玫瑰精油对皮肤成纤维细胞生物学功能的影响论文

2024-04-29 10:56:48 来源: 作者:liyuan
摘要:文章旨在探究不同浓度玫瑰精油对 D-gal 诱导的皮肤成纤维细胞衰老的影响。设立空白对 照组、D-gal 组、D-gal+玫瑰精油组。用 β-gal 染色检测阳性细胞数目、EdU-594 染色检测细胞增殖 能力和划痕实验检测细胞迁移能力。β-gal 染色结果显示,D-gal+玫瑰精油组与对照组(D-gal 组)比 较,衰老染色阳性细胞数减少(p
摘 要:文章旨在探究不同浓度玫瑰精油对 D-gal 诱导的皮肤成纤维细胞衰老的影响。设立空白对 照组、D-gal 组、D-gal+玫瑰精油组。用 β-gal 染色检测阳性细胞数目、EdU-594 染色检测细胞增殖 能力和划痕实验检测细胞迁移能力。β-gal 染色结果显示,D-gal+玫瑰精油组与对照组(D-gal 组)比 较,衰老染色阳性细胞数减少(p<0.001);EdU-594 染色结果显示,与对照组相比,D-gal+玫瑰精油 组增殖细胞数增多(p <0.01);细胞迁移实验结果显示,D-gal+玫瑰精油组细胞迁移率增加(p< 0.001)。可见,玫瑰精油可以减少 D-gal 模型中细胞衰老数目,提高皮肤成纤维细胞的增殖能力,增 加皮肤成纤维细胞的迁移能力。
关键词:玫瑰精油;皮肤成纤维细胞;衰老;增殖;迁移
皮肤是人的身体器官中最大的器官,具有重要 的屏障保护作用[1] 。受到内外源性等多重因素的影 响,皮肤衰老不可避免,包括角质层变薄、活性氧增 高、细胞增殖和分化减少等。降低氧自由基产生、提 高皮肤成纤维细胞的抗氧化能力成为延缓皮肤衰老 的当选之策。玫瑰在抗氧化方面的活性被多次报道。 玫瑰精油作用诸多,包括抗菌作用[2-3]、抑制氧自由 基活性、调控皮肤内环境,常被应用于化妆品、食品 与医药等领域[4-5]。本文研究玫瑰精油对 D-gal 诱导 的小鼠皮肤成纤维细胞衰老、增殖及迁移的影响,检 测皮肤成纤维细胞衰老、增殖及迁移相关指标的变 化。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
细胞来源: 小鼠皮肤成纤维细胞取自 5~7 d Balb/c 乳鼠背部皮肤,原代分离培养后获得,Balb/c 乳鼠购自广西医科大学实验动物中心。
1.2 主要工作液的制备
D-gal 溶液:配制 20 g/L 升的 D-gal 溶液。
玫瑰精油:用 DMSO 将玫瑰精油稀释成三个浓 度。
玫瑰精油浓度 ①:10 μL 原浓度精油加 90 μLDMSO 稀释成精油浓度①。
玫瑰精油浓度 ② :10 μL 精油浓度 ① 加 90 μLDMSO 稀释成浓度②。
玫瑰精油浓度 ③ :10 μL 精油浓度 ② 加 90 μLDMSO 稀释成浓度③。
1.3 实验方法
1.3.1 原代小鼠皮肤成纤维细胞分离及培养
灭菌眼科剪分离鼠背部皮肤,剪碎用 I 型胶原 酶消化,离心洗脱组织团块,细胞筛过滤,放置 4 mL 培养瓶培养。
1.3.2 细胞传代
密度达 80%,PBS 清洗,胰酶消化 3 min,完全 培停止消化,离心重悬后移入培养瓶孵箱中培养。
1.3.3 β-gal 苷酶染色
PBS 清洗加固定液。染色工作液:X-Gal50 微、 染色液 A 10 μL、B 10 μL、C 930 μL,膜封孔板防蒸 发,37 ℃过夜。显微镜下记录。
1.3.4 EdU-594 细胞增殖染色
加稀释的 2XEdU 染色工作液(20 uM )孵育 2 h。EdU 染液标记后加固定液,洗涤液清洗。通透 15 min。洗涤液清洗 。0.5 mLClick 工作液:430 μLClick Reaction Buffer、20 μLCuSO4、1 μLAzide 594、 Click Additive Solution 50 μL 避光 30 min,洗涤后 加 1 mL 1X Hoechst 33342 避光 10 min。洗涤后,荧 光显微镜下观察记录。
1.3.5 细胞划痕
细胞达 80%,用 200 μL 枪头垂直划线。PBS 洗 漂浮细胞后无血清培养。拍照记录 0 h、24 h 细胞状 态。
1.3.6 统计学分析
实验结果用 GraphPad8.0 统计分析制图。p<0.05 表示差异具有统计学意义(* 代表p<0.05,** 代表 p<0.01),ns 表示差异无统计学意义。
2 实验结果
2.1 玫瑰精油对皮肤成纤维细胞衰老的影响
结果显示,与对照组(D-gal 组)比较,加入玫瑰 精油的各组衰老染色的阳性细胞数显著减少(p <0.001,如图 1 所示)。
2.2 玫瑰精油对皮肤成纤维细胞增殖的影响
结果显示,与对照组相比,加入不同浓度的玫瑰 精油各组增殖的细胞数显著增多(p<0.01,如图 2 所 示)。
2.3 玫瑰精油对皮肤成纤维细胞迁移的影响
结果显示,与对照组相比,加入不同浓度的玫瑰 精油各组细胞迁移的面积显著增多(p<0.001,如图 3 所示)。
3 讨论
人们在深入认识皮肤衰老后发现,皮肤可以保 护机体内组织和器官免受环境中物理、化学和生物 因素的侵袭;能防止组织内营养成分、水分和电解质 等物质的流失。受多重因素影响,皮肤衰老不可避 免。减少自由基的产生、清除老化代谢产物和提高抗 氧化酶活性已成为目前延缓皮肤衰老的有效方法。有很多研究证实玫瑰具有抗衰老和抗氧化能力。
有研究表明,自然衰老皮肤角质形成细胞增殖减少[6] 。有研究证实,D-gal 致衰老与自然衰老的一 致性较高,D-gal 衰老细胞模型被广泛应用于评价 天然活性物质的抗衰老作用。
在 D-gal 衰老模型中加入不同浓度的玫瑰精 油,D-gal+玫瑰精油组衰老染色的阳性细胞数显著 减少,玫瑰精油增强细胞的抗氧化能力,从而对细胞 衰老有修复作用。EdU-594 细胞增殖染色实验中, D-gal+玫瑰精油组细胞增殖数明显高于衰老模型 组,说明玫瑰精油可以增强细胞的增殖能力。迁移 实验中,D-gal+玫瑰精油组的细胞 24 h 迁移率明显 高于衰老模型组,表明玫瑰精油可以增强细胞的迁 移能力。
综上所述,玫瑰精油具有延缓皮肤成纤维细胞 衰老、促进细胞增殖和迁移的作用。玫瑰精油的其 他功效还有待进一步探究。
参 考 文 献
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[4] 周显飞, 田舍, 王杰, 等. microRNA-29c 对人胰腺癌细 胞侵袭转移的抑制作用及机制[J]. 贵州医科大学学报, 2016, 41(9): 997-1001.
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