摘要：建立高效液相色谱（HPLC）法检测EGCG含量的方法。采用ZORBAX Extend-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱，以甲醇（A相）-0.05%三氟乙酸水溶液（B相）为流动相进行梯度洗脱，洗脱时间35 min，柱温35℃,流速1.0 mL/min，进样量10μL，检测波长280 nm。在此条件下，EGCG的线性范围为10~1 000 mg/L，R2=0.999 6，精密度（n=6）RSD为1.25%，重复性（n=6）RSD为0.84%，稳定性RSD为0.61%。EGCG平均加样回收率为92.27%，RSD为1.18%。该方法有利于化妆品不同剂型及原料中EGCG的质量控制。对添加有EGCG原料的不同剂型化妆品进行稳定性考察，结果发现EGCG直接以纯品添加，稳定性要优于EGCG磷脂复合物，但随着时间推移，EGCG含量下降较大；另外，温度对EGCG含量影响很大，低温放置更有利于含量稳定。为保证化妆品产品的功效，EGCG作为原料，更要做到足量添加。

　　关键词：茶多酚；EGCG；高效液相色谱法；化妆品；稳定性研究

　　0引言

　　“茶之为饮，发乎神农氏”。茶叶源自中国，深受世人喜爱，已逐渐发展为当今世界三大无酒精饮料之首。从营养成分等各方面上说绿茶都为最多。绿茶属于不发酵茶，富含茶多酚、生物碱、氨基酸、维生素等营养成分。绿茶中茶多酚含量较高。茶多酚是多羟基酚类化合物的总称，又名茶单宁、茶鞣质，约占茶叶干重的20%~35%。有大量研究表明茶多酚具有很强的抗氧化能力，一直作为天然的食品抗氧化添加剂。茶多酚主要包括儿茶素类、花青素类、酚酸类及黄酮类四种化合物类型，其中含量最高的成分为儿茶素类，约占茶多酚总量的70%左右，主要有儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、没食子儿茶素（GC）、表没食子儿茶素（EGC）、儿茶素没食子酸酯（CG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）、没食子儿茶素没食子酸酯（GCG）及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）等8种。EGCG不仅是绿茶提取物中生物活性最强的儿茶素类化合物，而且也是含量最高的，约占儿茶素的50%~60%，具有延缓光老化、抗氧化、美白、收敛和保湿多重功效，这使得无论是绿茶提取物还是EGCG单体都能成为最常使用的化妆品添加剂。市场上有很多以茶为概念的产品，如绿茶面膜、绿茶面霜、绿茶洁颜乳等。目前，由于EGCG在应用时存在稳定性差和生物利用度不好的问题，在化妆品领域存在概念性添加的问题。但是，一般只是定性认为EGCG稳定性不佳，EGCG在产品配方中的稳定性具体如何，是否会发生降解，最后使用时是否还可以发挥活性功效，很多时候都不得而知。鉴于此，本文参考文献，选定合适的流动相和提取方法测定EGCG含量，通过对市售原料在化妆品骨架配方（爽肤水/乳/霜）中的稳定性研究，明确EGCG等成分作为功效成分在化妆品产品应用的可行性和实际情况。

　　1实验部分

　　1.1主要试剂与仪器

　　甲醇，色谱纯，上海泰坦科技股份有限公司；水为蒸馏水，屈臣氏；EGCG（98%），江苏天晟药业股份有限公司；三氟乙酸，色谱纯，上海麦克林生化科技有限公司；绿茶磷脂复合物，indena。

　　岛津LC-2030C高效液相色谱仪，配PDA检测器，日本岛津；MA204E型电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；MS 3（数显型）旋涡混匀器，德国IKA公司；KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；0.45μm针头式微孔滤膜过滤器，上海泰坦科技股份有限公司。

　　1.2实验方法

　　1.2.1色谱条件

　　色谱柱为ZORBAXExtend-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇（A相）-0.05%三氟乙酸水溶液（B相）；梯度洗脱程序：0~10 min，10%A~20%A；10~30 min，20%A~35%A；30~35 min，10%A；洗脱时间35 min；柱温35℃;流速1.0 mL/min；进样量10μL；检测波长280 nm。

　　1.2.2对照品溶液配制

　　称取EGCG（98%）0.02 g左右（精确到0.000 1 g）到20 mL棕色容量瓶，用甲醇（色谱级）溶解并定容，混合完成后，即为1 000 mg/L的标准储备溶液。取上述标准储备溶液，分别用甲醇稀释定容，配制成质量浓度分别为1 000、600、200、100、40和10 mg/L的标准系列溶液。过0.45μm微孔滤膜，装入液相样品瓶中备用。

　　1.2.3供试品溶液配制

　　A系列样品：准确称取一定量的EGCG（98%）粉末，用少量去离子水溶解完全后，和爽肤水/乳/霜骨架配方混合均匀，即得含有1%EGCG的爽肤水/乳/霜样品。

　　B系列样品：准确称取一定量的EGCG磷脂复合物，用少量去离子水溶解完全后，和爽肤水/乳/霜骨架配方混合均匀，即得含有1.2%EGCG磷脂复合物的爽肤水/乳/霜样品。

　　精密称取待测样品0.7 g左右（精确到0.000 1 g），于10 mL棕色容量瓶中，加80%甲醇至8 mL左右，涡旋30 s，超声20 min，取出后用80%甲醇定容，混合均匀，过0.45μm滤膜，装入液相色谱进样瓶备用。

　　2结果与讨论

　　2.1线性关系的考察

　　分别将1.2.2中的标准系列溶液（10、40、100、200、600、1 000 mg/L），按照1.2.1中的色谱条件进行测定，记录色谱图数据。以峰面积为纵坐标，EGCG质量浓度为横坐标进行线性回归，其中线性质量浓度为10~1 000 mg/L，得到的回归方程和相关系数为：Y=12 151X+53 241（R2=0.999 6），线性关系良好，该法具有良好的精密度、重复性和稳定性。

　　2.2精密度考察

　　取1 000 mg/L的EGCG对照品溶液，按照1.2.1中的色谱条件进行测定，连续进样6次，记录色谱图数据。结果表明，EGCG的保留时间波动小于0.1 min，EGCG峰面积的相对标准偏差（RSD）为1.25%，表明本方法精密度良好。

　　2.3重复性考察

　　取同一批供试品溶液，按照供试品制备方法平行制备6份溶液，按照1.2.1中的色谱条件进行测定，记录色谱图数据。计算得该批供试品中EGCG含量的RSD为0.84%，表明本方法重复性良好。

　　2.4稳定性考察

　　取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24 h进样，按照1.2.1中的色谱条件进行测定，记录色谱图数据。计算得该供试品中EGCG含量的RSD为0.61%，表明本方法稳定性良好。

　　2.5加样回收率

　　精密量取同一批供试品（A系列爽肤水）6份，每份1 g左右，置于5 mL EP管中，精密加入1 mLEGCG对照品溶液（质量浓度10 g/L），混匀。按照1.2.1中的色谱条件进行测定，记录色谱图数据。计算得EGCG平均加样回收率为92.27%，RSD为1.18%，结果见表1，表明本方法具有良好的回收率。

　　经方法学验证，利用HPLC法检测EGCG含量的方法线性、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求，为化妆品不同剂型及原料中EGCG的质量控制和深入研究提供了依据。

　　2.6样品测定

　　分别取绿茶磷脂复合物原料和样品供试品溶液10μL进样，按照1.2.1中的色谱条件进行测定，记录色谱图数据。以外标法计算，结果见表2。

　　2.7长期稳定性考察

　　将制备好的A、B系列样品每个都一分为二，分别于4℃和45℃条件下放置3个月，并分别在0、2、4、8、12周时取样测定EGCG含量，结果见表3，EGCG含量变化率见表4。结果表明，添加EGCG粉末的样品比添加EGCG磷脂复合物的样品要稳定，但整体上除了添加EGCG粉末的爽肤水外，其余体系对EGCG都是不稳定体系，显示出很高的不稳定性。

　　3结论

　　1）本法易于操作，样品处理简单，重现性好，灵敏度高，结果可靠，有利于化妆品不同剂型及原料中EGCG的质量控制。

　　2）从添加有EGCG成分的爽肤水/乳/霜的长期稳定性考察实验结果可知，添加有EGCG磷脂复合物原料的爽肤水/乳/霜，极不稳定，EGCG最好以纯品形式添加；4℃样品要比45℃样品稳定性好，说明温度对其影响很大；EGCG在爽肤水中的稳定性比在乳液和膏霜中的稳定性好，说明化妆品不同剂型对EGCG稳定性也有影响。

　　总体看来，EGCG直接添加到化妆品中，随着时间推移，含量下降较大，低温放置更有利于稳定。正因EGCG的稳定性不佳，其作为功效成分更要做到足量添加。

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