摘要：文章以注射用脑蛋白水解物30 mg为模型药，研究影响注射用脑蛋白水解物冻干粉针剂复溶后澄清度的生产工艺因素。以冷冻干燥结束后的样品澄清度为考察目标，进行生产工艺条件优化。结果表明，对于多肽类药物，影响澄清度的主要因素为预冻速率、解析干燥时间及药液配制温度，而一次升华温度、产品pH及骨架剂浓度对复溶后澄清度的影响不明显。

　　关键词：脑蛋白；冷冻干燥；澄清度

　　注射用脑蛋白水解物的原研产品是“施普善”（脑蛋白水解物注射液），由奥地利依比威大药厂生产，是一种含有多种氨基酸、肽类和少量低分子蛋白质的混合制剂，在改善脑功能方面应用较为广泛[1]。施普善于1954年在奥地利首次获批上市，如今已在全球50多个国家应用。注射用脑蛋白水解物为冷冻干燥无菌粉末，多采用甘露醇作为骨架剂，规格分为30 mg（以N计）和60 mg（以N计）。国家药品标准规定，其复溶后溶液应澄清无色。

　　本研究针对可能影响注射用脑蛋白冻干粉针复溶后澄清度的生产工艺因素设计全面试验，并根据试验结果选出最优生产条件；以最优生产工艺制备样品后进行稳定性考察，确定其可行性，这一研究可为商业化生产提供保障，并为其他多肽类冻干粉针剂的生产研究提供借鉴。

　　1仪器与试药

　　1.1仪器

　　LYO-0.5型真空冷冻干燥机（上海东富龙）；YB-Ⅱ型澄明度检测仪（天津天河）；L-8900型氨基酸分析仪（日本日立）；UltiMate 3000型高效液相色谱仪（赛默飞世尔）；K9860型全自动凯氏定氮仪（山东海能）；FE-20型pH计（梅特勒）。

　　1.2试药

　　脑蛋白水解物溶液（河北智同生物制药股份有限公司，批号：0240101-1)；甘露醇（广西南宁化学制药有限责任公司，批号：F165A)；盐酸、硫酸、溴甲酚绿、乙醇、硼酸、硫酸铜、硫酸钾均为分析纯。

　　胶塞（注射用冷冻干燥无菌粉末用卤化丁基橡胶塞，江阴市海华橡塑有限公司，批号：221120），玻璃管制注射剂瓶（西林瓶）（成都平原尼普洛药业包装有限公司，低硼硅，10 mL，批号：401305）。

　　2方法与结果

　　2.1溶液配制及样品的制备

　　样品制备环境：配制为C级；灌装为B+A级；出箱为B+A级。样品制备：将冻干骨架剂甘露醇100 g溶于脑蛋白水解物溶液1 000 mL中，用NaOH调至pH 6.9～7.5，经两层0.22μm滤膜过滤即得配制液，其质量浓度为12 mg/mL（以N计）；灌装到西林瓶中并半加塞，装量2.5 mL/支，然后冻干，冻干完成后压塞出箱。

　　2.2澄清度检查法

　　澄清度检查按照《中华人民共和国药典（2020年版）》第四部规定的“澄清度检查法”第一法（目视法）进行。检查方法：先取出箱后的注射用脑蛋白水解物样品，加适量注射用水复溶得溶液，取部分溶液置于比浊用玻璃管（无色透明、内径16 mm、平底）中；然后在澄明度检测仪上观察溶液的澄清度，正常情况应与注射用水相同或不超过0.5号浊度标准液的浊度。

　　2.3冻干曲线对澄清度的影响试验

　　2.3.1共晶温度

　　共晶温度是指溶液中所有溶质同时结晶析出，并与剩余溶剂形成均匀固态混合物时的最低温度。冻干工艺中预冻温度和一次升华温度的设计均需参考共晶温度，预冻样品温度必须低于共晶温度，一次升华样品温度不能高于共晶温度。该样品的共晶温度约为-23℃。

　　2.3.2进箱温度

　　按“2.1”项下的方法配制药液，调节pH至7.4，灌装2.5 mL，半加塞，得样品100支。预冻进箱温度分别为-40℃、-10℃、20℃；-40℃保温至产品完全冻结，一次升华至水线消失，解析干燥至压力升测试合格。冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度，-40℃进箱的样品均合格，其他两个样品均存在不合格情况。结果表明，预冻速率对澄清度有明显影响。

　　2.3.3一次升华温度

　　按“2.1”项下的方法配制药液，调节pH至7.4，灌装2.5 mL，半加塞，得样品100支。在-40℃条件下进箱，-40℃保温至产品完全冻结；分别在-15℃、-10℃、0℃、5℃条件下一次升华至水线消失；解析干燥至压力升测试合格。冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度，所有样品均合格。结果表明，一次升华温度对澄清度无明显影响。

　　2.3.4解析干燥温度选择

　　按“2.1”项下的方法配制药液，调节pH至7.4，灌装2.5 mL，得样品100支。在-40℃条件下进箱，-40℃保温至产品完全冻结；5℃一次升华至水线消失；分别在10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、40℃条件下解析干燥至压力升测试合格，冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度，所有样品均合格，详见表1。结果表明，解析干燥温度对澄清度无明显影响。

　　2.3.5再干燥（二次升华）时间选择

　　按“2.1”项下的方法配制药液，调节pH至7.4，灌装2.5 mL，得样品100支。在-40℃条件下进箱，-40℃保温至产品完全冻结；5℃一次升华至水线消失；在40℃条件下解析干燥，时间分别持续3 h、5 h、8 h、10 h。冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度，结果再干燥3 h、5 h样品合格，8 h、10 h均有样品不合格。结果表明，在40℃下进行解析干燥，干燥时间对澄清度有明显影响。

　　2.3.6冻干曲线的确定

　　进箱温度-40℃,预冻温度-40℃,一次升华温度5℃,解析干燥温度40℃,解析干燥时间3 h。

　　2.4配制工艺对澄清度的影响试验

　　2.4.1药液pH

　　按“2.1”项下的配比和方法进行配制，不同pH药液各100 mL，pH分别调至6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5，装量2.5 mL，各灌装100支，同时入冻干箱，按“2.3.6”项下的冻干曲线冻干；冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度和pH。结果澄清度均合格，pH冻干前后基本不变，详见表2。结果表明，药液配制时pH对冻干后样品澄清度无明显影响，冻干过程对样品pH无明显影响。

　　2.4.2配制水温

　　按“2.1”项下的配比和方法进行配制，配制过程中药液温度分别是10℃、25℃、35℃、55℃,装量2.5 mL，各灌装100支，同时入冻干箱，按“2.3.6”项下的冻干曲线冻干；冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度。结果10℃、25℃均有样品不合格，35℃、55℃样品合格，表明样品配制温度对澄清度有明显影响。

　　2.5骨架剂浓度对澄清度的影响试验

　　按“2.1”项下的方法进行配制，骨架剂甘露醇用量分别是25 g、50 g、75 g、100 g、125 g、150 g，溶于1 000 mL脑蛋白水解物溶液中，装量2.5 mL，各灌装100支，同时入冻干箱，按“2.3.6”项下的冻干曲线冻干；冻干结束后压塞出箱，检查样品澄清度。结果均合格，表明骨架剂浓度对澄清度无明显影响。

　　2.6稳定性试验

　　加速试验：按“2.1“项下的配比和方法进行配制，配液温度控制在55℃,冻干曲线按“2.3.6”项制备3批样品，按照上市包装，在温度40±2℃、相对湿度75±5%的条件下放置6个月。分别在放置初始和每月月末取样，考察澄清度、pH、高分子量物质和含量。结果表明，各项指标与0月比较均无明显变化，样品稳定。

　　3讨论

　　注射用脑蛋白水解物的澄清度受预冻速度和配制温度的影响较大。该产品组分为氨基酸和多肽，组分结构复杂，不易形成固定的冰晶结构，需要骨架剂作为“晶种”诱导其结晶。同时，样品组分在冷冻过程中会发生一定程度的聚集，聚集后溶解度显著降低，而组分溶解度差就意味着药品澄清度不佳。因此，预冻时需要使样品快速达到共晶温度并迅速结晶，从而避免组分过度聚集。多肽类物质在冷冻条件下会发生一定程度的团聚。若配制温度较低，团聚的多肽物质可能未完全分散，再经过冻干后可能加重聚集程度，从而造成复溶后溶液澄清度不合格，提高配液温度可缓解或消除此情况。

　　本品澄清度与预冻降温速率、解析干燥时间及配液温度有关，降温速率过慢、药液配制温度过低、二次升华高温时间过长均会导致澄清度不合格，而与一次升华温度、药液pH、骨架剂浓度无关。加速6个月的稳定性考察结果表明，样品稳定，能为工业化大生产提供保障。

参考文献

　　［1］谭之磊,耿雪,盛子晗,等.脑蛋白水解物的应用、制备工艺及质量标准研究进展［J］.河北大学学报(自然科学版),2025,45(4):378-388.