摘要：为评估杭白菊提取物对两种常见病原菌——金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）ATCC6538和大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）CICCB0032的抑制作用，文章选取浙江桐乡杭白菊制备菊花提取液，并将其与标准培养基进行对比，观察其抑菌效果。研究发现，杭白菊提取物表现出了优异的抑菌性能，其对金黄色葡萄球菌的抑制作用尤为突出，为杭白菊提取物的应用提供了科学的依据。

　　关键词：杭白菊；金黄葡萄球菌；大肠埃希菌；抑菌

　　抗菌药物可有效降低许多细菌感染的发生概率，但抗菌药物的滥用也导致耐药菌株出现。近年来，天然植物提取物凭借较低的毒副作用和多样的生物活性，成为抗菌药物研发的重要替代选择。杭白菊为菊科（Compositae）植物菊（Chrysanthemum morifolium）的干燥头状花序，与亳菊、滁菊、贡菊并称中国四大名菊，其主产地在浙江桐乡。杭白菊作为“浙八味”之一，也是国家卫生健康委员会批准的药食同源原料。杭白菊是一种清凉药，性微寒，味苦，具有散风清热、明目平肝的功效。现代药理学研究也表明，杭白菊具有抗菌、抗氧化、抗癌、降血压、降血脂、降血糖等多种药理活性[1]。此外，近年来的研究发现，杭白菊提取物中富含生物活性成分，如黄酮类化合物、挥发油等，这些成分已被证实具有抗菌、抗氧化等多重生物活性。其中，挥发油是杭白菊发挥抗菌作用的重要物质基础，也是事关菊花品质的重要组分[2]。刘春丽[3]对不同产地菊花的主要化学成分进行研究，发现杭白菊所含的绿原酸、总黄酮和挥发油最多，且其具有的特征性香气是由挥发性成分相互作用产生的。

　　本研究旨在评估杭白菊提取物对两种常见病原菌——金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）ATCC6538和大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）CICCB0032的抑制作用。对杭白菊提取物的抗菌效果进行系统性评价，以期验证其在抑制这两种细菌生长方面的有效性，并展望其应用前景。实验选用优质杭白菊提取制备得到的菊花提取液，并将其与标准培养基进行对比，观察其对S.aureus和E.coli的抑制效果。通过细菌计数和光密度（OD600）测定，详细评估提取物的抗菌性能。研究结果将为杭白菊提取物的应用提供科学依据，并为开发新的天然抗菌剂提供新的研究方向。

　　1材料与方法

　　1.1仪器与设备

　　SW-CJ-1FD洁净工作台，苏州安泰空气技术有限公司；DHG型电热恒温培养箱，绍兴市上虞区沪越仪器设备厂；101A电热恒温干燥箱，北京科伟永兴仪器有限公司；MDF-382医用低温箱，松下冷链有限公司；12001电子天平，杭州友恒称重设备有限公司；WGZ便携式浊度仪，上海鼎科科学仪器有限公司；CJJ78-1磁力加热搅拌器，金坛区白塔新宝仪器厂；TGL-16型台式高速离心机，江苏科析仪器有限公司；JJ-1（A）型系列精密电动搅拌器，金坛区白塔新宝仪器厂；SW-TFG-13实验室通风橱，广州瑞智净化设备有限公司；紫外可见分光光度计Evolution 350，赛默飞世尔科技；HZ-82A气浴恒温振荡器，常州鸿泽实验科技有限公司；CX23LEDRFS1C生物显微镜，奥林巴斯有限公司；HH-6恒温搅拌水浴锅，南北仪器有限公司；TSB胰酪大豆胨液体培养基，环凯生物；绿原酸标准品，北京万佳。

　　1.2菊花提取液的制备以及供试菌

　　仔细挑选优质杭白菊，将其置于阴凉通风的环境中进行干燥处理，避免阳光直射导致活性成分流失。称量50 g干燥杭白菊，将其研磨成细粉末倒入500 mL的70%乙醇溶液中，使菊花粉末与乙醇溶液充分混合，在室温下静置24 h，其间每隔2~3 h轻轻搅拌一次，以促进有效成分溶出。用滤纸和漏斗过滤混合液，弃去固体残渣，收集滤液。将过滤后的提取液转移到宽口瓶中，热水浴（50~60℃),以加速乙醇挥发。将浓缩提取液转移到棕色玻璃瓶中，并储存在4℃的冰箱中，避免光照，以保持活性成分，作为储备液体待用。

　　供试菌株的金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）ATCC6538和大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）CICCB0032均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。本实验所用供试菌株为实验室培养第3代菌液。

　　1.3实验方法

　　准备S.aureus和E.coli的接种液，其初始浓度为107 CFU/mL。取0.1 mL菌悬液接种液加入10 mL无菌0.9%氯化钠溶液中，得到初始浓度为105 CFU/mL的接种液。然后，取0.1 mL这一接种液添加到10 mL无菌0.9%氯化钠溶液培养基中，再次稀释，得到质量浓度为103 CFU/mL的接种液。最后，取1 mL这一接种液加到9 mL待测液体中，得到最终浓度为102 CFU/mL的接种液。待测液体分别为TSB液体培养基、1/10 TSB液体培养基和0.5%菊花提取物+1/10 TSB液体培养基。将处理后的样品被放置在37℃培养箱中进行培养。实验的观察时间点为接种后的第0天和第5天。在该时间点，按照不同比例的稀释倍数取样品进行菌落计数，将稀释后的样品接种到培养皿中，孵育后进行菌落计数（n=5），结果用CFU/mL表示，并在第0天和第5天记录下样品情况。

　　测定菊花提取物中可能包含抑菌成分的挥发油和绿原酸。挥发油的检测方法：在蒸馏装置中加入适量水并连接冷凝器和收集器，将100 mL提取液倒入蒸馏瓶中，加热使水蒸气通过样品带出挥发油，并在冷凝器中冷凝收集。在通风橱中将收集到的水相和油相放入分液漏斗中，加入乙醚萃取，从上层取出有机相后利用无水硫酸钠进行干燥处理，最后利用旋转蒸发仪浓缩得到挥发油并对其进行质量测定。绿原酸的检测方法：分别量取绿原酸标准品0.50、0.74、1.00、1.25、1.50、2.00、2.50、3.00 mL，分别用50%乙醇定容至10 mL，然后在波长327 nm处测定其吸光度，以标准品质量浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线。将菊花提取物用乙醇定容到1 000 mL，根据曲线计算绿原酸含量。

　　2结果与讨论

　　由表1可知，供试菌株E.coli实验结果（单位为CFU/10 mL）：在初始阶段（第0天），所有菌落数为103 CFU/10 mL，证明接种量符合接种要求。在第5天时，1/10 TSB和TSB培养基组的菌落数增多至105 CFU/10 mL，菊花提取物组的菌落数则减少至102 CFU/10 mL，表现出了较为明显的降低效果。

　　供试菌株S.aureus实验结果（单位为CFU/10 mL）：在初始阶段（第0天），所有菌落数为103 CFU/10 mL，证明接种量符合接种要求。在第5天时，1/10 TSB和TSB培养基组的菌落数增多至105 CFU/10 mL和104 CFU/10 mL，然而菊花提取物组的菌落数减少至0，而5枚对照平板均检测出了菌落，降低效果显著。OD600检测结果方面，第5天菊花提取物组的OD600值仅为0.03。这些结果表明，菊花提取物显著降低了菌体的吸光度，具有显著的抑菌效果。

　　菊花提取物中的挥发油含量为0.62%，得到绿原酸的曲线方程为y=53.65x+0.06，R2>0.8，计算得到绿原酸含量为2.74%。

　　3结论

　　杭白菊提取物在本实验中表现出了优异的抑菌性能，其对S.aureus的抑制效果尤为突出。实验数据表明，5 d后，菊花提取物组的S.aureus完全被抑制，未检测到任何菌落。这表明菊花提取物具有极强的抑菌能力，能够有效抑制细菌生长和繁殖。对于E.coli而言，虽然1/10 TSB和TSB培养基组的菌落数量显著增加，表明这些培养基为菌落提供了适宜的生长条件，但菊花提取物组的菌落数量显著减少，说明菊花提取物有效抑制了E.coli的繁殖。由此表明，杭白菊提取物具有广谱抗菌效果，可以针对多种细菌发挥作用。

　　杭白菊提取物的抗菌机制可能与其所包含的生物活性成分有关。杭白菊中富含黄酮类化合物、挥发油和其他次生代谢物，这些成分具有抗菌、抗氧化等多种生物活性。例如，黄酮类化合物被认为能干扰细菌的细胞膜功能，破坏其完整性，从而导致细菌死亡。此外，挥发油中的某些成分可能会抑制细菌的代谢过程，进一步增强杭白菊提取物的抗菌效果。可见，杭白菊提取物在食品保鲜、医药卫生和个人护理产品等领域具有巨大的应用潜力和应用价值。然而，本实验还存在一定的不足之处，即并未检验挥发油和绿原酸对S.aureus和E.coli的抑制效果，未来还应研究菊花提取物对S.aureus和E.coli的MIC最低抑菌浓度。

　参考文献

　　［1］钟爱娇,姜哲,李雪征,等.杭白菊化学成分和药理活性的研究进展［J］.现代药物与临床,2014,29(7):824-830.

　　［2］姜宁华,陈素红.杭白菊研究进展［J］.浙江中医药大学学报,2007(2):253-254.

　　［3］刘春丽.杭白菊和茶叶香气化学研究［D］.杭州:浙江大学,2013.