摘要：对方法《土壤和沉积物挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》（HJ 998—2018）在6家实验室进行多实验室间方法关键要素验证研究，各实验室依照《环境监测分析方法标准制订技术导则》（HJ 168—2020）中的要求，验证检出限、测定下限、曲线回归系数、正确度及精密度等数据。对所有数据进行统计分析，推导出实验室间相对标准偏差、重复性限、再现性限、加标回收率最终值等数据。实验室间比对结果表明：该方法在相对标准偏差、重复性限、再现性限、加标回收率最终值等数据等方面均符合试验分析指标要求，方法适用性强，应用范围广，适合推广和应用，能够满足土壤样品中挥发酚的日常环境监测和分析。

　　关键词：4-氨基安替比林分光光度法；土壤；挥发酚；多实验室验证

　　0引言

　　挥发酚是指沸点在230℃以下，能与水蒸气一起蒸出的酚类化合物，主要包括苯酚、甲酚、二甲酚和氯基酚等单元酚[1]。挥发酚属于原生质毒，能够凝固蛋白质，具有较好的除菌性能，可对一切生命体产生毒害作用[2]。过量的挥发酚摄入，可对人体产生严重的毒害作用[3-4]。为了对土壤中的挥发酚加强监督监测，保障生产生活安全，2019年生态环境部颁布了《土壤和沉积物挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》（HJ 998—2018），对土壤样品中挥发酚测定的方法进行了标准化[5]。该方法使用碱液对土壤样品进行超声或振荡处理，将土壤样品中的挥发酚提取至碱液中，提取液经酸化后用4-氨基安替比林分光光度法进行检测。本文将对不同实验室采用该方法测定土壤中挥发酚的实验过程以及相应的测定结果进行验证，识别方法关键性因素（如相对标准偏差、重复性限、再现性限、加标回收率最终值等数据）在不同实验室间的差异，确定方法的可行性和有效性。

　　1实验部分

　　1.1仪器设备及分析条件

　　将该方法在6家实验室进行验证，所有实验室均各自使用符合要求的仪器设备，各实验室所使用的仪器设备型号和出厂编号如下：

　　1号实验室：T6新悦可见分光光度计（05-1610-01-0312）；超声波仪SK00LH（304393）。

　　2号实验室：T6新悦可见分光光度计（20-1610-01-0246）；水平振荡器HY55（6066）。

　　3号实验室：分光光度计L3S（071713110010）；超声波仪CSF-1A（8700104）；水平振荡器SHA-BA（0005009）。

　　4号实验室：分光光度计722sp（14067）；超声波仪KQ-500DA（2016809583）。

　　5号实验室：分光光度计TU-1901（19-1901-01-0248）；水平振荡器ZP-400（201206072）。

　　6号实验室：分光光度计UV-8000A（2014070411）；超声波清洗仪SB25-1207（08-601）。

　　1.2主要试剂与材料

　　方法实验用水均为无酚水或等效纯水，除特意提及外所用试剂均为分析纯。各实验室所使用的关键试剂情况如下：

　　1号实验室：4-氨基安替比林，优级纯，天津市津科精细化工研究所；铁氰化钾，优级纯，国药集团化学试剂有限公司。

　　2号实验室：4-氨基安替比林，25 g，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；铁氰化钾，500 g，分析纯，大茂化学试剂有限公司。

　　3号实验室：4-氨基安替比林，100 g，分析纯，丰泰（天津）精细化学有限公司；铁氰化钾，500 g，分析纯，西陇化工股份有限公司。

　　4号实验室：4-氨基安替比林，25 g，分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；铁氰化钾，500 g，分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

　　5号实验室：4-氨基安替比林，SIGMA-ALDRICH；铁氰化钾，SIGMA-ALDRICH。

　　6号实验室：4-氨基安替比林，25 g，优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；铁氰化钾，500 g，分析纯，广州化学试剂厂。

　　1.3精密度

　　各实验室对挥发酚质量分数为3.0、37.5、250 mg/kg的空白加标土壤样品进行6次重复测定，其中空白土壤取自当地未受污染的土壤样品，在验证实验室进行现场加标；统一提供的某钢厂内含酚废水池旁土壤实际样品在各验证实验室进行6次重复测定，计算平均值、标准偏差及相对标准偏差。对各实验室关键性因素的验证数据进行统计汇总分析，计算实验室间相对标准偏差、重复性限r和再现性限R。

　　1.4准确度

　　各实验室对空白土壤进行加标测定，加标量分别为3.0、37.5、250 mg/kg，其中空白土壤取自当地未受污染的土壤，在验证实验室进行现场加标；统一提供的某钢厂内含酚废水池旁土壤实际样品在各验证实验室进行加标。根据实际样品测定值确定各验证实验室加标量，计算平均值、相对误差。对各实验室的验证数据进行汇总统计分析，计算加标回收率。

　　2结果与讨论

　　2.1校准曲线

　　各实验室分别使用各自的挥发酚标准溶液，用水稀释至质量浓度为10.0 mg/L的挥发酚使用液，分别移取适量该使用液于水中，配制成挥发酚含量（以苯酚计）为0、5.00、20.0、50.0、100、250μg的标准曲线系列溶液，建立标准曲线。对6家实验室的校准曲线进行汇总，各实验室工作曲线相关系数分别为0.999 4、0.999 9、0.999 8、0.999 8、0.999 9和0.999 8。

　　2.2检出限

　　各实验室对挥发酚质量分数为1.0 mg/kg的空白石英砂加标样品，按照样品分析的全部步骤平行测定7次后计算检出限。检出限计算方法参照《环境监测分析方法标准制订技术导则》（HJ 168—2020）[6]。各实验室检出限、测定下限数据汇总见表1。

　　从表1中可看出：各实验室检出限范围0.24~0.30 mg/kg，测定下限范围0.96～1.20 mg/kg。检出限和测定下限各实验室间差异不大，可得出不同仪器设备及不同试剂品牌对方法检出限及测定下限的影响较小。各实验室检出限均符合方法要求的检出限。

　　2.3精密度

　　各实验室挥发酚空白土壤加标样品、实际样品精密度数据统计见表2。

　　从表2中得出：实际样品及高、中、低浓度空白加标样品的实验室内相对标准偏差分别为2.6%~5.5%、1.3%～2.1%、2.2%～3.4%、2.9%～4.8%，实验室间相对标准偏差分别为5.7%、3.9%、4.7%、5.3%；重复性限分别为3.3、11、2.6、0.3 mg/kg；再现性限分别为5.4、27、5.0、0.5 mg/kg，测定结果均符合《土壤环境监测技术规范》（HJ/T 166—2004）[7]中规定的土壤监测的质控要求，RSD均小于20%。综合以上数据分析，无论实验室内或实验室间，随着样品浓度的增大，测定结果的相对标准偏差均会呈现减小趋势，表明低浓度样品在测定时不确定性较大。而对于实际样品来说，由于土壤样品性质千差万别，存在不同的基体干扰，这可能造成了实际样品的精密度数据与相应浓度的空白加标数据相比明显偏大。

　　2.4准确度

　　各实验室挥发酚空白土壤加标样品、实际样品准确度数据统计见表3。

　　从表3中得出：低、中、高浓度空白加标样品的加标回收率范围分别为83.7%~91.7%、84.7%~93.4%和88.9%~95.2%，加标回收率最终值分别为86.5%(±6.2%）、89.9%(±6.2%）、91.5%(±5.4%）。实际样品加标两个浓度的样品加标回收率分别为82.0%~90.1%和84.0%～92.0%，加标回收率最终值分别为86.9%(±6.4%）和89.1%(±6.2%）。测定结果均符合HJ 998—2018中规定的土壤监测的质控要求，加标回收率在80%~110%之间。从这些数据看，空白加标样品及实际样品的加标回收率数据均会随着加标量的增大而趋向于接近100%。

　　3结论

　　在6个实验室对方法《土壤和沉积物挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法》（HJ 998—2018）进行方法验证后，得出以下结论：

　　1）各实验室校准曲线相关系数范围在0.999 4~0.999 9，各实验室均符合标准方法中标准曲线相关系数应大于等于0.999的要求。

　　2）各实验室检出限范围0.24～0.30 mg/kg，与方法中检出限比较，各实验室均符合要求。各实验室间不同仪器设备试剂对检出限测试的影响不大，说明本标准适用性强，应用广泛。

　　3）精密度验证选取高中低浓度的空白加标样品及实际样品进行测试，根据验证结果来看，实际样品的样品性质及基底干扰对实验的精密度测定有一定影响，但各实验室测试结果仍能够满足与标准方法的要求。

　　4）准确度验证也采用高中低浓度的空白加标样品及实际样品进行测试。从结果来看，空白加标样品及实际样品的加标回收率和加标回收率最终值数据均会随着加标量的增大而趋向于接近100%。各实验室测试结果均符合标准方法要求。

参考文献

　　[1]国家环境保护总局，水和废水监测分析方法编委会.水和废水监测分析方法[M].（第四版）（增补版）.北京：中国环境科学出版社，2002.

　　[2]叶辉.连续流动分析法对水中微量挥发酚的测定研究[D].杭州：浙江大学，2012.

　　[3]赵晗，艾仕云，丁葵英，等.酚类污染物的危害及其检测技术研究进展[J].检验检疫学刊，2015，25（6）：66-68.

　　[4]杨淑贞，韩晓冬，陈伟.五氯酚对生物体的毒性研究进展[J].环境与健康杂志，2005，22（5）：396-398.

　　[5]生态环境部.土壤和沉积物挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法：HJ 998—2018[S].北京“中国环境出版社，2018.

　　[6]生态环境部.环境监测分析方法标准制订技术导则：HJ 168—2020[S].北京：中国环境出版社，2020.

　　[7]国家环境保护总局.土壤环境监测技术规范：HJ 166—2004[S].北京：中国环境科学出版社，2004.