在国民经济发展中具有重要作用。我国还是一个农业大国，家禽养殖产业不仅是农业产业的重要组成部分，也是人民群众肉食品需求的重要来源之一。当前，随着养殖技术的快速发展，我国家禽养殖领域的养殖、管理与生产水平也不断提升，养殖效益不断提高。但是，随着规模化、集约化养殖模式的广泛推广、养殖密度的增加，以及受到夏季降温成本的制约，热应激已成为严重影响夏季家禽养殖经济效益的主要问题之一。

　　家禽发生热应激反应后，会引起食欲降低、采食量下降、饮水量增加、饲料转化率降低、脂肪沉积较多、体重降低[1]。热应激对产蛋鸡的影响主要表现为采食减少，产蛋率下降，蛋壳变薄，畸形蛋、无壳蛋增多，严重的会出现热喘息，甚至大批死亡。过高的环境温度引起动物体温升高后，会造成生殖系统组织器官局部温度升高，不仅对生殖器官的组织结构造成损伤，还会影响生殖器官正常的生理机能，且升高的体温能造成生殖道过热，使子宫的微环境不利于受精卵的发育和附植。此外，热应激还会导致卵巢对促性腺激素的敏感性降低，引起生殖激素内分泌系统功能失调。现有研究发现热应激可以明显降低第1次卵泡波中优势卵泡的卵泡液中雌激素的含量与浓度，并抑制卵泡生长[2]。因此，研发能够缓解畜禽热应激的新型药物制剂，对提高动物的繁殖性能、提升夏季家禽养殖业的经济效益具有重要的现实意义。

　　枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的有益菌，生长速度较快，容易存活，可分泌多种酶，不易产生耐药性，因此在农业养殖业中被广泛应用。在提高饲料报酬方面具有良好的效果[3]。此外，在畜禽生产中使用枯草芽孢杆菌作为抗生素的替代品，已经被证明具有较高的应用和推广价值，能够显著提高畜禽养殖的经济效益[4-5]。但是，目前关于枯草芽孢杆菌在热应激引起家禽生殖激素分泌失调方面的研究报道较少。因此，本研究模拟夏季热应激的家禽饲养环境，研究枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡血清卵泡刺激素和促黄体生成素含量的影响，以期为应用枯草芽孢杆菌防治热应激引起的畜禽生殖激素分泌失调提供理论依据。

　　1材料与方法

　　1.1主要试剂与仪器

　　主要试剂：血清卵泡刺激素和促黄体生成素酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒（湖北武汉纯度生物科技有限公司），枯草芽孢杆菌（有效含量为2.0×1010 CFU/g，北京科为博生物集团），其余所用试剂均为国产分析纯，由安徽科技学院动物医学实验室提供。

　　主要仪器：低温电冰箱（美的集团股份有限公司），离心机（Thermo公司），全波长酶标仪（Thermo公司）。

　　1.2试验动物与分组

　　试验选取1日龄体重相近的健康科宝肉鸡120只，随机分为3组，每组4个重复，每个重复10只鸡。3组分别为正常饲养组、热应激组、热应激+枯草芽孢杆菌组300 mg/kg。CON组温度控制在（23±1）℃,湿度约60%；HS组与HS+BS组温度控制在（33±1）℃,湿度约70%。预饲期为21 d（各组均饲喂基础饲粮），第22 d开始热应激（CON组、HS组饲喂基础饲粮，HS+BS组在饲粮中添加枯草芽孢杆菌制剂），CON组温度控制在（23±1）℃,湿度约60%；HS组与添加剂组温度控制在（33±1）℃,湿度约70%，热应激试验期21 d。

　　试验在安徽科技学院实验动物中心进行，饲养期间自由饮水、采食，每天清理水槽、料槽、鸡舍卫生，观察鸡群健康状况并做好每日记录。饲养期间按常规程序进行传染性法氏囊、新城疫免疫。基础日粮参考中国农业行业标准《鸡饲养标准》（NY/T 33―2004），其组成及营养水平见表1、表2。

　　1.3样品收集与指标检测

　　在热应激处理试验结束后，对各组鸡进行隔离和断食处理，12 h后翅下静脉采血，低温静置离心法分离收集血清，同时采集卵巢。随后将血清样品、卵巢组织放入-80℃超低温冰箱中储存备用。然后采用ELISA法按照试剂盒检测说明书的操作程序测定各组血清样品中的FSH和LH含量，以及卵巢组织中的HSP70含量。

　　1.4数据处理

　　结果以“平均值±标准差”表示，数据统计分析采用SPSS 17.0统计软件进行One-way ANOVA分析。P＜0.05时判定为结果有显著性差异。

　　2结果

　　2.1枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡血清卵泡刺激素含量的影响

　　由表3可知，与正常饲养组相比，热应激组的血清卵泡刺激素含量显著降低（P＜0.05）；但是与热应激组相比，热应激+枯草芽孢杆菌组血清中的卵泡刺激素含量显著升高（P＜0.05）。

　　2.2枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡血清促黄体生成素含量的影响

　　由表4可知，与正常饲养组相比，热应激组的血清促黄体生成素含量显著降低（P＜0.05）；但是与热应激组相比，热应激+枯草芽孢杆菌组血清中的促黄体生成素含量显著升高（P＜0.05）。

　　2.3枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡卵巢热休克蛋白70含量的影响

　　由表5可知，与正常饲养组相比，热应激组的热休克蛋白含量显著升高（P＜0.05）；但是与热应激组相比，热应激+枯草芽孢杆菌组血清中的热休克蛋白含量显著降低（P＜0.05）。

　　3讨论

　　卵巢作为雌性动物的重要生殖器官，不仅能够分泌生殖激素调节繁殖过程，也是垂体前叶分泌促性腺激素FSH和LH作用的靶器官[6]。母鸡卵巢的生殖生理功能能否正常发挥，直接决定着母鸡养殖的经济效益。卵巢正常生殖生理功能的发挥、卵泡的生长发育均受到促性腺激素的调控。家禽卵泡的生长和发育主要受到下丘脑—垂体—性腺生殖轴分泌的多种生殖激素共同调节。FSH和LH是调节家禽卵泡发育的主要促性腺生殖激素。其中，FSH作为一种糖蛋白，是由脑垂体合成并分泌的一种重要促性腺激素，在调节与雌性动物繁殖性能相关的一系列生理过程中发挥了重要作用。主要表现为FSH能够促进卵巢中的小等级卵泡进入生长发育阶段，最终发育为成熟卵泡并释放卵子完成排卵。同时，FSH可促进卵泡颗粒层细胞的增殖与分化，进而促进早期卵巢的生长发育[7]。现有研究表明，热应激能够干扰雌性动物体内与生殖调控相关激素的分泌与作用过程，进而降低其繁殖性能[8]。本试验研究结果显示，热应激显著降低了肉鸡血清中的FSH含量，表明热应激可能通过降低FSH的含量，影响卵巢卵泡的生长发育进而影响肉鸡的繁殖性能；而在饲喂添加枯草芽孢杆菌的日粮后，肉鸡血清中FSH含量明显高于热应激组，表明枯草芽孢杆菌可能通过提高热应激饲养条件下母鸡血液中的FSH含量进而促进卵泡的生长发育。

　　此外，FSH对卵巢生理功能的调节离不开LH的协同作用。LH作为垂体细胞分泌的另一种重要的促性腺激素，其主要与FSH协同促进卵巢卵泡的生长发育和成熟，尤其是在调节卵巢的雌激素分泌、促进成熟卵泡破裂完成排卵等一系列生殖过程中发挥了重要作用[9-10]。母鸡体内LH含量的高低直接影响着产蛋量。本试验结果显示，尽管热应激降低了肉鸡血清中的LH含量，但是在饲喂添加枯草芽孢杆菌的日粮后，肉鸡血清中LH含量显著增加，表明枯草芽孢杆菌可能通过增加热应激时母鸡血液中的LH含量而影响排卵过程，进而提高热应激饲养条件下母鸡的繁殖性能。

　　现有研究表明，高温造成的热应激不仅会干扰畜禽体内生殖激素的分泌和作用过程，还会严重影响机体内一系列生物活性分子、分子伴侣和细胞因子的代谢。HSP70作为动物机体组中广泛存在一种热应激标志性蛋白分子，当机体出现高温应激时，体内HSP70的合成量会急剧增加。HSP70在动物体内具有保守性和高表达性，与机体热应激的损伤程度密切相关[11]。本试验结果显示，日粮中添加枯草芽孢杆菌制剂，能够有效降低热应激饲养条件下母鸡卵巢组织中HSP70的表达水平，进一步表明枯草芽孢杆菌能够有效抑制母鸡卵巢热应激损伤的发生，有助于维持热应激饲养条件下卵巢的正常生理功能，提高其种用价值。

　　4结论

　　枯草芽孢杆菌能够显著提高热应激时母鸡血清中卵泡刺激素和促黄体生成素的含量，并降低热应激时卵巢组织中HSP70的含量，有助于缓解热应激对卵巢生殖激素分泌造成的不利影响和损伤。在日粮中添加一定剂量的枯草芽孢杆菌有助于缓解热应激对肉鸡繁殖性能造成的不利影响。

参考文献

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　　[4]王喜峰．枯草芽孢杆菌和乳酸菌对热应激肉鸡生产性能、肉品质、免疫器官和盲肠菌群的影响[D]．滁州：安徽科技学院，2020.

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