摘要：优化徐黄合剂最佳提取工艺并建立制剂含量测定方法。以黄芪甲苷含量为提取工艺及含量测定评价指标，采用 L9(34) 正交试验法，选取加水量、煎煮时间及煎煮次数为考察因素确定最佳提取工艺，并考察常压浓缩和减压浓缩对黄芪 甲苷含量的影响。另外建立黄芪甲苷高效液相色谱测定方法并进行方法学考察。结果显示，最佳提取工艺为加 6 倍量水， 沸后提取 1 h，提取 2 次；两种不同的浓缩方法对制剂含量影响无显著性差异；黄芪甲苷在 0.048 16～0.963 20 mg/mL 范围 内线性关系良好，阴性样品无干扰，精密度、重复性、稳定性测得的 RSD<3%；平均加样回收率为 101.85%(RSD=2.54%， n=9)，表明该含量测定方法灵敏、准确。

　　关键词：徐黄合剂；正交试验；黄芪甲苷；含量测定

　　0 引言

　　徐黄合剂，本方来源于上海交通大学医学院附 属瑞金医院中医科、名老中医夏翔教授的多年临床经 验，由黄芪、徐长卿、蒲黄、淫羊藿四味药组成，具有益 气活血利脉，温阳消斑除瘀的功效。现代药理学研究 表明[1]，该方活血化瘀、保护心肌、调节血脂、调节血 糖的功效，对气虚血瘀证型冠心病、糖尿病性下肢动 脉硬化闭塞症及大血管病变有良好的治疗作用，已在 医院广泛应用多年。徐黄合剂重用黄芪为君药，使脾胃 之元气得以大补，从而令气旺而血行，瘀去则络通[2]。 故在现代中药制剂研究中，以君药黄芪中的主要成分 黄芪甲苷为制剂工艺和含量测定的主要考察指标，采用正交试验方法确定最佳提取工艺并初步建立含量 测定方法。本试验为最大程度地保留原制剂的特色， 拟将其制成合剂，通过提取、浓缩等工艺，提高制剂有 效成分含量，减少药物服用量，从而方便服用及携带， 为后续大量生产质量稳定、可控的徐黄合剂提供实验 依据。

　　1 试验药品及主要仪器

　　1.1 仪器

　　高效液相色谱仪(HPLC，岛津公司，LC-2020PLUS)， 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 (HPLC-ELSD，大连 依利特分析仪器有限公司，ELSD-UM5000)，电子分析 天平 (梅特勒托利多公司 FA104)。

　　1.2 试药

　　黄芪、徐长卿药材购于上海同济堂药业，蒲黄、淫 羊藿苷药材购于安徽盛海堂中药饮片有限公司，所有 药材在使用前经鉴定，均符合《中药药典》2020 版各 药材项下相关规定。黄芪甲苷对照品 (中国食品药品 检定研究院，批号 120924)；含量测定用甲醇为色谱 纯，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 徐黄合剂制备工艺优化

　　2.1.1 正交实验设计

　　按处方比例称取黄芪、徐长卿、蒲黄、淫羊藿药 材，以 A 加水量 (倍)、B 煎煮时间(h)、C 煎煮次数 (次) 为主要考察因素每个因素设置三个水平，选用 L9(34) 正交试验设计表安排试验，提出的药液进行过滤、合 并、浓缩至相同体积。采用高效液相色谱法测定制剂 中黄芪甲苷含量，并以之为主要参考指标，优化提取 工艺，各因素水平设计如表 1 所示，试验及方差分析 结果如表 2 和表 3 所示。

　　由正交试验结果方差分析可知，在设计水平范围 内，各样品比较均无显著性差异。采用直观分析，以黄 芪甲苷为指标所得最优结果为 A2B2C3。对于黄芪甲 苷来说，该成分一般在实验室中可以采用索氏提取的 方法，通过多次回流提取来提高提取效率。但在实际 大批量生产过程中，从省时节能、降低成本方面综合 考虑，最终确定徐黄合剂提取工艺条件 A2B1C2，即 加入 药材 6 倍量的水，每次提取 1 h，共提取 2 次。

　　2.1.2 验证试验

　　按 照处方 比例称取制剂所需的药材，加入 6 倍 量的水，浸泡 30 min，煎煮 2 次，每次提取沸后保持 1 h， 趁热过滤，合并药液，浓缩至 250 mL。测得 3 批样品 黄芪甲苷含量分别为 0.214、0.218 和 0.216 mg/mL，RSD  为 0.93%，结果表明在该制备工艺条件下，制剂中黄 芪甲苷含量较稳定，工艺合理、可行。

　　2.1.3 浓缩工艺研究

　　按处方量称取全方药材，根据最优提取工艺， 合并所有提取的药液，平行制备 12 份供试品，供试 品 1 ～6 采用常压浓缩，供试品 7 ～ 12 采用减压浓缩 (-0.085 MPa，60～80  ℃)。采用 t 检验方法 (Origin 7.5  统计软件) 对两种工艺条件下测定的黄芪甲苷转移率 比较，结果两种浓缩工艺对黄芪甲苷含量无显著影响 (P>0.05)，且黄芪甲苷转移率均较高，结果如表 4 所示。

　　2.2 样品含量测定方法学

　　2.2.1 色谱条件

　　色 谱柱：以十八烷基硅烷键合硅 胶 为填 充 剂 (OS034223，4.6 ×250 mm, 5 μm)；流动相组成为乙腈-水 (34 ∶66)；流速为 1.0 mL/min；ELSD 参数：蒸发区温度为 90 ℃;雾化区温度40 ℃;气流速度为 1.50 mL/min；进样体 积为 20 μL。理论塔板数按黄芪甲苷计算，不低于 4 000。

　　2.2.2 样品溶液的制备

　　对 照 品溶液制备：精密称定黄芪甲苷对照品 9.96 mg，加甲醇溶解，最后定容至 10 mL 摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。

　　供试品溶液制备：精密移取徐黄合剂 20 mL，加 入水饱和正丁醇 20 mL，摇匀萃取，按照上述方法萃取 3 次，分取、合并正丁醇层，加入氨试液 30 mL 洗涤，重 复洗涤 3 次。滤液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至 5 mL。0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得。

　　阴性样品溶液制备：按处方比例去除黄芪药材， 同上述供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

　　2.2.3 专属性试验

　　分别吸取“2.2.1”项下 3 种样品溶液，注入 HPLC， 阴性样品在对照品相应位置无其他封出现，结果表 明：该制备方法及色谱条件下阴性样品无干扰。结果 如图 1 ～图 3 所示。

　　2.2.4 标准曲线的准备

　　以“2.2 项下”对照品溶液为母液，制备浓度分别为 0.048 16 mg/mL、0.096 32 mg/mL、0.192 6 mg/mL、 0.481 6 mg/mL、0.963 2 mg/mL 的标准品溶液。以黄芪 甲苷量的自然对数 (lnm) 为横坐标 (X)，色谱峰面积的 自然对数 (lnA) 为纵坐标 (Y)，并进行回归计算，求得黄 芪甲苷回归方程为 y=1.614 9 x +1.341 9，r²=0.999 4， 线性范围为 0.048 16～0.963 2 mg/mL。

　　2.2.5 精密度试验

　　精密吸取同一对照品溶液，连续进样 6 次，记录 峰面积，计算黄芪甲苷 RSD，结果表明仪器精密度良好。

　　2.2.6 重复性试验

　　精密移取徐黄合剂，按照“2.2.1”项下供试品制 备方法制备 6 份样品，过 0.45 μm 微孔滤膜后，注入 HPLC，测定黄芪甲苷含量，测定表明该样品处理方法 和含量测定方法重复性良好，制剂中黄芪甲苷平均含 量为 0.213 8 mg/mL。数据如表 6 所示。

　　2.2.7 稳定性试验

　　取制备的徐黄合剂适量，按照“2.2.1”项下供试 品制备方法制备样品溶液，过 0.45 μm 微孔滤膜后， 将供试品溶液保存于室温下，每隔 2 h 或更长的时间 测一次黄芪甲苷的峰面积，并计算 RSD 值，结果样品 在 12 h 内稳定性良好，如表 7 所示。

　　2.2.8 准确性试验

　　取已知浓度的徐黄合剂 9 份，分别精密加入低、 中、高三个剂量对照品溶液，制成供试品溶液，HPLC  法测定峰面积，计算样品回收率。经计算平均回收率 为 101.84%，RSD 为 2.45%，结果表明该分析方法准 确性符合规定，如表 8 所示。

　　3 讨论

　　徐黄方剂在长期的临床实践中取得显著的治疗 效果，扩大其临床应用是必然趋势。传统汤剂在使用 中，存在服用不便、质量难控、量大难喝、携带不便等缺点[3]。综合考虑临床应用及产品特点，本实验在徐 黄方汤剂基础上开发徐黄合剂。合剂能保留方药中多 种有效成分，以发挥中药多组分、多靶点的治疗特点， 并且合剂口服吸收快，生物利用度高，可达到快速缓 解患者病情的目的[4-5]。

　　黄芪甲苷是徐黄合剂中君药黄芪的主要有效成 分，具有良好的心脏保护作用，在动物实验研究中，其 表现出明显的改善心脏功能与血流动力学作用[6]，加 强心肌收缩力的同时[7]，不增加心肌耗氧量，减少心 肌梗死面积，降低心律失常发生率等，因此黄芪甲苷 可作为药效指标性成分之一。本试验采用的黄芪甲苷 含量测定方法主要参考了《中国药典》2020 版一部黄 芪项下含量测定相关内容，试验结果表明黄芪甲苷在 0.048  16～0.963 2 mg/mL 范围内呈现出良好的线性 关系，阴性样品无干扰，仪器精密度、方法重复性、准 确性均在相关要求范围内，说明黄芪甲苷含量测定方 法成熟[8-9]、稳定、重复性好，能够满足工艺考察要求， 故本研究选取黄芪甲苷为含量测定评价指标，研究结 果可作为制剂质量标准研究的一部分。

　　徐黄组方中，与其功能主治相关的化学成分具有 较好的水溶性，宜采用水提法，以保留原方特色和药 效物质基础。同时水提法具有操作相对简单，生产成 本较低，药物制剂具有巨大的经济优势。但中药复方 制剂成分复杂，提取工艺的优劣直接影响有效成分的 控制及临床疗效[10]。本实验选取加水量、提取次数、煎 煮时间三个因素，采用正交试验法对水提工艺条件进 行考察，试验结果通过方差分析和直观分析，确保提 取工艺的可靠和合理。本试验结果表明，3 个因素对制 剂的提取无显著影响，最终从生产效率、资源节约及实 际生产操作等因素综合考虑，确定徐黄合剂最佳提取 工艺为加入药材量 6 倍水，浸泡 30 min，煎煮沸后 1 h， 提取 2 次。验证试验结果表明，该提取工艺稳定，为今 后徐黄合剂大批量生产建立了初步工艺流程。

　　综上，本研究以临床上疗效确切的验方徐黄方为 研究对象，将其设计制备成合剂，既符合传统用药特 点，又满足开发有效成分明确的现代中药理念，符合 中药现代化发展方向。研究影响徐黄合剂提取工艺的 主要因素，优化制剂制备工艺，利用现代分析技术明 确制剂有效成分含量，为生产大批量稳定性高、有效 成分可靠、质量可控的徐黄合剂提供实验基础。

　　参考文献：

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