摘要：鸡枞菌（Termitomyces spp.），别名荔枝菌、伞把菇、鸡肉丝菇、鸡肉菌，在南方通常被称作“荔枝菌”，是一种名贵的野生食用菌，营养丰富、味道鲜美。贵州地区的野生鸡枞资源丰富，多样性极高，民间素有采食和销售野生鸡枞菌的传统习惯。在此背景下，文章采集贵州省内各地的鸡枞菌样本36份，提取其DNA进行测序鉴定，并利用MEGA7.0软件建树得到子实体样本种类，以期为研究鸡枞菌的驯化奠定基础。

　　关键词：鸡枞菌；分离物；鉴定

　　鸡枞菌（Termitomyces spp.），别名荔枝菌、伞把菇、鸡肉丝菇、鸡肉菌，在南方被称作“荔枝菌”，是一种名贵的野生食用菌，营养丰富、味道鲜美。鸡枞菌隶属于担子菌类、伞菌目（Agaricaies）、白蘑科（Trichoiomataceae）、白蚁菌属（Termitomyces）。鸡枞菌子实体形成依赖的“菌圃”即为蚁巢。蚁巢是在白蚁反复参与下，其排泄物与鸡枞菌的孢子、菌丝，以及相关环境微生物相互作用、协同发育而成的。在条件成熟的情况下会形成菌索，进而形成鸡枞子实体[1-2]。由此可知，鸡枞菌与白蚁、蚁巢及其中的微生物形成了一种复杂的共生关系，意味着白蚁、蚁巢共生的微生物对鸡枞菌的生长具有至关重要的作用。

　　本文将采集贵州不同气候区的野生鸡枞菌种质资源，收集鸡枞菌子实体样本、白蚁样本、白蚁巢样本、土壤样本，调查记录野生鸡枞菌的生长环境，并鉴定子实体种类，以期为进一步研究鸡枞菌的驯化奠定基础。

　　1材料与方法

　　1.1样本来源

　　从贵州省内各地采集到子实体样本36株。其中，黔西南州24株；黔南州2株；贵阳市2株；遵义市2株；安顺1株；六盘水市3株；铜仁市1株；毕节地区1株。具体如表1所示。

　　1.2测序鉴定及系统发育树构建

　　取鸡枞菌样本20 g左右，按照DNA提取试剂盒（百迈客生物科技有限公司）所示方法提取基因组DNA。以ITS1/ITS4为正反向引物进行PCR扩增反应，并将测得的序列提交至NCBI的GenBank（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi），以检索相似序列。用MEGA 7.0软件中的Alignment程序对检索到的相似序列和标本序列实施多重对位排比，同时采用Analysis程序Kimura 2-parameter模式计算遗传距离，Bootstrap循环1 000次，并采用最大似然法构建系统发育树。

　　发育树的构建过程如下。

　　1.2.1序列的比对

　　在浏览器中打开NCBI数据库—点击BLAST—选择mnucleoticle blast—将单个序列粘贴到空白框中—点击下方的Blast—在得到的列表中选择靠前匹配度高的序列10个—点击Download—点击FASTA（complete sequeue）ℴ—点击cotinue—保存text格式后加上测得的未知序列，保存为FASTA格式。

　　1.2.2用MEGA7.0软件建树

　　下载MEGA7.0软件并打开—点击Align菜单—点击Edi/Build Alignment选项—选择Create a new alignment—点击OK—选择DNA—点击工具栏上的Edit—选择Insert Sequences Form File—选择前述保存为FASTA格式的文件—点击工具栏上面的W—再点击Align DNA—选择OK—切掉前后不匹配的序列—点击Data—选择Phylogenetic Analysis—选择NO—再点击Phylogeny—选择Construct/Test Neighbor-Joining Tree—点击Yes—Bootstrap method—Kimura 2 parameter method—点击Computer—发育树建成。

　　2结果与分析

　　2.1测序比对结果

　　通过NCBI的GenBank数据库，对36份标本的序列进行BLAST检索，获得了与供试样品具有较高相似性的序列。具体鉴定结果和登录号如表2所示。

　　2.2构建系统发育树

　　在BLAST软件比对所得结果中选择靠前分值高的序列10个，根据MEGA 7.0软件，用Neighbor-Joining法构建发育树。得出结果：ZST01，ZST02，ZST03，ZST04，ZST05，ZST06，ZST07，ZST08，ZST09，ZST10，ZST11，ZST20，ZST21，ZST22，ZST25，ZST35是云南省鸡枞菌（Termitomyces sp.）；ZST12，ZST13，ZST14，ZST15，ZST16，ZST17，ZST18，ZST19，ZST24，ZST26，ZST27，ZST28，ZST29，ZST30，ZST31，ZST32，ZST33，ZST34，ZST36是间型鸡枞菌（Termitomyces intermedius）；ZST23是白蚁菌（Termitomycespoonensis）。

　　3总结与建议

　　采用分子测序的方法对鸡枞菌样本进行鉴定，结果可靠，方法简便。同时，该方法也可用于其他真菌的鉴定和推广使用，为进一步研究鸡枞菌的驯化奠定坚实的基础。然而，本文仍存在不足之处，主要表现为仅对贵州部分地区采集到的鸡枞菌样本进行鉴定，范围不够广泛，且部分样本鉴定失败，并不能全面代表贵州地区的鸡枞菌种类。后续还需扩大样本采集范围，在分子鉴定时采用多种基因标记技术作为辅助手段，以得到更准确的鉴定结果。

　　［1］毕志树.鸡枞菌的基本特征［J］.中国食用菌,1986(3):24.［2］赖井平.鸡枞菌的驯化与高产栽培［J］.中国食用菌,1993(3):24-26.